RNA提取实验

RNA提取和RT-PCR在做Northern等杂交实验、构建cDNA文库、获取能够编码真核生物蛋白的基因、获得RNA病毒基因时，会用到RNA提取和RT-PCR技术。真核生物的基因组是DNA，为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢？因为真核生物的基因含有大量的非编码区，称为内元（intron），真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的，这些编码区叫做外元（exon）。真核生物的DNA转录成为RNA之后，经过剪切和拼 ...

最近利用trisol（Qiagen公司）进行肝脏病理标本RNA抽提，按照试剂的说明书进行操作：取小于50mg的RNAlater（Sigma公司）保存的样本，置于1ml的trisol中匀浆；匀浆结束后室温放置5min左右，加入200ul氯仿，以振荡器剧烈震荡15秒混匀，室温或冰上（此处各家说法不一，我自己测试好像没有发现很大差异）放置5-10min；4度，12000g离心15min，吸取上清至新的1.5ml离心管中；在 ...

小弟我这段时间因为实验需要,开始大量的提取脑组织的RNA.以前提取RNA都是做逆转录吊基因用,所以对于RNA的要求不算是特别严格.但是这次的实验要求RNA提取纯度和精度都比较高,所以对于RNA提取的结果也就比较关注.在前一段时间我提取RNA中一个比较明显的问题是在28s的上面会多出一条带,当时在本版上面问了很多战友,也看了相关的贴,发现这是一个比较普遍的问题,对于这条带的解释有些战友说是基因组残余,有些战友 ...

组织RNA 抽提失败的两大现象是： RNA 降解和组织内杂质的残留。关于降解问题，首先看一下为什么从培养细胞中抽提RNA 不容易降解。现有的RNA 抽提试剂，都含有快速抑制 Rnase 的成分。在培养细胞中加入裂解液，简单的混匀，即可使所有的细胞与裂解液充分混匀，细胞被彻底裂解。细胞被裂解后，裂解液中的有效成分立即抑制住细胞内的 Rnase，所以RNA 得以保持完整。也就是说，培养细胞由于很容易迅速与裂解液充分接触，所以其RNA 不容易被降解；反过来讲 ...

小硕，刚进实验室不久，自己想的课题，外加老婆的建议和帮助下，RT-PCR外加琼脂糖电泳顺利跑了下来，前两天标本的目的基因及内参都P出来了，内心小高兴一把。图未上，等拷回来补传上来。虽然还有小毛病，但是起码还是有点结果了。说说肺组织提RNA，是癌旁5CM以及肿瘤组织切下来放液氮中冷冻，后转-80度冷藏。标本是守在手术室里面，一切下来就取的，不存在RNA降解问题。前期的标本是直接放进2ml离心管里面的，后来在从2ml离心 ...

近日学习RNA提取与纯化技术，在园子里看了很多帖子，很有收获，遂将RNA提取与纯化方面在2004-2012年资源进行总结，整合为一贴，建立一个资源索引，与各位站友一起分享！快速知晓入门篇核酸纯化技术及基础（主要集中在核酸纯化：genome, DNA, plasmid, RNA）：http://www.dxy.cn/bbs/thread/10489541#10489541RNA提取系列---RNA提取流程、实验举例及注意事项幻灯片：http ...

1、实验目的提取人体细胞的总RNA和mRNA。2、本实验所需试剂1）、CNE-2细胞及培养细胞的一系列条件，2）、PBS缓冲液， TRIZOL试剂，3）、DEPC处理过的水、大、中、小Tip及1.5 ml EP管,4）、新的氯仿、异丙醇和乙醇，5）、mRNA分离试剂盒：Oligotex mRNA Mini Kit,Cat.no.:70022, QIAGEN。6）、新配的电泳缓冲液，专跑RNA的琼脂糖（Agarose）。3、实验流程3.1 细胞总RNA的提取1）、6孔板 ...

（1）取3 g样品，加入10% 样品重的多聚聚乙烯吡咯烷酮（PVPP），用液氮研磨成细粉状，将细粉分为每份约3 g，并贮藏于-80℃下。（2）在5O ml falcon管中加入2O ml提取缓冲液。提取液的组成为0.2 mol/L 脱水四硼酸钠（sodium tetriborate decahydrate）、30 mmol/L 乙二胺四乙酸（EDTA）、1% （W/V）十二烷基硫酸钠（SDS）、1%脱氧胆酸钠盐。再加入0.0309 g二硫苏糖（DTT）、200 ul乙基苯基聚乙二醇（NP-40 ...

　　一旦生物样品被收集采摘，它的RNA会立刻变得非常不稳定，极易被降解。由于特异及非特异的RNA降解，或者由于应激反应产生新的RNA都会引起RNA状态的改变。对于生物芯片、基因表达矩阵分析（Array Analysis）、定量RT-PCR等实验来说，采 样后立即稳定样品里的RNA以保存当时RNA的表达状态，是精确/定量研究基因表达分析的重要前提。为了达到这个目的，往往需要将液氮或者干冰带到采样现场，采样后立即运回实验室保存。 ...

怎么从组织中提取RNA1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。2. 如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80℃或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4℃，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后加入一定量的TRIZOL试剂，然后匀浆。 注意：速度不要太快，要匀一会挺一会，否则由于摩擦产热，RNA遇热会加速降解。如果一次做多个标本的RNA提取 ...

RNA提取对于科研人员来说并不陌生，但是要得到好的结果却不是一件很容易的事情。事实上，现在市面上的丰富的RNA提取试剂基本上可以满足科研人员的需要，为什么往往提取的RNA却容易失败呢？RNA提取失败的主要现象有三个：提取的RNA降解、提取的RNA量偏低以及提取的RNA纯度低。究竟怎样才能确保RNA提取的成功率呢？首先，要确定材料的可用性。尽管现有的RNA提取试剂都用抑制RNase的成分，但提取的材料仍需谨慎处 ...

人体内的血液循环系统犹如印度的圣河 – 恒河，河水中携带的养分滋养着古老的大地；洗涤带走地上的ㄧ切污秽，人们的一生都在河水中完成。如此的恒河可以想象，河水中充斥着各种物质，有废物有养分，只要你想都可以从河水中捞取。同样的我们的循环系统如同恒河；流动的血液如同恒河水，身体所需的ㄧ切由血液运送，身体产生的废物也由血液清运，同样可以想象血中的成份也是包罗万象。如果我们想知道大地有多纯净 ...

提取土壤RNA是环境分子生物学研究最难的研究方法之一。RNA提取本身就是件艰巨的任务，提取土壤的RNA挑战更大。最大的困难之一是土壤RNA得率。从土壤中获得RNA远比DNA少，前者仅有后者的10-20%，所以需要比提DNA更多的加样量。因此需要用更大的研磨管（15 ml）和更大的离心机。 另一个大问题是腐植酸等抑制因子的污染。RNA实验对纯度要求很高。当逆转录寻找低拷贝数基因时，你 ...

本期专文要来跟大家讨论的话题是核糖核酸(RNA)的萃取，看到这里各位心中可能已经起了疑问: RNA 萃取不是很简单吗?只要照着标准步骤操作，加一加试剂就完成了，有必要大费周章特地开篇幅来谈这件事吗?其实越简单的东西遇到困难时就越难解，各位看倌就请耐着性子，听我们娓娓道来。 Lab 的经验和客户的难题 以华联基因体实验室的长期以来承接客户RNA检体的经验来说，我们经常遇到的问题是(1)R ...

很好的一篇关于RNA抽提的综述文章。对大部分实验人员来说，RNA 抽提比基因组DNA 抽提要困难得多。事实上，现有的RNA 抽提方法/试剂，如果用于从培养细胞中抽提 RNA，比抽提基因组 DNA 更方便，成功率也更高。那为什么同样的方法用于组织RNA 的抽提，总会碰到问题呢？组织RNA 抽提失败的两大现象是： RNA 降解和组织内杂质的残留。关于降解问题，首先看一下为什么从培养细胞中抽提RNA ...

一、实验原理 The E.Z.N.A. HP Total RNA Kit uses the reversible binding properties of HiBind matrix a new silica-based material. This is combined with the speed of mini-column spin technology. A specificall ...

这一从培养的单层哺乳动物细胞中分离RNA的实验程序系为Favaloro 等（1980）所介绍程序的改良。该程序同样适用于从悬浮培养的哺乳动物细胞中或从易于分散成单个细胞的哺乳动物组织中分离RNA。但不适用于从固体组织中提取RNA，因为用这种裂解细胞的方法（在SDS存在的条件下用蛋白酶K消化）去消化组织速度很慢，导致内源性RNA酶在被蛋白酶K消化或被抑制剂灭活前有时间发挥作用。原方案中（Faval ...

与rRNA和tRNA不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯化步骤制备mRNA模板。 进行Northern杂交或Sl 核酸酶作用图分析时，与总RNA相比，采用poly(A) ...

早期的文章介绍了如何提取土壤DNA。大篇幅详细讲解了影响DNA得率和纯度的研磨均质、化学试剂（重点是裂解缓冲液）等问题。做DNA远没有做RNA压力大。不用太担心降解，得率还挺高。RNA就不一样，提取土壤RNA是环境分子生物学研究最难的研究方法之一。RNA提取本身就是件艰巨的任务，提取土壤的RNA挑战更大。最大的困难之一是土壤RNA得率。从土壤中获得RNA远比DNA少，前者 ...

操作步骤：提示：（1） 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇！（2） 使用前将10X红细胞裂解液RLB用DEPC处理水稀释到1X。（3） 操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1 ml RLT 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLT 4℃可放置一个月。1. 在适合大小的RNase free离心管中加入1 ...