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DNA原位杂交技术

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引物设计常见问题与解答(二)

目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产,无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合成产率的高低,试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。申能博彩公司采用的合成仪主要机型为ABI3900高通量合成仪,合成长链主要采用Beckman 1000M和PE8909 DNA合成仪,引物修饰和高OD数合成采用ABI394等。

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根系总吸收面积和活跃吸收面积的测定

根据植物矿质吸收的理论,植物对溶质的最初吸收具有吸附的特性,并假定这时在根系表面均匀地覆盖了一层被吸附物质的单分子层,因此可以根据根系对某种物质的吸附量来测定根的吸收面积。常用甲烯蓝作为被吸附物质,它的被吸附量可以根据供试液浓度的变化用比色法准确地测出。已知1mg甲烯蓝成单分子层时所占面积为1.1m2,据此即可求出根系的总吸收面积。当根系在甲烯蓝溶液中已达到吸附饱和而仍留在溶液中时,根系的活跃部分能把原来吸附的物质吸收到细胞中去,因而继续吸附甲烯蓝。从后一吸附量求出活跃吸收面积,可作为根系活力指标。

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放射免疫分析

放射免疫分析是由Yalow和Berson于1960年创建的标记免疫分析技术。由于标记物放射性核素的检测灵敏性,本法的灵敏度高达ng甚至pg水平。测定的准确性良好,ng量的回收率接近100%。本法特别适用于微量蛋白质、激素和多肽的定量测定。 一、基本原理 放射免疫分析的基本原理是标记抗原(Aundefined)和非标记抗原(Ag)对特异性抗体(Ab)的竞争结合反应。它的反应式为: 在一反应系统中,作 ...

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免疫比浊法检测糖化血红蛋白的应用评价

【摘 要】 【目的】探讨免疫比浊法检测糖化血红蛋白 (HbAlc) 的应用价值。 【方法】应用免疫透射比浊法和高效液相色谱法分别测定糖尿病者 (20 名) 及健康人 (20 名) 的 HbAlc水平,比较两种方法的相关性并进行不精密度分析。 【结果】两种检测方法的结果呈显著相关性 ( r = 0198,P < 0105),不精密度分析显示免疫比浊法的CV < 5 %。 【结论】运用免疫 ...

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一些提高蛋白质的稳定性的方法

1.葡萄糖异构酶(GI)在工业上应用广泛,为提高其热稳定性,朱国萍等人在确定第138位甘氨酸(Gly138)为目标氨基酸后,用双引物法对GI基因进行体外定点诱变,以脯氨酸(Pro138)替代Gly138,含突变体的重组质粒在大肠杆菌中表达,结果突变型GI比野生型的热半衰期长一倍;最适反应温度提高10~12℃;酶比活相同。据分析,Pro替代Gly138后,可能由于引入了一个吡咯环,该侧链刚好能够填充 ...

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核酸、蛋白技术常用贮存液的配制

1.30%丙烯酰胺溶液 【配制方法】 将29g丙烯酰胺和1g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。 【注意】 丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和 ...

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第5套丙型肝炎病毒抗体诊断试剂国家参考品的制定

一、目的 为促进我国丙型肝炎病毒抗体诊断试剂质量的进一步提高,研制了第5套丙型肝炎病毒抗体诊断试剂国家参考品。 二、材料与方法 1、样品来源 样品来自国内13省市,从几十万个供血员中进行筛选。选取初筛中可能为抗HCV阳性或ALT异常的样品,及A值在抗HCV EIA试剂临界值附近的弱阳性或高值阴性样品;用多种试剂对收集到的2000多份血样进行复检,从中选出317份进行HCV RNA、抗HCV抗体谱、 ...

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C57BL/6生物学特性数据

动物来源:1921年C.C.Little用Lathrop小鼠作近亲培育时,用No.57雄鼠和No.52雌鼠交配,培育成C57。在C57中将毛色呈黑色的进行固定,培育成C57BL。1937年Little将维持的C57BL第六组亚系定名为C57BL/6,将第十组亚系定名为C57BL/10,继而分别维持至今。1947年从Little引入到美国Jackson Lab.,形成C57BL/6J;1951年从J ...

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质谱介绍及质谱图的解析

质谱仪一般由四部分组成:进样系统——按电离方式的需要,将样品送入离子源的适当部位;离子源——用来使样品分子电离生成离子,并使生成的离子会聚成有一定能量和几何形状的离子束;质量分析器——利用电磁场(包括磁场、磁场和电场的组合、高频电场、和高频脉冲电场等)的作用将来自离子源的离子束中不同质荷比的离子按空间位置,时间先后或运动轨道稳 ...

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重组PCR

重组PCR是利用PCR法在DNA片断上进行定点突变,用PCR介导产生核苷酸的突变包括碱基替代、缺失或插入。 引物设计 通常引物中至少有15个碱基与靶序列相互补,而靶序列的3'-末端可以与任何添 加序列发生错配,单个碱基错配除引物3'-末端处3-4个碱基外,其他地方都可引入。 在PCR产物之间提供重叠的添加序列至少要有15个碱基,当然越和越好,这样它将使 重叠的杂合分子稳定。 原初PCR(Prima ...

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Southern blot实验方法与步骤

用于检测重组DNA,也可分析DNA样品中是否有与探针序列同源的DNA片段。用于基因诊断,也可验证检测片段的分子量大小。将基因组DNA经限制性内切酶酶切,进行琼脂糖电泳,把分离后定位在凝胶上的不同分子量的DNA经碱变性处理,将凝胶中变性的DNA转移至一固相支持滤膜。利用标记的某一DNA、RNA或寡核苷酸与固着于滤膜上的DNA发生同源性杂交,利用放射自显影(化学发光法或显色法)检测。 ( ...

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常用实验动物介绍二(兔、犬、猪、猴)

1、新西兰兔 毛色:白色。 主要特征:红眼,体重4.0~5.5kg,性情温顺,繁殖力高,皮肤特别光滑,头宽圆而粗短,两耳较宽厚且直立。最大特点是早期生长快、产肉率高。 主要应用:①发热研究及热原试验;②免疫学研究;③心血管疾病及肺心病的研究;④生殖生理和胚胎学研究;⑤传染病的研究;⑥遗传性疾病和生理代谢失常的研究;⑦眼科学的研究;⑧皮肤反应试验。 2、Begle犬 主要特性:①喜与人为伴,有服从主 ...

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细胞培养液

现代生物技术均通过细胞作为载体来进行,无论是基因治疗、干细胞、克隆技术都在细胞内进行的。细胞的生长需要一定的营养环境,用于维持细胞生长的营养基质称为培养基,即指所有用于各种目的的体外培养、保存细胞用的物质,就其本意上讲为人工模拟体内生长的营养环境,使细胞在此环境中有生长和繁殖的能力。它是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。细胞培养基其组成成分主要有:水、氨基酸、维生素、碳水化合 ...

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