PCR技术原理

M-MLV第一链cDNA合成试剂盒-技术手册一、 试剂盒组成ComponentsSK2027SK20285×M-MLV Reaction Buffer100µl250µldNTP Mix,10mmol/L25µl55µlOligo-p(dT)18 Primer, 0.5µg/µl25µl55µlRandom Primer p(dN)9, 0.2µg/µl25µl55µlRNase Inhibitor (a), 40U/µl20µl50µlM-MLV Reverse Tran ...

常用的β-actin 引物序列human actin f ctc cat cct ggc ctc gct gt human actin r gct gtc acc ttc acc gtt cc product size:268 rabbit actin r agt gcg acg tgg aca tcc g rabbit actin f tgg ctc taa cag tcc gcc tag product size:295 mouse actin r cgt tga cat ccg taa aga cc mouse actin f aac agt ccg cct aga agc ac product size:281 rat actin f TCAGGTCATCACTATC ...

PCR-引物设计原则1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2.引物长度一般在15~30碱基之间。 引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。 3. ...

Primer4.10中文使用说明Primer Premier4.0是由加拿大的Premier公司开发的专业用于PCR或测序引物以及杂交探针的设计，评估的软件，和Plasmid Premier2.02一起是该公司推出的最新的软件产品。其主要界面同样也是分为序列编辑窗口（Genetank），引物设计窗口（Primer Design），酶切分析窗口（Restriction Sites）和纹基分析窗口（Motif）。这里我们主要介绍其引 ...

PCR-引物设计及软件使用技巧本文旨在介绍使用软件设计PCR引物的技巧。在PCR引物设计原则的基础上，详细介绍了两种常用引物设计软件的基本使用方法，并对其各自的优缺点进行了比较。一般性引物自动搜索可采用“PremierPrimer5”软件，而引物的评价分析则可采用“Oligo6”软件。自从1985年KarnyMullis发明了聚合酶链式反应以来，PCR技术已成为分子生物学研究中使用最多、最广泛的手段之一，而引物 ...

引物设计软件-Primer Premier 4.10Primer Premier4.0是由加拿大的Premier公司开发的专业用于PCR或测序引物以及杂交探针的设计，评估的软件，和Plasmid Premier2.02一起是该公司推出的最新的软件产品。其主要界面同样也是分为序列编辑窗口（Genetank），引物设计窗口（Primer Design），酶切分析窗口（Restriction Sites）和纹基分析窗口（Motif）。这里我们主 ...

引物合成介绍（1） 1.引物是如何合成的？ 目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产，无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。申能博彩公司采用的合成仪主要机型为ABI3900高通量合成仪，合成长链主要采用Beckman 1000M和PE8909 DNA合成仪，引物修饰和高OD数合成采用ABI394等。亚磷酰胺三酯法 ...

11.引物（含修饰）的分子量是如何确定的？答：非修饰的引物的Molecular Weight在随引物提供的报告单上都有明确的标示。如果需要估计一个引物的分子量按每个碱基的平均分子量为324.5，引物的分子量=碱基数 x 碱基的平均分子量。或按下列公式计算MW= (NA * WA) + (NC * WC) + (NG * WG) + (NT * WT) +(Nmod * Wmod) ＋（Nx * Wx）+( Nundefined Wi) +1undefined Ns� 62. NA, NG, NC, NT, Ni分别为引物中碱基A或G或C或T或I的数量，WA, WC, WG, W, Wi分别为引物中碱基A或G ...

引物合成介绍5.需要什么级别的引物？ 答：引物常用的纯化方式C18脱盐，OPC纯化，PAGE纯化，HPLC纯化。根据实验需要，确定订购引物的纯度级别。应用 引物长度要求 纯度级别要求一般PCR扩增 45 base PAGE诊断PCR扩增

Two-Step RT-PCR protocol We will provide both one-step and two-step protocols for RT-PCR. We recommend the two-step protocol for this class.In the one-step protocol, the components of RT and PCR are mixed in a single tube at the same time. The one-step protocol generally works well for amplifying targ ...

PCR-SSCP技术－哈尔滨医科大学实验原理 聚合酶链式反应-单链构象多态（Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism，PCR-SSCP）技术是在PCR技术基础上发展起来的，它是一种简单、快速、经济的用来显示在PCR反应产物中单碱基突变（点突变）的手段。该方法已被用做癌基因和抑癌基因突变的筛查检测，遗传病的致病基因分析和基因诊断，基因制图等领域。 在SS ...

随机引物PCR一．实验原理 聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction）简称PCR，它是一种DNA体外扩增技术。1985年美国的Mullis等人发明了PCR技术，在体外利用模板DNA 、特定的寡聚核苷酸引物和DNA聚合酶，通过DNA变性、复性和延伸过程合成一条互补的DNA链。反复重复这一过程，模板DNA就可得到大量扩增。在PCR过程中，DNA的延伸起初是用大肠杆菌的DNA聚合酶I（Klenow片段）来完 ...

荧光实时定量PCR技术初探摘要：少量的DNA 序列的准确定量曾经是一件很难很累的事情，不过real timePCR 的出现把它变为和普通PCR 差不多一样容易。原理是利用能特异标记PCR产物的荧光物质，显示PCR 产物的动态累积，得到S 型的扩增曲线；假设该曲线的前期PCR 符合指数性扩增，于是在单纯指数方程的基础上，通过比较产物积累的速度（时间）来间接比较（进而确定）初始模板的分子数。我们试验了标准曲线的制作，以及对免疫相关的目的基因I ...

Differential Display Technique and Its Application-差异显示技术(DD-PCR)及其应用 高等植物在其生命活动过程中，由于基因的选择性表达，决定了高等植物生命活动的多样性和连续性。在植物的生长、发育、衰老和死亡过程中，都有不同的基因起作用。因此，研究基因的选择性表达，掌握其对植物生命活动的调控，克隆"克隆新基因，是分子生物学的重要课题。　　1992年，Liang和Pardee［1］首次提出差异显示 ...

定量PCR Taqman探针设计要点自90年代Taqman探针诞生以来，虽然荧光探针（引物）不断有新的技术出现，但是作为一种经典的定量PCR技术，Taqman探针技术仍然是许多实验研究人员进行定量检测的首选，这主要是因为相对于SYBR荧光染料，Taqman探针具有序列特异性，只结合到互补区，而且荧光信号与扩增的拷贝数具有一一对应的关系，因此特异性强灵敏度高，而且条件优化容易；而相对于杂交探针，Taqman探针只要 ...

实时定量PCR方法对水中细菌RNA进行精确定量AppliedandEnvironmentalMicrobiology,June2004,p.3618�3623 AxelFey,1StefanEichler,1Se´bastienFlavier,2RichardChristen,2ManfredG. 摘要 定量PCR（Q－PCR）是一种对目的基因定量的快速高效的方法。在真核细胞里，定量－反转录－PCR（Q－RT－PCR）也在采用稳 ...

基因拼接--SOE法和SDL法PCR技术（多聚酶链式反应）是现代分子生物学的一个巨大突破，它能在体外迅速、大量、灵敏地扩增基因片段。可是，经PCR技术扩增的大量相关基因片段如何能有效拼接，却是一个很值行探讨的问题。传统的方法是引入限制性内切酶位点，这不但操作繁杂，而有时为了构建限性位点还会影响解读三联密码的正确性。本介绍两种基因 拼接的新方法，即SOE和SDL法，就能巧妙地解决这个问题。 SOE法　　1989年，Horton等人 ...

实时荧光定量PCR体系的设计与优化时荧光定量PCR以其精确、快速、方便，越来越多的应用在科研、临床及检验检疫的各个领域。但是定量PCR是对精确性要求很高的实验，不仅要求在实验前有比较完整的实验设计方案，而且实验的条件对实验结果的影响也非常大。这些都是很多老师与学生非常关心的问题，下面分别从这两个方面来对定量PCR实验做一些阐述。 定量PCR实验步骤（以mRNA为例）： 1.设计实验方案：例如对样品、实验组和对照组的一个实 ...

PCR在临床检验中的应用医学检验大致可分为形态学、生物化学、血清免疫学和分子生物学几大类，其分别代表几代实验诊断技术。60年代DNA双螺旋结构及半保留复制模式的出现，70年代基因重组及体外基因克隆技术、分子杂交技术的应用使分子生物学在疾病诊断中得到了长足的发展。特别是1985年Mullis发明了聚合酶链式反应（PCR）技术，使医学界真正兴起了基因诊断技术热，成为现代医学发展的又一里程碑。用于临床检验的PCR技 ...

PCR-SSCP(PCR-single strand conformation polymorphism) PCR 是 DNA 的聚合酶链式反应 ,SSCP 是单链构象多态性。 SSCP 一般都要采用 PCR 扩增的方法进行检测 , 故名 PCR-SSCP 。此项技术的原理是 , 不同序列组成的单链 DNA 或 RNA 在非变性聚丙烯散胶凝胶中电泳 , 会因其空间构象不同表现出不同的迁移率。因此 , 可以将基因组中特定的 DNA 片段用 PCR 方法扩增 , 然后变性成为单链 , 在非变性聚丙烯酷胶凝胶中进行电泳 , 与对照的 DNA 片段进行比较 , 只要它们之 ...