基因克隆

网络 第二节　在病毒学中的应用 　　免疫细胞化学在病理学中的应用最为广泛，并取得了很大成果。 　　一、病毒抗原定位 　　免疫细胞化学技术十分适合于病毒和病毒抗原在组织培养和机体细胞内的生长繁殖定位的观察。 　　1．核内病毒定位犬肝炎，乙型肝炎核心抗原（HBcAg）shope乳头状瘤，腺病毒IV型等病毒定位于细胞核内。 　　2．先核后 ...

网络 第三节　在寄生虫学中的应用 　　在寄生虫学中应用免疫细胞化学方法，对于人体大多数寄生虫都较其他血清学方法敏感。图象鲜明，易于观察。在诊断方面，免疫荧光间接法最常用于检查宿主的抗体。抗原制备容易，只需要作成切片、涂片或压印片标本，不需提纯可溶性抗原；有些可溶性抗原固定于醋酸纤维滤纸上，反应后以荧光计读数，可以定量。 　　但是，对于血中缺乏抗体的寄 ...

网络 第一节　在细菌学中的应用 　　免疫细胞化学在细菌学中主要用于菌种鉴定和抗原结构的研究。细胞都各自有其特异性抗原，应用特异性抗体的荧光素或酶标记物，可以鉴定任何一种细菌。已经成功地用于鉴定几乎所有致病菌的纯培养。尤其是应用免疫荧光技术具有较其他血清学方法简便、快速和敏感等优点，并能直接进行细菌形态观察。可用于鉴定的材料也比较多样，如培养物、感染组织、病 ...

网络 第十六章　病原体的免疫细胞化学快速检查方法和应用 　　用免疫细胞化学方法可以检测任何一种细菌和病毒，其突出的优点是快速、敏感、简便，又能同时进行形态学鉴定。此外，它还可更广泛地使用已知抗原间接法检查血清中抗体帮助诊断。更多地应用单克隆抗体进一步提高特异性和应用的广泛性。 ...

网络 第三节　自身抗体产生的机理 　　关于自身抗体产生的机理众说纷纭，十分复杂，免疫细胞化学和其他方法的结合，有助于从形态、功能和代谢三个方面深入探讨。根据目前研究的情况，有以下几种学说。 　　一、自身淋巴细胞免疫调控反应紊乱学说 　　Opelz等将T细胞与先经放射线照射的自身非T细胞共同培养时，发现了T细胞的增殖反应（3H-TdR渗入增加）。 ...

网络 第二节　在研究和诊断自身免疫性疾病中的应用 　　在自身免疫性疾病的诊断中，目前常常用免疫细胞化学技术检查相应的自身抗体作为重要诊断依据之一，并以此探讨自身免疫性疾病发生的免疫机理。 　　用免疫荧光法可以检查的自身抗体日益增多，具有器官特异性的自身抗体如甲状腺球蛋白抗体和甲状腺微粒体抗体，甲状腺第二胶质抗体，肾上腺抗体，胃壁细胞抗体，皮肤表皮间粘 ...

网络 第一节　自身抗体的免疫组织化学检测方法 　　1．常规检查法－间接免疫荧光检查方法 　　（1）取大白鼠的肝、肾、心、小白鼠胃，人甲状腺，横纹肌等单独或制成复合冰冻切片（4～5μm，）。其中1片用56℃甲醇固定3min，另切一片不固定，分别放入湿盒中。 　　（2）将病人血清用0.01mol/l Ph7.2～7.4磷酸缓冲盐水（PBS）作1：5 ...

网络 第十五章　自身抗体的免疫组织化学检测方法和应用 　　Friou等（1957）首先用免疫荧光细胞化学技术检查系统性红斑狼疮病人血清中的抗核抗体后，随后，在多种自身免疫性疾病的诊断中，广泛应用了免疫细胞化学方法，为这类疾病的诊断和研究提供了重要的依据。 　　所谓自身免疫性疾病是指自身免疫反应引起组织损伤的疾病。在临床方面，有的自身免疫性疾病已明确是 ...

网络 第三节　免疫细胞化学技术在肾脏疾病中应用的意义 　　一、免疫荧光或免疫酶标技术在肾脏疾病中的应用的意义 　　（一）肾小球疾病发病机制的研究 　　应用免疫荧光或免疫酶标技术，可对肾小球内免疫复合物沉积的机制、补体系统的激活途径、凝血机制的启动等进行研究，兹分述如下： 　　1．免疫复合物的形成及沉积的机制　有下列三种情况： 　　（ ...

网络 第四节　各种肾脏疾病的病变以及免疫荧光（酶标）表现特征 　　各种肾脏疾病各有其特殊病理改变，亦有其相应的免疫荧光（酶标）表现特征，现介绍如下： 　　一、原发性肾小球疾病 　　1．微小病变肾病　临床表现为肾病综合征。光镜下可见肾小球上皮细胞轻度肿胀。电镜下可见上皮细胞足突融合，荧光观察无免疫球蛋白沉积。 　　2．局灶性节　段性肾小球硬 ...

网络 第二节　荧光或酶标抗体在肾脏内显示的部位及形式 　　在不同的肾脏疾病时，荧光标记抗体或免疫酶标记抗体在肾脏内显示的部位、分布情况和型式（pattern）皆有所不同。现根据其在肾脏内显示的不同部位叙述如下： 　　一、肾小球毛细血管壁 　　荧光标记或酶标记抗IgG抗体在肾小球毛细血管壁沉积的型式可分为线条状及颗粒状。连边续线形荧光常为抗肾小球 ...

网络 第一节　免疫细胞化学技术在肾脏疾病中的应用范围 　　在肾脏疾病时，免疫细胞化学技术主要应用于肾脏穿刺组织的检查，也可应用于血清或肾脏洗脱液及尿液的特殊检查，兹分述如下： 　　一、肾脏组织的检查 　　肾穿刺组织一般应切割为三小块，分别作冰冻切片、石蜡切片及超薄切片，进行荧光显微镜、光学显微镜及透射电镜观察。所应用的免疫细胞化学技术包括免疫荧 ...

网络 第十四章　肾脏疾病免疫细胞化学 　　60年代初期，人们已认识到肾小球肾炎为一种免疫性疾病，是溶血性链球菌、葡萄球菌等病原体侵入人体后引起的变态反应性疾病。1968年Dixon根据荧光显微镜的观察结果，提出肾小球肾炎的发病机制可分为抗肾小球基底膜性肾炎和免疫复合物性肾炎两个类型。1980年Couser根据多个学者的动物实验观察，又提出了除循环免疫复合物 ...

网络 第八节　肝脏疾病免疫细胞化学 　　一、乙型肝炎免疫细胞化学 　　乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的传染病。乙型肝炎的发病是乙型肝炎病毒与机体之间相互作用的结果。目前研究证明，乙型肝炎病毒并非直接引起肝细胞的损伤，而是由于人体感染乙型肝炎病毒后，引起细胞免疫和体液免疫的应答。因此，人们认为机体免疫应答是引起肝细胞损害的重要原因。乙型肝炎病毒 ...

网络 第五节　原位杂交免疫细胞化学技术的未来与展望 　　自1969年以来，我们高兴的看到原位杂交免疫细胞化学技术已从分子生物学的一个分支发展成为生命科学的有效的研究方法。在原位杂交免疫细胞化学发展过程中两个关键性的突破是核酸探针制备的标记物的改进。核酸探针由克隆的核酸探针发展到无克隆的合成的寡核苷酸探针；从放射性同位素标记到非放射性标记。令人可喜的是，这一 ...

网络 第四节　原位杂交组织化学与免疫细胞化学结合法 　　原位杂交组化（ISHH）与免疫组织化学（IHC）结合法是先后用ISHH和IHC在同一切片或两个相邻切片进行染色，这样就可以同一细胞中显示出某种mRNA和相应的蛋白、多肽或其它抗原，从而可更好地了解某一基因的转录和蛋白、多肽合成的动力学。ISHH与IHC结合法可以在相邻切片上分别进行ISHH和IHC染色 ...

网络 第三节　DNA及寡核苷酸探针在原位杂交组织化学中的应用 　　一、DNA探针的应用 　　虽然一般认为DNA探针敏感度不如cRNA探针，但在病毒的检测等领域中DNA探针仍得到广泛的应用。 　　在原位杂交细胞化学的操作步骤方面与cRNA探针基本相同，所不同的是：（1）杂交时需先在高温80～95℃短时处理，使DNA探针及细胞内靶DNA变性，解离成 ...

网络 第二节　cRNA探针在原位杂交组织化学（ISHH）中的应用 　　Angerer及其同事们首先应用RNA探针于原位杂交（见Cox et al 1984），核酸探针为单链的RNA分子，产生自具有质粒逆转录系统的cDNA克隆（图20-2）。由于它是单链的，不像双链的DNA探针，在溶液中不会再退火（reanneal），因此，较大百分比的探针可参与杂交反应，较 ...

网络 第一节　原位杂交组织化学概述 　　一、核酸分子杂交技术 　　1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究，其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。自此以后，由于分子生物学技术的迅猛发展，特别是70年代末到80年代初，分子克隆、质粒和噬菌体DNA的构建成功，核酸自动合成仪 ...

网络 第二十章　原位杂交组织化学 　　原位杂交组织化学（In situ hybridization histochemistry ISHH）是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合，形成杂交体，然后再应用与标记物相应的检测系统，通过组织化学或免疫组织化学方法在核酸原有的位置进行细胞定位。这一技术为研究单 ...