RNA提取实验

哺乳动物组织样品RNA的抽提最基本的要素是防止RNA在抽提过程中降解，以及尽可能得到最高的RNA抽提效率。以下介绍我们实验室认为最符合以上两个要素的抽提方法。

（1）取3 g样品，加入10% 样品重的多聚聚乙烯吡咯烷酮（PVPP），用液氮研磨成细粉状，将细粉分为每份约3 g，并贮藏于-80℃下。（2）在5O ml falcon管中加入2O ml提取缓冲液。提取液的组成为0.2 mol/L 脱水四硼酸钠（sodium tetriborate decahydrate）、30 mmol/L 乙二胺四乙酸（EDTA）、1% （W/V）十二烷基硫酸钠（SDS）、 ...

从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析，纯化mRNA以用于体外翻译或建立cDNA文库，RT-PCR及差示分析等分子生物学研究，都需要高质量的RNA。因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。

RNA 提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。在有EB 存在时，完整未降解的RNA制品电泳图谱应可清晰看到18S rRNA、28S rRNA 两条带，也应当能看到一条由tRNA、5.8SrRNA 和5S rRNA 组成的、较模糊迁移较快的条带，且28S rRNA 条带亮度应为18S rRNA的1.5-2 倍。

RNA抽提方法

AllPrep DNA/RNA 96 Kit以96孔板方式，从同一个细胞或组织样本中同时纯化基因组 DNA和总RNA。

Bartel Lab Whitehead Institute的Allison C. Mallory总结的拟南芥、烟草总RNA提取方法简洁明了

Many ...

第三节 植物病毒RNA 提取 大多植物病毒RNA 为单链RNA ，并且其极性与mRNA 极性相同，植物病毒RNA 提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获得满意结果。 一、材料 提纯TMV病毒液（10mg/ml）。 二、设备 冷冻台式离心机，低温真空干燥仪，电泳仪，电泳槽。 三、试剂 TE-饱和酚:氯仿（1:1），氯仿，3M NaAc(pH5.2)，乙醇(100%和70%)，TE缓冲液，无RNA 酶的 ...

一、目的： 学习稀碱法提RNA的原理与技术。 二、原理： 由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也各异，一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验室最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中，向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好地除去DNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和 ...

与rRNA 和tRNA 不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA 在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA 中分离mRNA dmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯化步骤制备mRNA 模板。 进行Northern杂交或Sl 核酸酶作用图分析时，与总RNA 相比，采用poly(A)+ RN ...

RNA extraction buffer: 0.1M NaCl 2% SDS 50mM Tris/HCl (pH9) 10mM EDTA 20mM ß-mercaptoethanol 1. Grind leaf tissue on liquid N in mortar and pestle. 2. Transfer the ground tissue to a 10ml conica ...

alimama_pid="mm_10043573_137377_1822161"; alimama_titlecolor="FF9900"; alimama_descolor ="552c55"; alimama_bgcolor="f7f7f7"; alimama_bordercolor="f7f ...

第二节 动植物组织mRNA 提取 一、材料 水稻叶片或小鼠肝组织。 二、设备 研钵，冷冻台式高速离心机，低温冰箱，冷冻真空干燥器，紫外检测仪，电泳仪，电泳槽。 三、试剂 1、无RNA 酶灭菌水：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃ 2小时）装蒸馏水，然后加入0.01%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。 2、75%乙醇：用DEPC处理水配制75%乙醇，（用高温灭菌器皿配制），然后装 ...

一、用异硫氰酸胍提取 提禽流感病毒的详细步骤，可参考（我提过N次做定量PCR都没问题）： 1.取200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管。 2.加600ul异硫氰酸胍，然后加入对照和样品，再加200ul氯仿，颠倒混匀。 3.13000rpm离心15min。 4.在第3步离心快结束时，另取同样多eppendorf管，加入400ul -20度预冷的异丙醇。 5.取第3 ...

一．原理 RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分，也是功能基因组 学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制，已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究，首先要获得该性状基因，从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆 和基因表达分析等实验是至关重要的，如Northern印迹及杂交分析、cDNA合成等实验的成效在很大程度上取决于RNA的质量。利用提取 ...

TRIzol method for RNA isolation -To tissue or cells add 200- 1 ml TRIzol (GIBCO BRL) 1.homogenize for 60 sec (vortex or polytron) 2.add 40ul-200 ml chloroform (1/5 volume of Trizol) 3.mix by vortexing ...

实验目的 从黄化小麦苗中提取总RNA ，可以为cDNA 文库的构建做好准备。我们重点是要保证RNA 的完整性、产率、防止修饰和纯度，尤其是完整性、防止修饰和纯度。RNA 是单链，2’OH是它的化学性质远比DNA 活泼。所以，提取RNA 颇为不易。加之RNA 的不均一性，要将所有的RNA （rRNA 、tRNA 、mRNA ）完全提出，更加有挑战性。而Rnase是无处不在的（这种酶遇高 ...

第一节 概 述 从真核生物的组织或细胞中提取mRNA ，通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链，将双链cDNA和载体连接，然后转化扩增， 即可获得cDNA文库，构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较cDNA和相应基因组DNA序列差异可确定内含子存在和了解转录后加工等一系列问题。总之cDNA的合成和克隆已成为当今真核分子生物学的基本手段。自70年代中 ...

【原理】 RNA的制备与分析对于了解基因表达在转录水平上的调节是必不可少的，也是最常使用的通过cDNA途径分析细胞基因表达的前提。通常一个典型的哺乳动物细胞约含10-5μg RNA，但其中大部分为rRNA及由tRNA，而mRNA仅占1%～5%。虽然mRNA大小和序列各不相同，但在多数真核细胞mRNA的3’末端都带有一段较长的多腺苷酸链。这个群体编码了所有由该细胞合成的多肽。RN ...