基因克隆

基本概念1）基因工程（genetic engineering）、基因克隆、DNA重组、DNA克隆、分子克隆。2）克隆（clone）：无性繁殖——应用酶学的方法，在体外将目的基因与载体DNA结合成具有自我复制能力的DNA分子（重组子），再通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因转化子，进行扩增、提取获得大量同一DNA，或其表达产物。基因克隆的基本步骤1）连接外源基因和克隆载体，构建重组DNA分子； ...

本文介绍如何从携带重组质粒的克隆中释放出DNA并使其固定于硝酸纤维滤膜或尼龙膜，然后利用放射性标记探针与固定于滤膜上的DNA进行杂交的方法。

中国科学家在新一期英国《自然·遗传学》杂志上报告说，他们成功克隆了一个可帮助水稻增产的关键基因，该基因能使水稻向秆壮穗大的理想株型发展，在高产育种中具有重要应用前景。

克隆是英文“clone”的音译，在台湾与港澳一般意译为复制或转殖，是利用生物技术由无性生殖产生与原个体有完全相同基因组之后代的过程.

克隆是英文“clone”的音译，在台湾与港澳一般意译为复制或转殖，是利用生物技术由无性生殖产生与原个体有完全相同基因组之后代的过程.

快速TA克隆的突破 T载体是TA克隆载体的简称，就是利用载体的T末端和PCR产物的A末段连接而将目的基因克隆到载体中的方法。 目前市场上常见的T载体，根据连接方法可以分成两种： 方法 1、以T4连接酶进行连接的方法，这种方法的载体有promega、takara， 可以说这两家公司将这两种方法发挥到了很高的水平，转化子比较多，阳性率也不错，唯一的不足就是连接的时间长。因为连 ...

活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用,并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单,在直流电场作用的瞬间,细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～115μm ,这种通道能维持几毫秒到几秒,然后自行恢复。在此期间生物大分子如DNA 可通过这种微小的通道进入细胞。近年来活体电穿孔法用于转基因研究的报道不断增多,在基因治疗方面的优势也日趋显著,是一种很好的活体基因导入方法。

目前市场上常见的TA克隆试剂盒，根据连接方法可以分成两种： 方法1：以T4连接酶进行连接的方法，这两种方法转化子比较多，阳性率也不错，唯一的不足就是连接的时间长。因为连接时间越长效率越高，一般快速连接方法需要半个小时到一个小时；达到最佳的效果，要过夜连接。

原核表达之目的基因克隆

Gateway技术提供以下可能：通过去除冗长的亚克隆步骤节省您的时间，同时将您的基因转移到多个表达系统……

Clontech公司最新推出的Living Colors Fluorescent Timer，是唯一一种能随着时间的延长而由绿色变为红色的的荧光蛋白报告基因。这种颜色可变的荧光蛋白为实时研究启动子的调控时效提供了可能：在活细胞或者活的生物体内，你不但可以看到某个启动子什么时候、在什么位置开始启动基因的表达，还可以观察到它什么时候关闭表达――这在以前是不可能实现的――而且由于这种报告基因是荧光蛋白， ...

比起其它公司的原核表达系列来说Invitrogen有个非常突出的地方就是它的重组克隆技术。像之前Novagen大部分载体都是用传统的酶切、链接方式做重组质粒，但是Invitrogen的表达系统大量运用了它的TOPO技术和Gateway技术。 虽然现在在许多做科研的学生看来，能出实验结果是最重要的，中间的过程不是那么重要。可是只有创新的技术才能推动科学不断的进步，比如：如果我们一直采用手工法测序，那 ...

方法一 A液：1M，MnCl2： B液：1M，HEPES，pH=6.2-6.8，用无菌水配，配后不需灭菌； C液 称取CaCl2 0.10g，KCl 1.18g，全部转入细口试剂瓶，然后加入46ml三蒸水，轻轻振荡使所有组分充分溶解。将瓶塞盖上并用牛皮纸、棉线包扎，然后放入灭菌锅121℃高压灭菌备用。 取1管B液（0.6ml），全部加入C液(46ml)中，混匀后，再用1ml移液器加入3.3m ...

Protocol for the cloning of pSHAG-MAGIC2 shRNAs Gregory HannonCold spring harbor lab pSHAG-MAGIC2.doc ...

1) Prior to any ligation reaction you should always run one gel in which purified insert and cut backbone are run side by side preferably beside a known amount of cut DNA.You can then use this t ...

This procedure is used to analyze inserts in pUC-derived plasimids. 1. Suspend E. coli colonies harbouring plasmids in 50 microliters of TE. 2. Incubate for 5 min at 95 degrees or in boiling water. 3. ...

载体（vector）是指运载外源DNA有效进入受体细胞内的工具。载体同外源DNA在体外重组成DNA重组分子，在进入受体后形成一个复制子，即形成在细胞内能独自进行自我复制的遗传因子。因此，作为载体应该满足以下几方面的要求：①有某种限制酶的一个切点，最好是有许多种限制酶的切点，而且每种酶的切点只有一个；②外源DNA插入后不影响载体在受体细胞中进行自我复制，载体应对受体细胞无害，以及载体能接纳尽可能大的 ...

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