其他PCR技术

大家都是搞pcr的，觉得这个帖子不错所以就转载了！实验室最危险的17种物质。。。慢性毒性，最易忽视~各位兄弟姐妹们务必小心1.DMSO：DMSO是二甲基亚砜， 用途广泛。用作乙炔、芳烃、二氧化硫及其他气体的溶剂以及腈纶纤维纺丝溶剂。是一种即溶于水又溶于有机溶剂的极为重要的非质子极性溶剂。对皮肤有极强的渗透性，有助于药物向人体渗透。也可作为农药的添加剂。也是一种十分重要的化学试剂。DMSO也是一种渗透性保护剂，能够降低细胞 ...

PCR常见问题总汇PCR产物的电泳检测时间　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底 ...

今天到PCR技术讨论版逛逛，看到pgming2004的精华原创贴，下载附件后读了一遍佩服楼主善于总结的同时也想补充一点个人不同的看法。RNA 抽提（RNA Extraction）原文：三，抽提步骤1． 匀浆化作用取约100mg鼠脑组织放于玻璃研磨器内，先加0.2ml的Trizol溶液，研磨组织后，倒入1.5mlEP管中，再在研磨器内加入0.8ml的Trizol溶液洗，后全部再倒入EP管中。颠倒混匀10下，室温静置5分钟。2． 分离阶 ...

检索途径　　在进行文献检索时，我们可根据文献的内部特征或外部特征进行检索。　　文献的内部特征是指文献所论及事物，所提出的问题，涉及的基本概仿即主题以及文 献内容所属的学科范围都是文献的内部特征；　　文献的外部特征包括题名，作者，作者单经以及某种特殊文献自身的特征标识。如专 种文献的专利另科技报告的报告号，标准文献的标准号等等。　　分类途经：从学科角度将文献内容划分到某一学科内，根据文献内容所属的类检索文 献的途经即为分类途经，检索工具设置的分类 ...

iCubate全自动多重微生物核酸检测系统-----扩增子拯救多重PCR技术(ARM-PCR)美国iCubate公司研究开发了革新的扩增子拯救多重PCR技术——arm-PCR，成功解决了多重微生物核酸检测中靶点不兼容的问题，并创新性设计了一次性全封闭卡盒，以及配套的卡盒处理仪、卡盒阅读仪和控制软件，整合形成现在的iCubate 全自动多重微生物核酸检测系统。同时，该系统还免费提供一个开放性的多重PCR检测试剂开发平台i ...

PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.污染原因　　(一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染.　　(二)PCR试剂的污染:主要是由 ...

我进实验室后做的以一个实验就是PCR，书上说PCR极易污染，推荐实验过程中要戴口罩帽子手套，要为PCR开辟一个专区等等。受了这样的教诲，我做实验时当然一点都不马虎，每次PCR都做阴性对照和阳性对照，从来都没有污染过，后来渐渐就对书上说的那一套不以为然了，心里说：我在阴性对照里面吐点口水，看你有没有条带出来（不过没有真这么干过呵呵）。后来我做PcR就不再作对照了。在后续的构建重组质粒和测序中也没有出现什么问题。我越 ...

标 题: PCR实用技巧从同学那里copy的，与大家共享：增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些条件a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b. GC% 40%~~~~60% c. 5'端和中间序列要多GC,以增加稳定性d. 避免3'端GC rich, 最后3个BASE不要有GC,或者最后5个有3个不要是G ...

因特网上分子生物学的免费软件作者：pfdbs对研究分子生物学的人来说，因特网是一个大宝藏。因特网上有大量的分子生物学免费软件与各种蛋白质、核酸和酶的数据库，应用它们，可以极大地推动我们的研究工作。　　因特网上的免费工具软件有在线与离线两种形式。对于在线工具软件，只要通过浏览器，输入一定的信息，便可得到相应结果，例如二级序列分析、PCR引物设计等信息。而离线工具软件，只要下载了这个软件，便可在本地*上使用。当你在互联网上 ...

虽然长了些, 但耐心看完,应该对你的问题有所帮助各位战友 我们来聊聊PCR ：）PCR可以说是目前分子生物学实验中应用最为广泛的一种技术。从最初的在几个水浴锅里把试管放来放去，到现在各种先进的PCR仪， 到REAL TIME PCR。 设备是越来越先进，方法是越来越多，但基本的原理还是那套。然而实际操作中，仍然有很多的问题让人头疼。正好看到有人建议来个PCR讨论区，就信手来了这么一篇，希望能抛砖引玉 顺手牵羊 大海捞针 针锋相对 对对对 对不上来了.PCR的 ...

PCR片段拼接的SOE和SDL方法PCR技术（多聚酶链式反应）是现代分子生物学的一个巨大突破，它能在体外迅速、大量、灵敏地扩增基因片段。可是，经PCR技术扩增的大量相关基因片段如何能有效拼接，却是一个很值行探讨的问题。传统的方法是引入限制性内切酶位点，这不但操作繁杂，而有时为了构建限性位点还会影响解读三联密码的正确性。本介绍两种基因 拼接的新方法，即SOE和SDL法，就能巧妙地解决这个问题。SOE法1989年，Hor ...

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有价值但无法归入其他话题，就先单独放在这里吧。full sequence of pGEX-4T-1http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=323868&sty=1&tpg=48&age=0如何测等位和单倍型基因频率http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=636538&sty=1&tpg=7&age=0确诊丙肝http://www.dxy.cn/bbs/post/view ...

标 题: PCR实用技巧从同学那里copy的，与大家共享：增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些条件a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b. GC% 40%~~~~60% c. 5'端和中间序列要多GC,以增加稳定性d. 避免3'端GC rich, 最后3个BASE不要有GC,或者最后5个有3个不要是G ...

PCR产物的电泳检测时间　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时 ...

请各位战友看下面这段注释，来自NCBI:{LOCUS AY602989 704 bp DNA linear PLN 19-DEC-2006DEFINITION Trichoderma sp. zd 56 endochitinase 42 (ech42) gene, partial cds.ACCESSION AY602989VERSION AY602989.1 GI:52630747KEYWORDS .SOURCE Trichoderma sp. zd 56ORGANISM Trichoderma sp. zd 56Euk ...

有空将DGGE的给总结了一下，好辛苦哦如下了其中以这个最为精彩：请教用FISH和DGGE做污泥细菌分布那一更好？ ：http://www.dxy.cn/bbs/thread/566504其中可以看到好多的大侠啊，嘿嘿求助PCR DGGE ：http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=1157763&sty=3&keywords=dgge关于DGGE ：http://www.dxy.cn/bbs/post/vi ...

感觉很不错的网站，你可以找到你想要的实验方法，也是你解决实验中遇到问题的地方，protocol online试验方法在线http://www.protocol-online.org/http://www.bioprotocol.comhttp://www.protocol-online.netwiley公司的Current Protocol Online系列http://www.dxy.cn/bbs/post/view? ... p;keywords ...

Nat Med杂志于 2008.4.13在线发表了一篇文章，该文章报道了一种新的PCR技术 COLD-PCR 可补足常规PCR在检测DNA低水平突变中的不足，将革命性的转变常规PCR在遗传病检测，癌症，感染性疾病，产前诊断中的能力。Replacing PCR with COLD-PCR enriches variant DNA sequences and redefines the sensitivity of genetic testing.Li J, Wang L, Mamon H, Kulke MH, Be ...

1，降落PCR中引物TM相差过大如何设定退火温度http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=1383577&sty=3&keywords=%BD%B5%C2%E4PCRhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3004779_0.html2，降落PCR的结果分析http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/602867 ...