DNA提取与纯化

1. 加入 1/10 体积的乙酸钠（3 mol/L ，PH=5.2）于 DNA 溶液中充分混匀，使其 最终浓度为 0.3 mol/L； 2. 加入 2 倍体积用冰预冷的乙醇混合后再次充分混匀置于- 20℃中 15~30 分钟； 3. 12000 g 离心 10 分钟，小心移出上清液，吸去管壁上所有的液滴； 4. 加入 1/2 离心管容量的 70％乙醇，12000g 离心 2 分钟，小心移出上清液 ...

此方法适用于小量质粒DNA的提取提取的质粒 DNA可直接用于酶切PCR 扩增。 1. 取 1.5ml 细菌培养物于 EP 管中，4000rpm 离心 1 分钟，弃上清液，使细菌沉淀尽量干燥； 2. 将细菌沉淀重悬于用冰预冷的 100μl 溶液 I (50 mmol/L 葡萄糖，10 mmol/L EDTApH 8.0，25 mmol/L Tris-HClpH 8.0) 中，剧烈振荡； 3. ...

1. 琼脂糖电泳，将特异电泳带用刀切下放入到 EP 管中，称琼脂糖带的重量； 2. 按照每100mg加 400μl 的量加入binding buffer， 放入到EP管振荡器中， 45℃～55℃温育振荡，直到所有的琼脂糖都溶解（大概要 5 分钟） ； 3. 取出纯化柱，将上述溶解液转移至柱中，室温下放置2 分钟，8000rpm 离心1 分钟，弃 EP 管中的液体，将纯化柱放回 EP 管中； ...

质粒、噬菌体等经酶切，电泳；PCR产物经电泳后，常常需要对一些DNA电泳片段进行回收和纯化，用于亚克隆、探针标记等。DNA回收和纯化常用方法有压碎法、低融点琼脂糖法、冻融法等，也有现成的试剂盒供应。 一、冻融法 1. 紫外灯下仔细切下含待回收DNA的胶条，将切下的胶条（小于0.6g）捣碎，置于1.5ml离心管中； 2. 加入等体积的Tris-HCl饱和酚（pH 7.6）， ...

一、碱变性法提取质粒DNA 质粒(Plasmid)是细菌染色体外能自身独立复制的双股环状DNA。带有遗传信息，可赋予细菌某些新的表型。将质粒指纹图谱分析方法、质粒DNA探针技术及检测质粒的PCR技术用于临床感染性疾病的诊断和流行病学调查已成为现实。质粒作为载体在基因工程中起着重要的作用。 分离和纯化质粒DNA的方法很多，但这些方法基本包括三个步骤：即细菌的培养和质粒DNA的扩增，细菌菌体的裂解； ...

随着分子生物技术的发展，科研及临床检测要求的提高，核酸纯化方法也经历了密度梯度离心，酚氯仿、苯酚、异戊醇抽提，二氧化硅吸附等化学物理方法。目前，基于硅胶膜对核酸特异结合的原理所开发的方法已成为核酸纯化的主流方法。为了减少化学、物理因素对核酸的破坏和降解，科学家们力求开发快速、温和的纯化方法，在确保遗传信息的完整性同时，提高工作效率。而KingFisher磁珠纯化法不仅满足了科研工作者对核酸质量的高要求，同时其自动化、通量高、速度快、灵敏度高的特性也提高了科研工作者的工作效率。目前转移磁珠的磁珠纯化方案正在逐步替代以往的各种方法，特别是目前普遍应用的离心柱法。

背景： 全血中提取DNA是一项古老又基本的分子生物学的工作，根据不同的下游的实验和分析，历史上使用方法种类非常多，传统酚氯仿抽提法，高盐盐析法，硅胶模离心柱吸附法，磁珠法，等等。各种方法都有自己的优点和缺点。不同的方法适合不同的下游实验需求。一直以来血样，尤其是病例血样的采集是一个很繁琐和高成本的问题。随着时代的发展，各种成本更是急剧上升，准确、清晰的采集血样的成本急剧上升的后果是研究工作者非常 ...

粪便基因组DNA快速提取方法，无抑制物，可直接做PCR。采用硅胶膜技术从新鲜或冷冻人类粪便或其他样品类型（混有高浓度的PCR抑制剂）中抽提多至30μg 的基因组、细菌、病毒和寄生物DNA。独特的吸附树脂配合经优化的缓冲液可去除PCR抑制剂。方便的Aidlab 离心柱纯化过程只需40分钟，用于从粪便中纯化最多 ...

从全血中提取DNA是一项古老又基本的分子生物学的工作，根据不同的下游的实验和分析，历史上使用方法种类非常多，传统酚氯仿抽提法，高盐盐析法，硅胶模离心柱吸附法，磁珠法，等等。各种方法都有自己的优点和缺点。随着时代的发展，尤其是近年来，各种高通量的下游应用，比如血库HLA分型，芯片制作，遗传分析，市场需要一种低成本，速度快，操作简单，高通量的全血DNA提取方法。 在这个背景下，硅胶膜离心吸附柱型的产品成了很多客户的首选。

由土壤和沉积物萃取高分子量基因组DNA，首先是研磨以及β-巯基乙醇作用裂解细胞，然后用氯仿异戊醇和异丙基醇提取基因组DNA，最后氯化铯梯度超速离心进一步纯化所提取的基因组DNA。

Madison, WI USA. （2010年11月3日) Promega新推出的ReliaPrep™大容量高通量gDNA提取系统（ReliaPrep™Large Volume HT gDNA Isolation System）将纯化试剂、附属设备及自动化液体处理技术进行了独特组合，从而可为生物样品库提供更快的自动化血样处理方案。新的ReliaPrep 32 LV HSM仪器整合了加热、振荡、提供磁力等功能，简化了样品处理过程，使得96个血样（3-10mL）在Hamilton MICROLAB® STARplus液体处理工作站中的自动处理时间少于8个小时。

PREPARE SOLUTIONS 1. Glycerol mix (1 L):Weigh 25 grams (liquid weight) of glycerol and add dH2O to 1 Liter (Autoclave)2. Potassium mix (1 L):Mix 170 mL of 1M KH2PO4 (monobasic) 720 mL of 1M K2HPO4 (di ...

Restriction enzymes are expensive ($40 to $200 a vial): keep the enzymes at -20℃. Plan your digests to be small and convenient. The digest is composed of DNA sample (volume should not be more than abo ...

I usually use Linear polyacrylamide as a carrier for DNA precipitation by EtOH. I have read about using glycogen as a carrier I would like to know if anyone knows a method avoiding not to use acrylami ...

Plasmid isolated by this procedure can be used routinely for electrophoretic analysis restriction endonuclease digestion and transformation of E. Coli. sequencing PCR and most other molecular biologic ...

Q：利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段？A：可能有以下几个原因： 1. 胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解； 2. 胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收； 3. 电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；4. 漂洗液中未加入无水乙醇。Q：能否改用去离子水洗脱？A：可以。但是实验室所用纯水一般 ...

问题可能原因解决方案回收率低膜结合液（MB）使用量不当按每1 mg凝胶或每1 µl DNA溶液加入1 µl膜结合液的比例（1:1）加入膜结合液溶胶不完全尽量将胶切成小块，加入膜结合溶液后于55～65℃加热助溶，确保溶胶彻底离心转速不够，溶液中的DNA没有与硅胶膜充分结合使用离心力≥12000x g的离心机，如达不到该转速，可通过适当延长离心时间确保胶溶液完全通过硅胶膜膜漂洗液（MW）未添加乙醇第一 ...

细胞内的核酸包括DNA与RNA两种分子，均与蛋白质结合成核蛋白(nucleoprotein)。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白(deoxyribonucleoprotein，DNP)，RNA与蛋白质结合成核糖核蛋白(ribonucleoprotein，RNP)。其中真核生物的DNA又有染色体DNA与细胞器DNA之分。前者位于细胞核内，约占95%，为双链线性分子；后者存在于线粒体或叶绿体等细胞器内 ...

1. Separate DNA fragments in an agarose gel cast with 0.5 mg/mL Ethidium bromide. Locate bands with a hand-held long-wave UV lamp.2. Slice the gel with a razor blade above and below the bands of inter ...

This procedure isolates DNA from agarose gels by filtration through a filter-paper column. The column is made in a 500 µL tube from a slurry of filter paper in TE buffer.MaterialsWhatman 3MM filter pa ...