DNA基础知识

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相关专题 寡核苷酸技术已在生命科学实验一定的范畴中得到广泛的应用，其中目的基因和探针这两个因素尤为重要。本文对illumina建立的基因库主要信息以及检测方法和设计流程等方法作详细的介绍。 一、介绍 人类基因组标准寡核苷酸库针对人类基因组中20，726个确证的基因设计了22，740个70mer的寡核苷酸探针。每一个探针都经过了严格设计和优化 ...

相关专题 DNA双螺旋结构的前前后后 　　最理想的而且没有遭受灾难 或外来干扰行星系统中，在距离恒星的某个特殊位置，一定有一类微弱螺旋状的波存在，它能够聚敛某行星上的自然原料，并组织形成“生命”的DNA分子。因为 DNA是“波”，“波”是 DNA。 DNA组织形成与行星系统演变同步的理论听起来似乎有些荒谬，但却可以被(俄罗斯的弗拉迪米尔.琶 ...

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相关专题 DNA双螺旋结构的前前后后 　　詹姆斯 沃森《双螺旋——发现DNA结构的故事》 　　DNA双螺旋与分子 　　豌豆品种进行杂交实验的结果。孟德尔曾经研究过圆形和皱形种子，红花和白花等性状在子代植物中的分布情况。他的杂交实验结果使他得出了有机体携带着并传递给子代很多遗传因子或称基因的著名结论。每一个基因决定一个性状，因此有机体的全貌受 ...

相关专题 不少的生命科学关键实验中都会用到寡核苷酸作为标记，因而对于这一名词进行充分的了解显得尤为重要。本文从寡核苷酸探针的类型、优点、标记方法三方面对这一技术进行详细的介绍。 常用的寡核苷酸探针有3种：①特定序列的单一寡核苷酸探针；②较短的简并性较高的成套寡核苷酸探针；③较长而简并性较低的成套寡核苷酸探针。多用32P标记寡核苷酸探针，如： ...

相关专题 好的开始是成功的一半，引物对于整个PCR实验的成功与否就起着非常关键的作用。本文对其中的重要因素——寡核苷酸的详情及其与PCR实验的整个关系做一介绍。希望对大家的实验有所启发。 1.简介 寡聚核苷酸引物的选择，通常是整个扩增反应成功的关键。所选的引物序列将决定PCR产物的大小、位置、以及扩增区域的Tm值这个和扩增物产量有关的重要物 ...

相关专题 一、Feulgen氏染色法： 该方法是显示DNA的一种常用方法。其基本原理是在酸水解下，去DNA中的嘌呤，使脱氧核酸的醛基暴露出来，然后再与Schiff氏试剂反应，生成紫红色产物，用于显微分光光度计和流式细胞测量计对细胞进行静态DNA测量和流式细胞测量。 操作方式： (1)切片常规脱蜡至水。(2)蒸馏水洗，1NHCI水溶稍洗。(3 ...

相关专题 QPCR 学生物的童鞋们，PCR实验你一定听说过，做过，可是，你handle得了吗?有时，各种假阳性、各种扩增、各种拖带就是挥之不去、不清自来，这个时候该如何是好呢?一起看看前辈们用经验换来的肺腑真理吧!PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PC ...

相关专题 实验九 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达和降解物阻遏作用【实验目的】1.了解外源基因在原核细胞中表达的基础理论。2.掌握乳糖操纵子的调节机制和操作方法。【实验原理】1.外源基因在原核细胞中的表达蛋白质通常是研究的最终目标，因此蛋白质的表达在基因工程中占有非常重要的地位。常用的表达系统有原核细胞和真核细胞。原核细胞表达系统主要使用大肠杆 ...

相关专题 实验八 重组克隆筛选（酶切鉴定）【实验目的】1.掌握质粒提取的基本方法的原理；2.学习和掌握限制性内切酶的使用方法。【实验原理】重组克隆的筛选和鉴定是基因工程中的重要环节之一。不同的克隆载体和相应的宿主系统，其重组克隆的筛选和鉴定方法不尽相同。从理论上说，重组克隆的筛选是排除自身环化的载体、未酶解完全的载体以及非目的DNA片断插入的 ...

相关专题 实验七 质粒DNA的制备【实验目的】1.了解质粒的特性及其在分子生物学研究中的作用；2.掌握质粒DNA分离和纯化的原理；3.学习碱裂解法和煮沸法分离质粒DNA的方法。【实验原理】质粒是细菌内的共生型遗传因子，它能在细菌中垂直遗传并且赋予宿主细胞特定的表型。质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的。与天然质粒相比质 ...

相关专题 实验五 PCR产物的TA克隆 (DNA的胶回收和连接)【实验目的】1.掌握DNA回收和连接的基本原理。2.学习和掌握PCR产物的T-vector克隆。【实验原理】1.DNA片段回收方法：DNA片段在适当浓度的琼脂糖凝胶中，通上一定电压进行电泳，不同大小的DNA分子由于迁移率的不同而分离开。切下带有所需DNA片段的凝胶，用冻融法、玻璃 ...

相关专题 实验四 逆转录PCR (RT-PCR)【实验目的】1．了解用逆转录PCR法获取目的基因的原理。2．学习和掌握逆转录PCR的技术和方法。【实验原理】聚合酶链式反应（PCR）过程利用模板变性，引物退火和引物延伸的多个循环来扩增DNA序列。因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板，是一个指数增长的过程，使其成为检测核酸和克隆基因的一种非 ...

相关专题 引物设计一步步教你设计简并引物 　　近日看到两位虫友发帖交流有关CODEHOP方法设计简并引物，这让我想起两年前因为需要获得几个家族的未知序列特异基因而学习利用codehop方法设计简并引物的经历。当时，通过常规方法设计出来的简并引物扩增效率极低，而且特异性非常差，为此纠结了好一段时间。后来从一同事那里得知设计简并引物可以利用cod ...

相关专题 　　DNA结构 — 概述 　　DNA由两个链状分子(多聚核苷酸)围绕彼此旋转，形成了典型的双螺旋结构。细胞通过把四种核苷酸连接在一起形成多聚核苷酸链。用来构建DNA链的核苷酸有腺嘌呤(A)，鸟嘌呤(G)的胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T)。DNA储存用来制造细胞使用的多肽的信息。DNA链上核苷酸的顺序(称为基因)说明了多肽链上的氨基酸的 ...

相关专题 DNA双螺旋结构的前前后后 　　DNA双螺旋结构：极其复杂的新发现 　　DNA双螺旋结构是有史以来最伟大的科学发现之一。DNA分子是建立每个生物体生理特征的最著名的遗传分子，它是由詹姆斯•沃森和弗朗西斯•克里克在1953年发现的。直到2001年中期，人类基因组计划和塞莱拉基因组公司才联合发表了DNA分子的真正性质 ...

相关专题 　　简并引物设计的方法(包括实际操作步骤)简并引物是指用来编码一段短肽序列的不同碱基序列的混合物。主要用来同源克隆未知的基因，或用来分析某一种基因多态性的一种方法。 　　简并引物设计的常见程序如下： 　　1. 利用NCBI搜索不同物种中同一目的基因的蛋白或cDNA编码的氨基酸序列。 　　因为密码子的关系，不同的核酸序列可能表达的氨 ...

相关专题 　　引物设计原则： 　　1。长度 一般为15-30bp，常用的是18-27bp，但不能大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，即Taq酶的最适温度 　　2。碱基分布的均衡性 同一碱基连续出现不应超过5个 　　GC含量一般40-60% 　　GC含量太低导致引物Tm值较低，使用较低的退火温度不利于提高PCR的特异性 　　GC含量 ...

相关专题 引物设计 问题四：如何利用MRNA序列和DNA序列，用PRIMER 5查找已知引物的产物位置，并确定其是否跨内含子。 1)找到目的引物的DNA序列和MRNA(cdna)序列，以问题三中用primer-blast设计的第8条引物为例。 2)打开PRIMER 5，将CDNA序列贴入-》点击primer-》显示primer primer ...