DNA提取与纯化

NOTE: THIS IS FINE FOR SOUTHERNS BUT NOT FOR SCREENING BY PCR. (from Ruixia 7/99 from protocol by Stef Oehen 7/94). 1. Put 1 cm tail in 1.5 ml microcentrifuge tube. 2. Add 500µl Tail Buffer an ...

本方法有多种用途，主要包括： 从琼脂糖凝胶中分离纯化DNA片段； 从DNA反应物中纯化目的DNA片段，如回收纯化PCR产物、酶切连接反应中的DNA片段； 从探针制备反应物中去除未标记上的核苷酸以及小的DNA片段（比如引物）； DNA浓缩、去盐及去除杂质。 本试剂盒的主要成分“基因纯”试剂是无毒、无味、无腐蚀作用的白色颗粒，能专一性结合0.2kb到50kb大小的DN ...

一、实验目的 ： 1、 掌握质粒DNA 分离，纯化的原理 2、 学习煮沸法快速提取质粒DNA 的方法 3、 学习DNA的限制性酶切的基本技术 4 、 学习利用琼脂糖电泳测定DNA片段的长度 二、实验原理 在基因工程中，DNA 分子的切割是由限制性内切酶来完成的。限制性内切酶能识别特定的DNA 序列，在一定的条件下切断双链DNA 。限制性内切酶的作用效率是受多方面因素影响的，如反应温度，缓 ...

Localization of particular sequences within genomic DNA is usually accomplished by the transfer techniques described by Southern (1975). Genomic DNA is digested with one or more restriction enzymes an ...

一、目的： 了解分离提取DNA的一般原理，掌握从动物肝脏中提取DNA的方法。 二、原理： 在浓氯化钠（1—2mol·L-1）溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很大，核糖核蛋白的溶解度很小。在稀氯化钠（0.14mol·L-1 ）溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很小，核糖核蛋白的溶解度很大。因此，可利用不同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提 ...

1. Pour a vertical acrylamide gel using TEA buffer. A 4 % non denaturing gel is correct for most applications. 2. Run out DNA fragments. For fragments greater than 500 bp run the xylene cyanol dye to ...

Procedure for 100 ~ 300 mg of tissue. 1. Collect fresh tissue coleoptiles or small amount of leaf tissue. Use about three inches of a leaf blade. Preferably younger tissue. Fold leaf and place i ...

DNA Extraction from Archival Formalin-fixed Paraffin-embedded Tissue Sections Author: Shi et al. Source: Contributed by APostodoc Abstract: Describes two methods of extracting DNA from archived paraff ...

(adapted from Bruce A. Roe Department of Chemistry and Biochemistry The University of Oklahoma Norman Oklahoma 73019 broe@ou.edu) Typically 2.5 - 3 volumes of an ethanol/acetate solution is added to t ...

Reagents: Soln 1: 50 mM glucose/10 mM EDTA/25 mM Tris pH 8. Autoclave before use. Add 2 mg/ml Lysozyme just prior to use. Soln 2: 0.2 N NaOH/1% SDS. Keep solution at room temperature. Solution is norm ...

Purification of PCR fragments for cloning (adapted from Bruce A. Roe Department of Chemistry and Biochemistry The University of Oklahoma Norman Oklahoma 73019 broe@ou.edu) After an aliquot of the PCR ...

Table of Contents 10X TBE 40% Acrylamide Stock Alkaline lysis solution 10X TBE: 216 g Tris base 110 g boric acid 16.6 g EDTA Add water to 2 liters. 40% Acrylamide/Bisacrylamide (40% A&B): 38 ...

【基本原理】 此试剂盒用于质粒DNA小量纯化。该试剂盒采用了传统的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜技术，具有高效、快速、方便之特点，全套操作只需1小时便可完成。 使用本试剂盒可从1-4ml 的过夜培养的菌液中纯化得到1～20μg的高纯度质粒DNA，此质粒DNA可直接用于DNA序列分析以及各种酶促反应等。 【器材】 1．离心机 2. Spin Column 3. Collection Tu ...

1、将已经电泳确定的可回收的酶切产物在合适浓度的回收用琼脂糖凝胶进行电泳。最好换用新的电泳缓冲液10 × TAE（10 ×Tris-乙酸）。 2、当溴酚蓝迁移至足够距离时（至少2 cm以上），在长波紫外灯下观察，用清洗过的刀片在目的片段前切下与目的片段同长，宽度适当（一般2 cm左右）的胶块。 注意： ①不要忘记在胶下垫一个新的塑料手套防止污染。 ②小心不要将回收胶切裂，同 ...

7.1. ...

Most recent version of protocol: 2/14/96 Dr. Paul J. Zambino Research Plant Molecular Pathologist U.S.D.A. Forest Service North Central Forest Experiment Station Forestry Sciences Laboratory 5985 Hwy. ...

准备工作： 细菌培养：小量提取质粒DNA 鉴定正确后，将菌液以1/50~1/20体积的比例接种到250ml液体培养基中，37℃振荡培养过夜至对数生长晚期。 注：培养体积与最终质粒DNA 的收获量并无线性关系。只要培养条件适宜，50ml的培养液有时也可得到总量高达1mg以上的质粒。 操作步骤 ： 1、细菌的收获：将菌液倒入合适的离心管中，8000g离心5分钟，弃上清，并在吸水纸上倒置离心管使上 ...

1.Excise DNA section from gel into eppendorf tube. 2.Add 2-3 volumes of NaI (NaI for geneclean - dissolve 89.9 g NaI in 100ml dH2O store in light proof bottle) solution to gel fragment (best to be on ...

本方法由DellaportaWood和Hicks(1983)的方法修改而成。其基本原理是研磨的组织细胞用热的SDS裂解后，加入高浓度的KAc，0℃放置以除去蛋白和多糖类杂质，最后用乙醇或异丙醇沉淀。 一 材料、试剂和仪器 1 材料 新鲜的组织材料或-80℃冻存的材料 2 试剂 (1)提取缓冲液 Tris-HCl 100mmol/L（pH8.0） EDTA 50mmol/L （pH8.0） NaCl ...

Purp ...