RNA试验基础

信号通路，只有一个目的：将细胞的外部信号转换成细胞的内部变化。不管是胰岛素，还是异亮氨酸，抗原还是肾上腺素，它们的终极目的总是如出一则：对转录活性的改变。 这些对于转录活性的影响来自于转录因子与基因的调控区域：如启动子、增强子、沉默子等结合达到的。经典的凝胶迁移滞后试验（the electrophoretic mobility shift assay）已经成为证明某种蛋白能与特定的短基因序列结合的有力方法手段。但是凝胶迁移滞后试验 ...

冷泉港实验室：RNAi基因沉默方法 大约在十年前，2006年诺贝尔生理/医学奖得主CraigMello和AndrewFire发现，他们能够将短RNA分子插入到线虫中并沉默特定基因的表达。今天，研究人员也常常使用这种强大的RNA干扰方法来研究哺乳动物系统中的特定基因功能。　　为了进行这种基因沉默实验，研究人员通常需要依赖化学合成的RNA分子，而这个合成过程是相当昂贵的。本月《冷泉港实验手册》（ColdSpringHarb ...

RNAi精华资料（dxy）关于RNAi整理贴（基因沉默撰写贴）1.RNAi对照解析贴http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=7151795&sty=3http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=7461187&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0#7461187http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=154&id=96447 ...

研究背景： 长链非编码RNA(long noncoding RNA，lncRNA)是一类不编码蛋白的RNA分子，长度在200bp以上，起初被认为是RNA聚合酶II转录的副产物，不具有生物学功能；近期的研究表明lncRNA具有保守的二级结构，可以与蛋白、DNA和RNA相互作用，参与多种生物学过程的调控，尤其在肿瘤当中发挥了重要的调控角色，如染色质修饰、转录激活和抑制、转录后调解以及作为miRNA的 ...

无论您的研究内容是遗传发育、干细胞、调控，还是疾病…… 无论您的研究物种是人、大鼠、小鼠，还是植物…… 无论您的样本类型是组织、细胞、血液，还是石蜡切片…… 您都可以很简单、很轻松地研究miRNA！ l 什么是miRNA？ MicroRNA（miRNA）是真核生物中一类长度为22nt左右的非编码单链RNA分子，在 ...

原理 拟南芥作为高等植物的模式生物被全世界的植物生物学实验室广泛研究。然而，照顾好这种小植物可能不是那么容易。这里介绍一个马里兰大学帕克学院的HevenSze实验室的通用指南。Sze实验室及其他实验室的成员为建立这个在实验室培育拟南芥的通用指南做出了许多努力。 步骤 1. 准备种植用土 我们使用Miracle-Gro混合土（2立 ...

微小RNA（microRNA，简称miRNA）是生物体内源长度约为20~23个核苷酸的非编码小RNA，通过与靶mRNA的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行负调控，导致mRNA的降解或翻译抑制。在近期的《细胞》杂志上，两个研究小组的成员发现了miRNAs与靶mRNA之间的新关系：他们提出miRNAs将靶基因mRNA的水平调整到了一种最佳水平，并用不同的实验进行了证明。 在第一篇 ...

自荷兰癌症研究院（The Netherlands Cancer Institute）肿瘤生物学部、德国马克斯·普朗克生物物理化学研究院（Max-Planck-Institute for Biophysical Chemistry）、丹麦哥本哈根大学等多国研究人员组成的研究团队，发现了一种进化上保守的RNA结合蛋 ...

微小RNA (microRNA，简称miRNA)是生物体内源长度约为20~23个核苷酸的非编码小RNA，通过与靶mRNA的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行负调控，导致mRNA的降解或翻译抑制。到目前为止，已报道有几千种miRNA存在于动物、植物、真菌等多细胞真核生物中，进化上高度保守。 一般而言，编码miRNAs的基因最初产生一个长的pri-RNA分子，这种初期分子还必须被剪切成约70 ...

为了获得高质量的真核细胞mRNA， 必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNA酶的活性。同时，避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量RNA酶也很重要。下面列举避免RNA酶法染问题的一些注意事项。大多数有经验的研究者并不拘泥于这些注意事项，只是在遇到问题时可能采用其中的一种或几种方法加以解决。 实验程序 RNA 酶 ...

在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所以RNA的制备与分析操作难度极大。 在实验中，一方面要严格控制外源性RNA酶的污染；另一方面要最大 ...

在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的 RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所以RNA的制备与分析操作难度极大。 在实验中，一方面要严格控制外源性RNA酶的污染；另一方面要最 ...

稀释计数法 滴度单位：TU/ml，指每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数。”TU”为”transducing units”的缩写，中文为“转导单位”，表示可以感染并进入到靶细胞中的病毒基因组数。 第一天 细胞准备 将生长状态良好的293T细胞消化计数后稀释至1×105/ml，加入96孔板，100?l/孔，为每个 ...

方法一 超速离心沉淀法 F取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。 F每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。 F取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地，将剩下8 ...

一、293T细胞的冻存1. 随着传代的次数增加，293T细胞会出现生长状态下降，出现突变等。所以要在细胞购进时就进行大量冻存，以保证实验的稳定性和持续性。2. 在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。& ...

1、慢病毒载体概况 慢病毒是逆转录病毒科亚科之一，分为两类：灵长类和非灵长类慢病毒。灵长类慢病毒包括HIV-1、HIV-2、猴免疫缺陷病毒( SIV)，非灵长类慢病毒包括猫免疫缺陷病毒(FIV)、牛免疫缺陷病毒(BIV)、马免疫缺陷病毒(EIAV)等。 多项研究表明慢病毒载体具有可感染非分裂期细胞、可长期表达、而且宿主细胞免疫反应小、细胞毒性小等优点。因其自身结构特点，可包装8～lOkb，适用于 ...

以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×106个293T细胞。1、取1.5ml灭菌EP管，加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血清培养基。轻柔混匀，室温孵育5min。 ...

慢病毒使用操作手册 1、慢病毒使用操作手册 1.1慢病毒的储存与稀释: 1.1.1病毒的储存：收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口） A．病毒可以存放于-80℃ 6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，建议在使用前需要重新滴定病毒滴度 B．反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低 ...

miRNA定量 进行一次逆转录即可实现所有目标miRNA的测定？没错，采用加尾法，一次逆转录就可以得到全部miRNA对应的cDNA。 我们知道，真核生物mRNA都是有poly-A尾巴的，这样Oligo-dT（逆转录引物）就很容易结合到mRNA上来合成cDNA了。 miRNA就缺了poly-A尾巴，怎么办呢？在逆转录试剂盒中加入poly-A聚合酶，先给它们加上一串poly-A尾巴，然后用带有一段通 ...

首先询问客户提取的大致种类，是动物组织细胞？植物？血液样品？真菌？细菌？病毒？酵母？不同的种类应该选择不同的产品。