RNA试验基础

mRNA的功能

从植物组织中提取RNA 是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析，纯化mRNA 以用于体外翻译或建立cDNA文库，RT-PCR及差示分析等分子生物学研究，都需要高质量的RNA 。因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA 是顺利进行上述研究的关键所在。 从文献报道上看，有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA ，而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。一般 ...

Diethyl pyrocarbonate derivitizes histidine residues and is therefore an effective method to inactivate nucleases including RNAse. CAUTION: DEPC is irritating to the eyes skin and mucous membranes. It ...

RNA酶保护试验(RNase Protection AssayRPA)是通过液相杂交的方式用反义RNA探针与样品杂交，以检测RNA表达的技术。与Northern杂交和RT-PCR比较，RPA有以下几个优点： 1． 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗膜都将造成样品和探针的损失，使灵敏度下降，而RPA将所有杂交体系进行电泳，故损失小，提高了灵敏度。 ...

RNA 一度被认为仅仅是DNA和蛋白质之间的“过渡”，但越来越多的证据清楚的表明，RNA 在生命的进程中扮演的角色远比RNA 我们早前设想的更为重要。RNA 干扰（RNA interference）的发现使得人们对RNA 调控基因表达的功能有了全新的认识，更因为可以简化替代基因敲除而成为研究基因功能的有力工具，因此格外引人注意，在2002年度Science评选的10大科学成 ...

RNase Protection Assay (RPA) BD Biosciences公司， PDF文件 http://www.bdbiosciences.ca/canada/downloads/protocols/RPA.pdf ...

Feature The RNase A is free of DNase activity. It is not necessary to heat it before use. Description The Ribonuclease A (RNase A) is an endoribonuclease that specifically degrades single-stranded RNA ...

Add 0.1 ml DEPC to 100 ml of the solution to be treated and shake vigorously to bring the DEPC into solution. Let the solution incubate for 12 hours at 37℃. Autoclave for 15 minutes to remove any trac ...

Primer Extension analysis of total yeast RNA 1. Mix the following in a 1.5 ml eppendorf tube: a. 20-80 micrograms yeast RNA dissolved in H2O (the amount will depend on the level of expression for the ...

1.RNAi： 近年来的研究表明一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达，促使mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，称为RNA干扰（RNA interference，RNAi，也译作RNA干预或者干涉）。它也是体内抵御外在感染的一种重要保护机制。 2.siRNA： siRNA（small interfering RNAs）是一种短片断双链RNA分子，能够以同 ...

Reagents and Equipments TRIzol Reagent (Life Technologies cat# 15596-026) or TRI reagent (Sigma cat # T-9424) DEPC (RNase free) water or 0.5% SDS solution in DEPC treated water Chloroform (Fishe ...

The ribonuclease protection assay (RPA) is a highly sensitive and specific method for the detection of mRNA species. The assay was made possible by the discovery and characterization of DNA-dependant ...

Secondary structure of prion mRNA Luck R; Steger G; Riesner D Institut fur Physikalische Biologie Heinrich-Heine-Universitat Dusseldorf FRG. J Mol Biol 258: 813-26 (1996) An algorithm for prediction ...

1.克隆到shRNA 表达载体中的shRNA 包括两个短反向重复序列，中间由一茎环（loop）序列分隔的，组成发夹结构，由polⅢ启动子控制。随后在连上5-6个T作为RNA 聚合酶Ⅲ的转录终止子。 2.两个互补的寡核苷酸两端须带有限制性酶切位点。 3.Stratagene发现29个寡核苷酸较之原先推荐的23个寡核苷酸可以更有效的抑制目的基因。 4.在启动子下游的酶切位点下方紧连一个C，使插入片段和 ...

1. Add appropriate volumes of RNA (<12 ul) plus probe (< 3 ul). Try 5 and 10 ug RNA plus 600 or 800 pg dig labelled probe. 2. Include 2-3 yeast RNA samples/probe used. 2ul of 5mg/ml stock. 3. A ...

Ribonuclease Protection Assay contributed by James McCaughern-Carucci Yale University Most RNase Protection protocols require an overnight hyb with numerous subsequent clean-up steps. This method requ ...

RNA的完整性可以通过琼脂糖变性电泳分析检测而含量则通过紫外分光光度计确定。常见的变性电泳有甲醛变性电泳，戊二醛变性电泳等。 甲醛变性电泳检测RNA完整性 一、材料、试剂和仪器 1 材料: 植物总RNA 5-10μg 2 试剂: 1）加样运载缓冲液（Loading buffer），50% 甘油，1mmol/L EDTA (pH 8.0)，0.25%溴酚蓝，25%二甲苯氰FF 2）10&tim ...

在所有RNA实验中，最 关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛 存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所以RNA的制备与分析操作难度极大。 在实验中，一方面要严格控制外源性RNA酶的污染；另一方面要最 ...