PCR引物设计

引言 　　聚合酶链反应PCR使不同来源的特异核酸片段的分离及分析发生了革命，但应用PCR分 离，分析特定DNA区域需要了解靶区域的边侧序列，这使扩增局限于已知DNA序列。我 们研究了从复杂的人和其他种DNA混合物中扩增未知DNA序列。特别是，我们应用PCR 分离出了在啮齿类细胞背景中含有人染色体片段的体细胞杂合体中的人DNA。使存留 在杂合子中的人特异区域序列得到分离和鉴定，避免了克隆DNA库和用 ...

一、目的了解多聚合酶链反应DNA 扩增技术的基本原理和实验应用，掌握PCR反应基本技术。二、原理PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应是1986 年由Kallis Mullis 发现。这项技术已广泛地应用于分子生物学各个领域，它不仅可用于基因分离克隆和核酸序列分析，还可用于突变体和重组体的构建，基因表达调控的研究，基因多态性的分析，遗传病和传染病诊断，肿瘤机制 ...

临床使用PCR定量检测核酸，由于手工操作多、影响因素多，质量控制比较困难，在增强操作能力和仪器设备的基础上，选择好的PCR试剂是保证检测质量非常重要的关键。 一、通过实时荧光PCR扩增曲线评价 【扩增曲线图解读】实时荧光PCR由于每个循环要监测荧光信号值，因此都有拟合好的扩增曲线，通过扩增曲线可以很直观、准确的了解和评判试剂质量的好坏。认真研究扩增曲线图可以看出非常多的问题，基本上可以判定试剂的质 ...

临床使用PCR定量检测核酸，由于手工操作多、影响因素多，质量控制比较困难，在增强操作能力和仪器设备的基础上，选择好的PCR试剂是保证检测质量非常重要的关键。 一、通过实时荧光PCR扩增曲线评价 【扩增曲线图解读】实时荧光PCR由于每个循环要监测荧光信号值，因此都有拟合好的扩增曲线，通过扩增曲线可以很直观、准确的了解和评判试剂质量的好坏。认真研究扩增曲线图可以看出非常多的问题，基本上可以判定试剂的质 ...

实验中的一些好习惯加入试剂之前把它混匀一下以免放置时间长了浓度不均移液枪用完之后要归到最大计量的位置，防止久而久之弹簧失去弹性一定要记着关水浴箱，切记切记多和大家讨论，同时多关注别人讨论的经验，这几乎是最快提高的捷径了所有的试剂都自己配，出了问题才好找原因防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿 ...

仅仅是扩增的方法不同而已一个是普通的PCR一个是RTPCR.如果需要鉴定染色体的DNA序列有无差别或基因突变可以用PCR-SSCP我曾做过这方面的实验检测病人有无基因的点突变同时扩增病人和正常人的基因片段然后做sscp只要有一个核苷酸的区别变性SDS-PAGE后条带就会有很大的区别.而RTPCR-SSCP 检测的是cDNA片段有无区别的实验。需要注意的是SSCP技术通常用到银染显色，silver ...

Two long PCR steps:First round of the nested PCR step of the end point dilution procedure to quantitate the cDNA.First round of the nested PCR step of the limiting dilution step to amplify single temp ...

PCR from Tissue Reference:Klimyuk et.al. 1993 Plant J. 3:493-494 Last updated: 1/27/00 By: Kay Schneitz collect piece of tissue (e.g. pieces of a leaf or flower) in Eppendorf tube containing ...

PCR from Tissue Reference:Klimyuk et.al. 1993 Plant J. 3:493-494 Last updated: 1/27/00 By: Kay Schneitz collect piece of tissue (e.g. pieces of a leaf or flower) in Eppendorf tube containing ...

Welcome to MethPrimer MethPrimer is a program for designing bisulfite-conversion-based Methylation PCR Primer. Currently it can design primers for two types of methylation mapping PCRs: 1) Methylation ...

Application: Quantitative RT-PCR is used to quantify mRNA in both relative and absolute terms. It can be applied for the quantification of mRNA expressed from endogenous genes and transfected genes of ...

RT-PCR Analysis Solutions10X RT Buffer10X PCR Buffer100 mM Tris pH 9.0500 mM KCl1% Triton X-10025 mM MgCl2 use at a concentration of 1.5 mMLysis Solution4M GuSCN 250 g guanidine thiocyanate25mM Na cit ...

RT-PCR Analysis Solutions10X RT Buffer10X PCR Buffer100 mM Tris pH 9.0500 mM KCl1% Triton X-10025 mM MgCl2 use at a concentration of 1.5 mMLysis Solution4M GuSCN 250 g guanidine thiocyanate25mM Na cit ...

本文讨论的范围包括RNA酶保护分析，northernblot，原位杂交，半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不谈具体protocol，是因为各种书籍和kit说明书上都有，主要说一些原则，而且大部分是失败和成功的经验，还有小组讨论结果以及各种书里七零八落看的内容，希望对大家有用。 基因表达的定义：说到基因表达，是指RNA，还是蛋白？是指mRNA还是包括风头正旺的非编码RNA？mRNA还有不翻 ...

RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求： 1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2 浓度、退火温度能解决的。1）RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？必须 在RT时，引物 ...

SSCP原理：sscp称为单链构象多态性，它是基于DNA构象来检测PCR产物单链碱基微小差异的方法，因其检测敏感，快速和所需装置简便而在分子生物学各个领域广泛应用。但该方法的试验结果受多种因素的影响，如：PCR产物，温度，电压，PAGE胶的浓度和交联度等，因而重复性比较差。因此在做SSCP时要注意各种条件的一致性。如果有酶切位点的话最好用RFLP方法检测DNA 多态，或是用SSCP与RFLP两种方 ...

SSCP原理及特点 日本Orita等研究发现，单链DNA片段呈复杂的空间折叠构象，这种立体结构主要是由其内部碱基配对等分子内相互作用力来维持的，当有一个碱基发生改变时，会或多或 少地影响其空间构象，使构象发生改变，空间构象有差异的单链DNA分子在聚丙烯酰 胺凝胶中受排阻大小不同.因此，通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，可以非常敏锐地将构象上有差异的分子分离开.作者称该方法为单链构象多态性 ...

生物试剂库：试剂库：http://www.bioon.com.cn/reagent/ 超过20万种试剂产品，包括化学试剂，分子生物学试剂，细胞生物学类试剂 PCR系列栏目：PCR/RT-PCR/qPCR PCR方法相关产品:核酸酶 聚合酶 反转录酶限制性内切酶 PCR克隆试剂盒 常用克隆载体 克隆试剂盒 AFLP分析 SNP基因分型 RACE试剂盒 SAGE 试剂盒 电泳设备 紫外设备 普通PC ...

1.引物是如何合成的？目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种 主要都是由ABI/PE 公司生产，无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是将DNA固定在固相载体上完成DNA链的合成的，合成的方向是由待合成引物的3'端向 ...

PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA，然后才进行自动热循环，最后进行产物鉴定与分析。引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行，临床应用只需购买PCR检测试剂盒就可开展工作，PCR自动热循环中影响因素很多，对不同的DNA样品，PCR反应中各种成份加入量和温度循环参数均不一致。现将几种主要影响因素介绍如下。 　　一、温度循环参数　　在PCR自动热循环中，最关键的因素是变 ...