细胞转染技术

稳定细胞株构建的第一个步骤就是细胞转染，这项实验的原理大家都清楚，但是为什么一上手就会出现多种问题，在实验第一步就栽了跟头呢？是细胞转染方法不对头？还是实验过程中的某个因素影响了转染效率？了解本文这11个注意事项，让你的细胞转染实验顺利通关！所谓转染，是指在真核细胞里导入具有生物功能的核酸并核酸的生物功能。通常选用的转染方法包括物理介导法（如电穿孔法、显微注射和基因枪等）、化学介导法（如磷酸钙共沉淀法、脂质体转染 ...

细胞转染是指将外源分子如 DNA RNA 等导入真核细胞的技术。可分为瞬时转染，稳定转染等瞬时转染是指外源 DNA/RNA 不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其他调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒 DNA 转染效率较高，在转染后 24-72 h 内分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。稳定转染是指外源 DNA 既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体 ...

经常提质粒吗？熟练之后，提质粒乃至质粒构建都很简单。但如果真问起一些质粒的细节，可能很多人回答不了。不信随我看看。质粒组成要素一个合格的质粒含有以下组成部分：复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如 Amp+ 、Kan+。多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段P/E 启动子/增强子Terms 终止信号加 poly（A）信号 可以起到稳定 mRNA 作用如 ...

慢病毒简介慢病毒（Lentivirus）载体是以人类免疫缺陷I型病毒为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。在转染遗传物质到细胞基因组中的工作中，重组慢病毒载体是一个强大和有效的工具，该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染包括几乎所有的哺乳动物细胞、干细胞和原代培养的细胞，目前慢病毒系统已经被广泛应 ...

摘要： 核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时可使DNA附在细胞表面利于细胞吞入摄取或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内基因转导的频率大约为10-4这项技术能用于任何DNA导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化的研究.此方法对于贴壁细胞转染是最常用并首选的方法. ...

摘要： 脂质体（lipofectin regeantLR）试剂是阳离子脂质体和Dioleoyl photidye-thanolamine（DOPE）的混合物.它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中是目前条件下最方便的转染方法之一.转染率高优于磷酸钙法比它高5~100倍能把DNA和RNA转染到各种细胞. ...

摘要： DEAE－葡聚糖介导的转染其原理还不清楚可能是通过内吞噬作用而使DNA转导进入细胞核转染效率与DEAE-葡聚糖浓度以及细胞与 DNA/DEAE-葡聚糖混合液接触时间的长短很有关系. DEAE－葡聚糖介导的细胞转染其原 ...

摘要： 一些真核蛋白在原核宿主细胞中的表达不但行之有效而且成本低廉然而许多在细菌中合成的真核蛋白使得蛋白活性低或无活性.需要表达具有生物学功能的膜蛋白或分泌性蛋白则更需要使用真核转染技术. 一些真核蛋白在原核宿主细胞中的表达 ...

摘要： 核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时可使DNA附在细胞表面利于细胞吞入摄取或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内基因转导的频率大约为10-4这项技术能用于任何DNA导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化的研究.此方法对于贴壁细胞转染是最常用并首选的方法. ...

摘要： 对转染的细胞进行稳定性筛选的具体操作步骤一一介绍. 购买罗氏试剂，积分计划触手可及，缤纷礼品无限选择，欢迎了解详情1．确定抗生素作用的最佳浓度： 不同的细胞株对各种抗生素有不同的敏感性因此在筛选前要做预试验确定抗生素对所选择 ...

摘要： 基因启动子的瞬时转染所经过的5个步骤：①确定需要转染的细胞系；②鉴定目的基因的假定启动子区域；③选择报告基因和相应的报告基因分析方法；④将启动子插入到合适载体的报告基因上游；⑤选择合适的转染方法. 购买罗氏试剂，积分计划触手 ...

摘要： 介绍5种瞬时转染分析法：瞬时转染分析法、稳定转染分析法、体外转录分析法、转基因分析法和同源重组分析法. 购买罗氏试剂，积分计划触手可及，缤纷礼品无限选择，欢迎了解详情1.瞬时转染分析法 目前有很多功能性分析方法用于研 ...

摘要： 本实验从新生SD大鼠海马组织中分离神经干细胞，并通过观察携带EGFP基因的腺病毒（Ad/ EGFP）转染NSCS后EGFP表达规律及转染对NSCS的活力、增殖、分化等的影响，探讨EGFP作为NSCS的示踪标志物的可行性，为进一步的NSCS移植研究提供体外研究基础。 ...

摘要： 通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术，将靶基因导入细胞，一般在转染后48小时左右，靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的，48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。 原理：通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术 ...

摘要： 本实验介绍了脂质体转染的几个方法。 实验原理脂质体(LR)试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物(1：1)。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高 ...

摘要： 核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时可使DNA附在细胞表面利于细胞吞入摄取或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内基因转导的频率大约为10-4这项技术能用于任何DNA导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化的研究.此方法对于贴壁细胞转染是最常用并首选的方法. ...

摘要： 讲述细胞转染技术分类并分别介绍各种转染方法的原理、应用、特点及各种转染方法的比较. 常规转染技术可分为两大类一类是瞬时转染一类是稳定转染（永久转染）.前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中因此一个宿主细胞中可存在 ...

摘要： 介绍5种瞬时转染分析法：瞬时转染分析法、稳定转染分析法、体外转录分析法、转基因分析法和同源重组分析法. 购买罗氏试剂，积分计划触手可及，缤纷礼品无限选择，欢迎了解详情1.瞬时转染分析法 目前有很多功能性分析方法用于研 ...

摘要： 本实验介绍了脂质体转染的几个方法。 实验原理脂质体(LR)试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物(1：1)。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高 ...

原理： 通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术，将靶基因导入细胞，一般在转染后48小时左右，靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的，48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。 应用： 观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能（短时间即可进行观察，但效应会很快丢失）。 一般流程： 1）细胞接种：转染实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密 ...