甲基化分析

Methylation-Specific PCRProtocol written by James HermaundefinedMethylation-specific PCR (MSP) is a simple rapid and inexpensive method to determine the methylation status of CpG islands. This approach allows the determination of methylation patterns from very small samples of DNA, i ...

多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome PCOS)是一种复杂的、病因不明的疾病，最新研究结果表明，胰岛素耐受(insulin resistance IR)在PCOS的发生过程中起了重要的作用。本研究主要致力于探究IR在PCOS发生过程中的分子机制，运用基因组DNA甲基化免疫沉淀技术（methylated DNA immunoprecipitation MeDIP) ...

甲基化是目前的研究热点，就我所做的一点工作并其中一点心得，与大家分享。希望能够对大家有所帮助。 第一部分 基因组DNA的提取。 这一步没有悬念，完全可以购买供细胞或组织使用的DNA提取试剂盒，如果实验室条件成熟，自己配试剂提取完全可以。DNA比较稳定，只要在操作中不要使用暴力，提出的基因组DNA应该是完整的。 此步重点在于DNA的纯度，即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提 ...

1. 基化特异性PCR。 甲基化特异性PCR(MSP)是Herman等首先提出的一种检测基因组DNA甲基化水平的常用方法。该法是将DNA经亚硫酸氢钠处理，非甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变。在PCR反应时，设计两套不同的引物对：一对引物序列针对经亚硫酸氢钠处理后的甲基化DNA链设计，若用该对引物能扩增出片段，说明该检测位点发生了甲基化；另一引物针对经亚硫酸氢钠处理后的非甲基化 ...

早期的基因组DNA甲基化分析技术，如SssI甲基转移酶分析法、氯乙醛反应法、免疫学抗体技术等，已经不能满足现代表观遗传学研究的需求。今年来常用的基因组甲基化的方法有以下两种。

表观遗传修饰(epigenetic modification) 是指基于非基因序列改变所致基因表达水平的变化，如DNA甲基化、组蛋白乙酰化和甲基化、RNA相关性沉默等。近年来大量的研究表明表观遗传学改变与细胞的生长、分化、凋亡、转化及许多疾病的发生发展都密切相关，尤其是在肿瘤的发生过程中扮演着重要的角色。 急性单核细胞白血病（AML-M5）属于造血系统恶性肿瘤，表现为骨髓和外周血原始和幼稚单核细 ...

HRM检测SNP技术是依据在一定的温度范围内将PCR扩增的产物进行变性，期间实时检测体系内荧光信号。荧光值随着温度变化，可绘制溶解曲线。每一段DNA都有其独特的序列，因而也就有了独特的熔解曲线形状，如同DNA指纹图谱一样，具有很高的特异性、稳定性和重复性。

在表观遗传学的DNA甲基化研究中，新一代的测序方法可得到大量的全基因组甲基化特征数据，需要验证其中特定靶序列与表观遗传修饰的生理相关性。此验证过程较具挑战性，因为甲基化位点的位置和频率的微小改变也会带来明显的变化。焦磷酸测序可在一次检测中快速定量一个或多个甲基化位点，是理想的验证方法。因此该技术在表观遗传学研究中逐渐成为数据分析的标准。

启动子高度甲基化是恶性肿瘤基因转录中的一种很常见的现象，被视为细胞恶性转化的标志之一。DNA 甲基化分析是一种基因检测工具，用于早期癌症检测、风险评估与治疗疗效评估，具有非常诱人的前景。

高分辨率熔解（HRM）是一种基于双链DNA在升温时的解链行为的差异来区分不同的PCR产物的新技术。HRM技术的高分辨率使其得以区分即使是单个碱基的差异，因此该技术得以广泛应用于SNP分型、突变扫描、种属鉴定和DNA甲基化分析，是目前经济和快速的基因分型和突变筛查方法之一。该有声视频摄录于2010年维也纳qPCR论坛。

HRM 介绍HRM 技术是high-resolution melting analysis 即高分辨熔解曲线分析技术，是近年国外兴起的一种全新的突变扫描和基因分型的遗传分析方法。基于高效稳健的PCR 技术，HRM 不受突变碱基位点与类型局限，无需序列特异性探针，在PCR 结束后直接运行高分辨熔解，即可完成对样品突变、单核苷酸多态性-SNP、甲基化、HLA 配型等的分析。因操作简便快速，使用成本低， ...

本文主要介绍了DNA损伤的几种类别

DNA甲基化是表观遗传学的重要研究内容之一，它可以在转录水平抑制基因的表达。具体的过程是在胞嘧啶－鸟嘧啶（CpG二核苷酸）的5位碳原子上添加了一个额外的甲基团，形成5－甲基胞嘧啶。

用甲酰胺从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA包括用蛋白酶K消化细胞和组织，用高浓度甲酰胺分离DNA-蛋白质复合物，用火棉胶袋充分透析去除蛋白酶和有机溶剂等过程，制备的基因组DNA很大，适于用高包装容量载体构建文库及通过脉冲凝胶电泳分析大片段DNA。

近20年来，DNA甲基化的研究逐渐成为新的研究热点。此次有声技术讲座将会从DNA甲基化研究的整个实验流程和大家探讨实验中经常遇见的难题，和大家分享来自QIAGEN的DNA甲基化解决方案。

QIAGEN公司作为作为全球生命科学解决方案的领先供应商一直致力于提供完整解决方案，我们的解决方案涉及生命科学的各个研究和应用领域。本期我们将为您提供表观遗传学中关于DNA甲基化状态研究的完整解决方案。

高分辨率熔解（High Resolution Melt，HRM）是一种最新的遗传学分析方法，主要是根据DNA序列的长度，GC含量以及碱基互补性差异，应用高分辨率的熔解曲线对样品进行分析，其分辨精度可以达到对单个碱基差异的区分。

甲基化是目前的研究热点。作者在本文介绍了一些甲基化研究的心得体会。

摘要： DNA甲基化是表观遗传学(Epigenetics)的重要组成部分，在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育以及人类肿瘤发生中起着重要作用，是目前新的研究热点之一。随着对甲基化研究的不断深入，各种各样甲基化检测方法被开发出来以满足不同类型研究的要求。这些方法概括起来可分为三类：基因组整体水平的甲基化检测、基因特异位点甲基化的检测和新甲基化位点的寻找。本篇将主要介绍目前存在的大部分DNA甲基化研 ...

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