DNA测序

焦磷酸测序（Pyrosequencing）技术是新一代DNA序列分析技术，该技术无须进行电泳，DNA片段也无须荧光标记，操作极为简便。

The Spliceosome Dance（剪切子的模拟动画）

This protocol adapts the method of Williams and Bartel (Nucleic Acids Res. 23:4220) to generate single-stranded DNA suitable to go directly into the emulsion PCR step of 454 pyrosequencing. The protocol was first performed by Wendy Johnston (Bartel lab).

毛细管电泳(capillary electrophoresis CE)又叫高效毛细管电泳(HPCE) 是近年来发展最快的分析方法之一。1981年Jorgenson和Lukacs首先提出在75μm内径毛细管柱内用高电压进行分离 创立了现代毛细管电泳。1984年Terabe等建立了胶束毛细管电动力学色谱。1987年Hjerten 建立了毛细管等电聚焦 Cohen和Karger提出了毛细管凝胶电泳 ...

毛细管电泳技术（Capillary Electrophoresis CE）又称高效毛细管电泳（HPCE）或毛细管分离法（CESM），毛细管电泳方法虽新工艺，但历史悠久，它是在电泳技术的基础上发展的一种分离技术。电泳作为一种技术出现，已有近百年的历史，但真正被视为一种在生物化学中有重要意义的技术，是由1937年A. Tiselius 首先提出。传统电泳最大的局限是难以克服由高电压引起的焦耳热，196 ...

T ...

Cepko/Tabin Lab Harvard University This protocol works well from a 5 ml starting culture or a 1 ml starting culture (adjust volume accordingly). http://axon.med.harvard.edu/~cepko/protocol/mike/S2.ht ...

The following protocol is based on our modifications of R. Kraft J. Tardiff K. S. Krauter and L. A. Leinwand. Biotechn . 6(6):544-545 1988. 1.Inoculate 2-5 ml of L broth containing the appropriate ant ...

Hahn Lab，The Fred Hutchinson Cancer Research Center and Howard Hughes Medical Institute http://www.fhcrc.org/science/labs/hahn/methods/mol_bio_meth/BigDye Protocol.pdf ...

10X TBE per liter Sequencing dye ------------------- ---------------- &nb ...

掌握双脱氧链终止法测定DNA序列的原理与方法 DNA聚合酶催化的DNA链延伸是在3’-OH末端上进行的。由于2’，3’-双脱氧三磷酸核苷酸(ddNTP)的3’-位脱氧而失去游离-OH，当它参入到DNA链后，3’-OH末端消失，使DNA链的延伸终止。 本实验根据此原理，将待测DNA片段插入单链噬菌体M13载体，并用合成的寡聚核苷酸引物 ...

10X TBE, per liter Sequencing dye ------------------- ---------------- 108g Tris base 80% formamide 55g boric acid 10mM NaOH 40ml 0.5M EDTA 1mM EDTA 0.1% xylene cyanol 10% APS 0.1% bromophenol blue ------------------- dissolve 0.1g ammonium persulfate in 10ml dH2O and store frozenGEL COMPOSITIONS per liter 6% 8% 20% ------------------------------------------------ acrylamide 57g 76g 190g bis acrylamide 3g 4g 10g urea 500g 500g 500g 10X TBE 100ml 100ml 100ml ddH2O 300ml 300ml 300ml

alimama_pid="mm_10043573_137377_1822161"; alimama_titlecolor="FF9900"; alimama_descolor ="552c55"; alimama_bgcolor="f7f7f7"; alimama_bordercolor="f7f7f7"; alimama_linkcolor="552c55"; ...

This protocol gives M13 quality sequence when used with the Quick DNA Plasmid Prep. protocol D.2.1、Solutions Denaturation Solution　　2 M NaOH 200 ml 10N NaOH　　2 mM EDTA 4 ml 0.5 M EDTA pH 8.0　　 ...

1. For double-stranded DNA templates: a. Denature template: 10ml DNA (5-10g or alkaline lysis mini prepDNA) 8ml ddH2O　　2ml 2N NaOH　　-incubate 30' at 37℃. b. Dry-ice precipitate: +10ml 4M NH4OAc 100ml ...

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在分子生物学研究中，DNA 的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等（1977）发明的双脱氧链末端终止法和Maxam和 Gilbert（1977）发明的化学降解法。这二种方法在原理上差异很大，但都是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，产生A，T，C，G四组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测，从而获得DN ...

This is a rapid method for chemical DNA sequencing which is commonly used as ladder for footprinting reactions or for sequencing of short DNA oligonucleotides. Reference: Bencini et al. (1984) Biotech ...

Hahn Lab，The Fred Hutchinson Cancer Research Center and Howard Hughes Medical Institute http://www.fhcrc.org/science/labs/hahn/methods/mol_bio_meth/Big%20Dye%20Protocol.pdf ...