DNA基础知识

　腺病毒的一般特性 腺病毒的形态是特征性的二十面体病毒壳体（Stewart et al. 1993）。其病毒壳体含有三种主要的蛋白：六邻体（II），五邻体基底（III）和纤突（IV），还有多种其他的辅助蛋白VI，VIII，IX，IIIa和Iva2（Fig. 1）。腺病毒基因组是一个线性的双链DNA，其5’端与一种末端蛋白（TP）共价结合（Rekosh et al. 1977），5’端上还具有 ...

自杀性质粒载体完全可以自己构建，只要保证两点：１，自杀性质粒载体不能在你的宿主菌里进行复制，也就是说载体上不能有能在宿主菌中复制的复制子；２，要由筛选标记． 自杀性质粒载体不能在你的宿主菌里进行复制，否则会导致细菌染色体突变株的构建失败。但是在构建时，要注意以下方面：1。在制备质粒载体和DNA插入片断时：2ug 5kb大小的线状DNA大约含有1.4poml/L5'末端磷酸。5‘突出端脱磷需要CIP ...

核酸分子杂交技术 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针（probe）待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组D ...

A. 吸附法 优点：做作条件温和、简便；成本低；载体可反复使用不足：对离子强度、pH、温度等因子敏感，故酶易损漏，且酶转载容量较小B.共价偶联法优点：载体与酶偶联的方法多样化；固定化的酶非常稳定，损漏少不足：偶联试剂对生命组织多有一定毒性；偶联条件激烈，易引起酶失效；成本较高C.交联法优点：可用的交联试剂多，技术简易；稳定性较高不足：交联条件较激烈，常出现扩散限制，使用有一定难度D.包埋法优点：可 ...

以下是所有的看家基因的列表，大家在设计引物时，可以直接采用这些基因的序列，本表来自于Trends in Gentics上一篇文献，内容全面，所有的看家基因均标注了基因银行号（Genbank），可以直接到pubmed中查询得出。引物设计可以推荐用primer 5，也可以直接与我们联系设计，有关事宜，请点击：http://www.bioon.net/service/meeting/200506/130 ...

生物大分子制备的前处理 生物大分子制备的前处理(生物材料的选择、细胞破碎、生物大分子的提取） 1生物材料的选择 制备生物大分子，首先要选择适当的生物材料。材料的来源无非是动物、植物和微生物及其代谢产物。从工业生产角度选择材料，应选择含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低的原料，但往往这几方面的要求不能同时具备，含量丰富但来源困难，或含量来源较理想，但材料的分离纯化方法繁琐，流程很长，反倒不如含 ...

DNA重组技术（或基因工程）是20世纪生物学的伟大成就，并已渗透到生命科学包括医学 各个领域，为肿瘤的实验研究和临床诊断及治疗提供了崭新的技术和有用的工具。本附录扼要介绍在分子肿瘤学领域中常用的分子生物学基本技术及其在肿瘤研究中的应用，着重介绍它们的原理和应用。至于具体的技术方法和操作步骤可参阅《分子克隆实验指南》（第二版，科学出版社，1992年）等实验指导。 一、常用的分子生物学基本技术核酸分子 ...

IS PCR的技术特点 （1）既具有PCR的特异性与高灵敏性，又具有原位杂交的定位准确性；（2）测到低于2个拷贝量的细胞内特定DNA序列，甚至可检测出单一细胞中的仅含一个拷贝的原病毒DNA；（3）有助于细胞内特定核酸序列定位与其形态学变化的结合分析；（4）可用于正常或恶性细胞，感染或非感染细胞的鉴定与区别。 IS PCR的基本方法 IS-PCR是PCR和原位杂交两种技术的绫事，实质是一种将靶DNA ...

Universal primers for gene knock-out using dominant drug markers: Kan Clonat and Hygromisin-B. Forward primer: 5’ TCAGGGGCATGATGTGACT 3’Reverse primer: 5’ AGCTCGTTTTCGACACTGGAT 3’Plasmids for Selectab ...

靶向克隆法是一种新的基因克隆方法，该克隆方法的特点是：在基因克隆过程中不使用已有的DNA Ligase，而是使用新开发的靶向克隆酶。靶向克隆酶能够使末端序列相同的双链DNA(14bp-18bp)同源重组，从而达到克隆基因的目的。 LP Recco酶，中文名：靶向克隆酶，无需传统基因克隆所需要的限制性内切酶和连接酶，使基因克隆位点选择的限制性大大减少；能在一天之内完成从PCR开始到转化的全部过程；阳 ...

SSR银染方法(轻轻震荡)1、固定10%乙醇+0.5%冰乙酸 6min×2次2、染色0.2% AgNO3 12min3、漂洗（1）蒸馏水 1-2min（2）0.002% Na2S2O3 1-2min（3）显色1.5%NaOH + 0.4%甲醛（4）保存0.75%Na2CO3 ...

分析色谱是制备色谱的基础。当我们在分析色谱上 取得了良好的分离效果时，可以将其放大，应用到制备色谱上，由此，我们需要考虑调整上样量，流速，梯度：1.上样量的调整：他与分析色谱柱和制备色谱柱的柱长和柱内径有关：具体关系时;制备柱上样量/分析柱上样量=制备猪场/分析柱长制备柱内径的平方/分析柱内径的平方 2.流速的调整：制备柱流速/分析柱流速=制备柱体积/分析柱体积=制备柱长/分析柱长制备柱内径的 ...

内容：一、遗传标记 二、DNA分子标记 三、染色体原位杂交 四、DNA分子标记的应用 长期以来，植物育种中选择都是基于植株的表型性状进行的，当性状的遗传基础较为简单或即使较为复杂但表现加性基因遗传效应时，表型选择是有效的。但水稻的许多重要农艺性状为数量性状，如产量等；或多基因控制的质量性状，如抗性等；或表型难以准确鉴定的性状，如根系活力等。此时根据表型提供的对性状遗传潜力的度量是不确切的，因而选择 ...

显微操作技术（micromanipulation technique）是指在高倍复式显微镜下，利用显微操作器（micromanipulator）进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。显微操作器是用以控制显微注射针在显微镜视野内移动的机械装置。显微操作的基础平台--倒置研究级显微镜（例如OLYMPUS的IX71/81）各种活细胞应用实验，如显微操作、细胞培养，IVF，ICSI等. 显微镜的观察方式一定要 ...

RAPD利用 10 个碱基的一个或几个随机引物非定点地扩增 DNA 片段，一般一个引物可扩增 6-12 条 DNA 片段，利用凝胶电泳分开扩增的片段，从而进行基因多态性研究。 RAPD 是一种能快速进行基因多态性研究的技术，并且由于不涉及印迹杂交、放射性自显影等技术，因此简便易行。 SSR 真核生物的基因组中散布着大量的串联重复序列，其中， 2-4 个 bp 的微卫星序列 (Microsatell ...

5.3.2常规条件下已知值质控血清变异（routine conditions variance-known value简称RCVK）的测定。　　做常规检验的技术人员，在常规检验的条件下，将质控血清放在常规检测样本中，进行20次检验，结果计算同OCV法。一般认为RCV的SD在OCV的SD两倍范围内可以接受。若太大应该查找原因，使其向OCV的SD值靠近。在改进实验室条件后（例如较正加样器，纠正洗板操作 ...

常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望 能有所帮助。 柱子可以分为：加压，常压，减压。 压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所 以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分 离，一个柱子几个月也是有的。 减压柱能够减 ...

1.1 核酸序列的检索 http://www.ncbi.nlm.nih.gov:80/entrez/query.fcgi?db=Nucleotide 1.2 核酸序列的同源性分析 1.2.1 基于NCBI/Blast软件的核酸序列同源性分析 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/blast.cgi 1.2.2 核酸序列的两两比较 http://www.ncbi.nlm ...

蛋白产物的检测一、组织蛋白的裂解提取：1.分别取-70℃保存的各组动物的样品（半个脑、0.5g肌肉），放入小离心管中，在冰浴上以PBS充分洗涤2次，除去残留血液。2.用无菌手术剪和镊子将大鼠肌肉剪碎（脑样品不用剪碎），放入另一小离心管中，于0℃以PBS充分洗涤，4℃，3000 rpm离心5分钟。3.吸出上清夜，尽量将管壁上的液滴吸净，将组织碎片转移至组织匀浆管内。4.取2ml的裂解缓冲液（预冷至0 ...

摘要对单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）的研究分析近几年被广泛应用于生物及医学研究的诸多领域，筛查SNPs的方法很多，各具特色，并一直不断地发展.本文对筛查SNP的几种常用及最新方法做一简要介绍，其中包括PCR-RFLP，分子信标等.细胞外基质的降解和改变是肿瘤转移的基本条件，基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases ...