DNA提取与纯化

用牙签从琼脂培养基上挑取的菌落可直接用于制备质粒DNA。

经Triton X-100、溶菌酶和加热处理可从大量（500ml）细菌培养物中分离质粒DNA，所获得的质粒通过柱层析或CsCl-溴化乙锭梯度离心可进一步纯化。

经Triton X-100、溶菌酶和加热处理可从小量（1～2ml）细菌培养物中分离质粒DNA所获得的质粒则可以用电泳或限制性内功核酸酶消化的方法鉴定；经PEG处理进一步纯化后，其可以用做DNA测序反应的模板。

胶回收 1. 提高胶回收量的办法： 1) 增加电泳时的上样量。 2) 电泳缓冲液用新鲜配制的。 3) 切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积：含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。 4) 把切的两块或多块胶融化后，无论多大的体积都用一个管子，转移到同一个柱子上。 5) 溶胶时所加的溶液可多一点，这样更有利于DNA与膜的结合，不过一般不要多余750μl。 6) 胶回收的关键是通过柱子的 ...

TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用，与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中间层可回收DNA；用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。 TRIzol试剂可用于小量样品（50-100mg组织、5×106细胞）也适用于大量样品（≥1g组织、>107细胞）。对人，动物，植物组织，细菌均适用，可同时处理大量不同样品，整个提取过程在一小时内即可完成。分离的总RNA无蛋白质和DNA污染，可用于Northern Blot，dot blot，ployA筛选，体外翻译，RNase保护分析和分子克隆。在用于RT-PCR时如果两条引物存在于一个单一外显子内，建议用无RNase的DNaseⅠ处理RNA样品，避免出现假阳性。共纯化的DNA可用作标准，比较不同样品RNA的得

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Hahn Lab (adapted from J.LeatherwoodPtashne lab) last modified MonAug 272001 Cell Growth 3 liters of cells are grown in YPD (3% glucose)to A600 of 3-5.Antifoam A (two drops from a P200 pipetman)is ad ...

Hattoti's protocol adapted to cell culture : Hattori MTugores AVeloz LKarin MBrenner D (1990)A simplified method for the preparation of transcrip-tionally active liver nuclear extracts.DNA Cell Biol.V ...

PROTOCOL TO EXTRACT DNA FROM PARAFFIN BLOCKS 1.Cut 10-20X 10μm sections of formalin fixed paraffin samples into eppendorf tubes. 2.Add 1 ml xylene mix incubate at 55℃ for 15mins. Release pressure s ...

DNA extraction from Mutation Detection Enhancement (MDE) Gel Stained with Silver Nitrate Source: Contributed by Mohammad Reza Abbaszadegan et al. Abstract: Single strand conformational polymorphism ( ...

Recovering DNA from agarose gels Paul N. Hengen Ph.D. (July 14 1999) Introduction ========Methods and reagents is a unique monthly column that highlights current discussions in the newsgroup bionet.mo ...

Mate ...

NH4Ac and EtOH precipitation of DNA Add NH4Ac (10M stock or solid) to the sample for a final concentration of 2.5M mix (spin at 4℃ transfer the supernatant to a new tube; optional spin for extra puri ...

CTAB TECHNIQUE / Method / Schedule / Protocol FOR DNA ISOLATION / DNA EXTRACTION FROM PLANT LEAF / LEAVES SAMPLES (see also DNA RNA double isolation procedure if both DNA and RNA are needed) Reagents ...

Silica Clean-up of DNA --------------------------------------------------------------------------------Materials: Silica Suspension: add 2g of silica to 15ml of H2O wash 3x by centifugation at 2000 x ...

1. Grow 10-mL yeast cultures overnight to saturation in appropriate media at 30℃. 2. Spin cells down for 5min at 1500rpm (Beckmann) and resuspend the cells in 0.5 mL sterile distilled water. 3. Transf ...

Protocol f ...

实验目的 将复杂的细胞分子混合物加入有机溶媒萃取以除去蛋白质及其它成分，就可以纯化DNA。一般常用酚及氯仿(phenol/chloroform)可使蛋白质变性(denaturaion)的特性来进行萃取的步骤，DNA和RNA不溶于有机溶媒中，而溶于水层。另外，分子选殖(molecular cloning)常利用洋菜胶(agarose)来分离不同大小的DNA片段或用以纯化DNA。 核酸定量可利用核酸会 ...

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DNeasy® 96 Plant Protocol for Isolation of DNA from Fresh Plant Leaves Using the Mixer Mill MM 300 一、Important notes before starting （使用前的重要注释） 1、Take time to familiarize yourself with the Mixer ...