RNAi

The Scientist-September 23,2003-Fingering single genes-Cathy HoldingThe ability to control in vivo gene expression may be a powerful tool in cancer therapy, gene therapy of inherited genetic diseases, and for the study of gene function. Small interfering RNAs are increasingly used in ...

近几年来，RNAi技术已经成为分子生物学研究领域的一把利剑。最近，一项新的研究表明用RNA干扰技术靶向单个基因的RNA能够成功地降低小鼠的胆固醇水平。这些结果公布在2004年11月11日的Nature上。仅仅在数年前，研究人员发现除了细菌以外的所有生物体控制基因表达，部分依赖于一种叫做RNA干扰的机制。研究人员一直试图将这个机制用于人类疾病的治疗。这种方法的原理很简单，即创造出一个所谓的短干扰RNA（siR ...

RNAi（RNA interference）技术自诞生之日，就表现出巨大的疾病治疗应用潜力，每年全球多家巨型药企都会投入巨额资金进行RNAi治疗药物研发，Alnylam就是其中之一。最新一期Nature Medicine中报道了该公司与费城儿童医院关于血友病的RNAi疗法最新研究进展。在血液中，抗凝血因子和促凝血因子会组成一个凝血系统，通过控制血浆中凝血酶的水平，平衡失血控制与血栓形成之间的关系。凝血酶是凝血级联反 ...

RNA干扰（RNAi），即用20多个核苷酸组成的短的双链RNA（siRNA）代替传统反义核酸进行转录后基因沉默，已经迅速而广泛地应用到基因功能，基因表达调控机制研究等热门领域，并为基因治疗开辟了新的途径。近两年来，这方面的科学论文及报道爆炸性增长，几乎每天都有新的结果涌现。这些论文中，出现了很多与RNA干扰相关的概念，意思很相近但并不完全相同，这里列举了几个常见的RNA干扰相关的名词及其简单的解释：1、 miRNA：在 ...

一、荧光素酶报告基因的检测原理荧光素酶（Luciferase）是生物体内催化荧光素(luciferin)或脂肪醛(firefly aldehyde)氧化发光的一类酶的总称，来自于自然界能够发光的生物。自然界存在的荧光素酶来自萤火虫、发光细菌、发光海星、发光节虫、发光鱼、发光甲虫等。细菌荧光素酶对热敏感，因此在哺乳细胞的应用中受到限制。目前，以北美萤火虫虫(Photinus pyralis)来源的荧光素酶基因应用的最为广泛，该 ...

RNAi 是一种高效的特异性强的基因表达抑制，应用RNAi生物学机制进行基因功能研究已经成为一种创新性的新方法，人们第一次可以如此快速和方便地抑制细胞中特定基因的表达水平，从而用于分析特定基因在细胞中的功能。RNAi 技术还为新药开发、疾病治疗提供了创新性的方法和途径，有着极其广阔的应用前景。转染是RNAi技术应用的瓶颈。siRNA的转染是RNAi技术最常用和最重要的转染。由于siRNA转染技术应 ...

近年来的研究表明一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达诱使细胞表现出特定基因缺失的表型 称为RNA干扰（RNA interferenceRNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是这种短片断双链RNA分子能够以序列同源互补的mRNA为靶目标降解特定的mRNA.RNAi的发现具有划时代的意义它不仅深入揭示 了细胞内基 ...

一、RNAi的分子机制 通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。在起始阶段，加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs siRNAs)。证据表明；一个称为Dicer的酶，是RNase III家族中特异识别双链RNA的一员，它能以一种ATP依赖的 ...

一：概述 microRNA(miRNA)是一类有大约22个核苷酸组成的非编码小分子RNA，其广泛存在于真核生物中。miRNA在个体发育的不同时期及不同组织中有不同的表达模式，都表明了其在发育和分化中起有重大的调控作用。迄今为此，对miRNA的检测方法主要有Northern Blot 等基于分子杂交的方法，这些方法敏感度低、耗时长、RNA的用量较大。miRNA qPCR Detection Kit ...

摘要：由于RNAi实验技术的推广和应用，人们在体外培养细胞中进行RNAi实验已经比较容易。随着研究的深入，人们需要将研究扩展至更自然的细胞和体内环境。一种像做体外转染一样的简单易用的方法已经出现，这就是动物体内转染试剂。 由于RNAi实验技术的推广和应用，人们对特定基因"敲除"或"沉默"变得越来越简单，研究也越来越多。在体外培养细胞中进行RNAi实验已经比 ...

在最新的《自然—方法学》（Nature Methods）杂志上，谢晓亮研究组再次发表文章，提出了利用其研究组自身研发的技术——受激拉曼散射（stimulated Raman scattering，SRS）显微技术进行RNA干扰实验的新方法。

RNA干扰(RNA interference, RNAi)作为一种重要的基因转录后沉默机制, 广泛应用于基因功能研究、肿瘤及病毒感染性疾病治疗的实验研究 ,其核心作用是双链的小干扰RNA ( small interfering RNA, siRNA ) 能够抑制同源基因的表达。

《自然—方法学》网络版近日介绍了瑞士苏黎世大学分子生命科学研究所迈克尔· 恩加特纳（Michael O Hengartner）研究组发明的一种大尺度鉴定miRNA靶点新方法。

近两年microRNA的研究受到越来越多科学家的关注，大量的实验结果揭示了microRNA在胚胎发育、癌症等方面起到非常重要的调控作用，据推测microRNA可能调控至少30%的基因的表达情况。

1 ml linearized DNA template pBS-SK- ERD (X-E) (0.1-0.5 mg)7.8 ml DDW5 ml 5X transcription buffer ( stratagene )1 ml 750 mM DTT1 ml Rnasin (RNase inhibitor; 15U/ml)1 ml 10 mM ATP (pH 7)1 ml 10 mM CTP ...

Polymerase III in vitro Transcription Steve HahnFor the following reactions use appropriate shielding and dispose of radioactive waste properly!A 20 microliter transcription reaction contains:4.0 μ ...

Run-on transcription monitors the regulation of transcription in isolated nuclei.A. Preparation of Nuclei - (do everything at 0℃ to 4℃ in 50 ml tubes)1. Pellet between 30 and 300 million cells at 1500 ...

Transcription of cRNA probeReagents/SolutionsDNA (PCR or plasmid) with bacteriophage RNA polymerase promoter in suitable orientation (see note 1 ) ~1µg/µl in TE buffer 10mM MgCl2 5x Transcription Buff ...

The following protocol is for MEGAscript II Kit (Ambion). 1. PCR amplify the DNA template. The 5'-end of the template should contain the minimum promoter sequenences of T7 or Sp6 or T3.A 5-primer with ...

RNA extraction buffer:0.1M NaCl2% SDS50mM Tris/HCl (pH9)10mM EDTA20mM ß-mercaptoethanol1. Grind leaf tissue on liquid N in mortar and pestle.2. Transfer the ground tissue to a 10ml conical bottom cent ...