Real-Time PCR

1 样品RNA的抽提 ①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。 ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。 ③ ...

本次在线讲座重点介绍内参在real-time PCR病原体检测中的应用。Real-time PCR可快速、灵敏的检测病毒RNA和DNA以及细菌DNA，因此是许多应用的理想工具。为提高检测过程的安全性，协助对阴性结果的解读，应使用阳性内对照。 此次研讨会将介绍： 1. 病原体分子诊断中的挑战 2. 适用于不同病原体检测的各种内参 3. QIAGEN的新型内参，可用于实验室的不同检测 主讲人： Li ...

我们将演示如何使用GENEius试剂产品搜索功能在网站（www.thermo.com / Solaris）上订购合适的Solaris试剂，以及如何用Solaris试剂进行使用标准曲线法的定量PCR。

山东大学荧光定量PCR对比实验结果

如何评判荧光定量试剂质量

百泰克undefinedSYBR real-time PCR premixture 进行动物组织样品的实时荧光定量PCR

荧光定量PCR检测技术诞生至今已10多年的时间，而其应用一直都没广泛展开，究其原因，无外乎受制于相关仪器、试剂和技术的发展。近期，尤其是08年以来，仪器和试剂是遍地开花，这也使科研人员均跃跃欲试，都想借此技术使自己的研究能突飞猛进，发展势头通过查找每年所发表的文章数可一目了然。据有关统计，在 Medline 数据库中，用“Taqman” 或 ”real time PCR” 作为关键词检索，1996 年是19 篇，1999 年157 篇，到2003 年就高达2984 篇，2009年会是多少呢？

从菜鸟到高手—荧光定量qPCR手册 本文从real-time qPCR的发展史说起，包括real-time qPCR的原理，实验设计，实际操作（以ABI StepOne仪器，和北京百泰克生物技术有限公司的试剂为例），数据分析，常见问题五个方面，手把手教你从各个方面了解real-time qPCR，彻底从菜鸟到高手的飞跃。

由PCR发展出来的定量PCR技术，以专一性更高、可实时监控、可重复精确定量等优势而日益受到重视，越来越广泛应用于科研、检验、和诊断领域。其准确和快速的优势在各重要部门得到了广泛的采用。

病原检测方法及仪器是人感染猪流感防控的关键环节。实时荧光定量PCR分子诊断核酸检测技术在以往禽流感检测中被采用为国家标准并广泛使用。最新发布的美国CDC和我国卫生部法规都将实时荧光定量PCR确定为人感染猪流感实验室检测的确诊方法。

对扩增产物进行可重复性的定量长期以来一直是科学家和研究者的目标。传统的方法需要对终产物进行凝胶电泳分析。这种方法可以确定目的产物和竞争产物的大小，估算纯度，计算条带强度。然而，所用扩增试剂和体系的变动会造成扩增的终产物的重复性有较大的变动，成为这种方法的主要弊端。

对扩增产物进行可重复性的定量长期以来一直是科学家和研究者的目标。传统的方法需要对终产物进行凝胶电泳分析。这种方法可以确定目的产物和竞争产物的大小，估算纯度，计算条带强度。然而，所用扩增试剂和体系的变动会造成扩增的终产物的重复性有较大的变动，成为这种方法的主要弊端。

“Real-time PCR”的四个循环阶段

Real-time PCR 仪器使用（动画）

PCR的原理和应用视频

2－△△CT方法是相对定量real-time PCR的一种简便方法。本文介绍了该方法的推导，假设及其应用。本文还介绍了两种2－△△CT衍生方法的推导和应用及它们在实时定量PCR在的运用。

高性能的实时定量PCR和RT-PCR要求高性能的系统。易于使用的qPCR 超级混合物、一步和两步定量RT-PCR系统、以及荧光检测平台，在一个较宽的动态范围内提供更高的灵敏度和特异性，它们利用了最先进的技术，包括： 使用抗体介导热启动技术的Platinum ®　Taq DNA Polymerase提供在室温下组合PCR反应时更高的特异性和产量。 增加了热稳定性和半衰期的SuperScri ...

real time RT-qPCR 是检测样本中特定基因表达量的有效方法，包含逆转录步骤和定量PCR步骤。好的开始是成功的一半，获得高质量的、能正确反应样品中转录情况的RNA，对于其后的定量结果，自然是非常重要的。 Mikael Kubista，教授 R&D TATAA Biocenter主任： RNA质量包含两个方面：样品的纯度和RNA的完整性。样品纯 ...

This protocol describes the detailed experimental procedure for real-time RT-PCR using SYBR Green I as mentioned in Xiaowei Wang and Brian Seed (2003) A PCR primer bank for quantitative gene expressio ...

定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。　　广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型：（1）外参法+终产物分析。所谓“外参法”是指样本与阳性参照在两个反应容器内反应。这种类型没有对样本进行质控监测，易出现 ...