DNA基础知识

EvaGreen qPCR 荧光染料一种被广泛用于实时定量 PCR 的绿色荧光 DNA 染料 EvaGreen®是一种用于实时定量 PCR（qPCR）的 DNA 结合染料。该染料的诸多优点使它远胜于 SYBR Green I。除了有相似的光谱特性，EvaGreen 有三个主要特点使它区别于 SYBR Green I。首先，EvaGreen 对 PCR 的抑制性远小于 SYBR Green I。因此，使用EvaGreen 进行的 qPCR 实验可以使用快速 PCR 步骤。同时，EvaGreen 在实验中可以使用较高的 ...

dsDNA 微阵列又叫蛋白质结合微阵列(Protein binding microarray, PBM), 由Bulyk等在1999 年首次提出。它的基本原理是在玻片上很小的面积内(约1 cm2)固定成千上万的dsDNA分子作为探针, 检测与大量DNA分子与DNA结合蛋白之间的相互作用。这种检测在原理上模拟的是DNA结合转录因子在体内与其DNA结合位点的相互作用。在基因组DNA中, 转录因子的DNA结合位点一般是一段很短(约5~20 bp)的序列, 如转 ...

PurposeMolecular risk stratification of acute myeloid leukemia (AML) is largely based on genetic markers. However, epigenetic changes, including DNA methylation, deregulate gene expression and may also have prognostic impact. We evaluatedthe clinical relevance of integra ...

HRM 是SNP分型的手段之一，其特点为分型费用比较低廉，特别是应用小片段法，鄙人初次应用小片段法对10个SNP成功分型，现将实验的步骤分享，希望能给有需要的同道一点经验，同时希望能多交流，谢谢~~~两步法HRM不同于一般的HRM法在于PCR和HRM分开做，顾名思义：第一步：PCR，最好用预混的PCR试剂，我用的是宝生物的PCR Premix TaqTM,便宜又好用。第二步：HRM,将P好的产物分别加上LC Green及高低温内标， ...

BL21BL21（DE3）BL21 Plyss（DE3）BL21Condon Plus (DE3)BL21-AI（DE3）BL21-Trxb（DE3）BL21 gold Plyss（DE3）AD494（DE3）TB1(DE3)C41(DE3）C43(DE3）Rosetta（DE3）Rosetta2（DE3） PlyssOrigami B (DE3)Rosetta-gami-B（DE3）Rosetta-gami-B Plyss（DE3）DH5αTop10Top10F' ...

创英生物TaqMan-MGB双标记荧光探针合成--VIP 客户专属TaqMan-MGB 探针与传统的TaqMan-TAMRA探针比较具有以下优势：1. 提高TM值— 平均15bases可提高18℃，这样可以使探针的长度缩短，尤其对AT含量高的序列设计有很大的帮助，并且提高配对与非配对模板间的TM值差异。2. 提高信噪比— 由于在探针的3’端的淬灭基团为不发光的荧光基团，并且与报告基因在空间的位置更接近，实验结果更精确，分辨率更高。3. 更简化实验— ...

一、一个合格质粒的组成要素复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段P/E 启动子/增强子Terms 终止信号加poly（A）信号 可以起到稳定mRNA作用二、如何阅读质粒图谱第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）第二步：再看筛选标记，如抗性，决 ...

RNA 分泌体可以通过召回RNA聚合酶II促进转录终止Nat Struct Mol Biol. 2014 Sep 21. doi: 10.1038/nsmb.2893. The RNA exosome promotes transcription termination of backtracked RNA polymerase II.Lemay JF1, Larochelle M1, Marguerat S2, Atkinson S3, B?hler J3, Bachand F4Author information

近日，赛业生物科技（Cyagen Biosciences）宣布推出其全球专利技术TetraOneTM KO，一种不仅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9（把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6个月），而且避免了TALEN、CRISPR/Cas9脱靶效应困扰的革命性技术。TetraOneTM KO的出现，是ES打靶技术制备基因敲除鼠的一个重大突破。基因组编辑的技术进展传统ES打靶、TALEN和CRISPR/Ca ...

Clontech是cDNA合成技术的引领者，近年来SMART(Switching Mechanism at 5’ End of RNA Template)技术被公认为是微量RNA和单细胞RNA-seq的行业金标准。现在创新的DNA SMART技术将模板转换机制的优势拓展到了DNA分析，利用DNA SMART ChIP-Seq Kit无需接头连接即可构建ChIP测序文库，极大地缩短了实验进程。科学技术的发展有时需要突破实验技术的挑战，如何从染色质免疫共 ...

转录因子作为一种调控基因表达的关键蛋白，在很多研究中都是需要重点监测的对象。特别是对具有活性的转录因子的检测，有着重要的意义。转录因子的一个重要特点是在经过翻译后修饰及其它一些变化以后才具有发挥功能的活性。传统的测方法，如ELISA、Western Blot、荧光定量PCR等，都不能区分活化与未活化的转录因子，限制了这些方法在转录因子检测方面的应用。目前比较常用的是基于转录因子与特定DNA序列结合原理的凝胶迁移 ...

核酸抽提与纯化是分子生物学试验的基础，核酸纯化方法是影响提取核酸质量高低的最重要因素，也是下游分子生物学试验成败的关键。目前常见的核酸纯化方法有PC 抽提/醇沉淀方法、高盐沉淀蛋白质/醇沉淀方法、离心柱法和生物磁珠法，这几种方法各有其优势和劣势。一、PC抽提法PC 抽提是去除蛋白质有效的手段，但超过了该饱和度，裂解体系中的蛋白质不会被一次去除，必须靠多次抽提，方可彻底去除。且每次抽提都会损失部分核酸。另外，体系太粘稠的坏 ...

叶酸是什么叶酸（Folic acid）维生素B复合体之一，是米切尔（H．K．Mitchell，1941）从菠菜叶中提取纯化的，故而命名为叶酸。是合成核酸所必须的元素，是细胞生长和组织修复所必需的物质，更是胚胎发育过程中不可缺少的营养素。有“优生优育的营养素”美誉，对孕妇尤其重要。叶酸利用能力遗传检测的意义1、叶酸缺乏是导致出生缺陷的重要原因2、叶酸补充过量危害对叶酸的增补剂量并非越多越好。大量研究发现，过量补充叶酸会导致 ...

腺相关病毒（Adreno-Associated Virus, AAV）是微小病毒科（Parvoviridae）家族的成员之一。这一家族成员是一类微小、无被膜及具有二十面体结构的病毒。病毒颗粒的直径在20～26nm之间，含有大小在4.7~6kb之间的线状单链DNA基因组。它的复制和增殖依赖于辅助病毒的存在。

病毒载体在生物医学的基础研究和产品开发中具有重要作用，细胞转染是制备病毒载体的关键步骤。然而现有转染试剂价格昂贵、操作繁琐，已成为快速、高效和大规模制备病毒载体的限制因素。QuickShuttle系列转染试剂是由北京康碧泉生物科技有限公司研发的一类具有自主知识产权、独特配方的阳离子型转染试剂，具有高效、低毒和易于使用等优点。QuickShuttle区别于常规转染试剂的两个最主要特点是：（1）可以在细胞传代后尚 ...

The overall sequence of events is: • Titer and plate out phage • Lift plaques onto filters and prepare them for screening • Make a probe • Hybridize the probe to the filters • Wash the filters and expose to film • Purify putative plaques • Excise plasmid from the desired phage Some preparatory itemsThe library ...

Construction of homemade 'T-vectors'This method is after Marchuk, D., et al., 1991, Nucl. Acids Res. 19(5), pp 1154. You will need: 10 x Taq buffer (Promega)Taq Polymerase (Promega)Phenol/chloroform mix100mM dTTPTE bufferAbsolute ethanol70% ethanol 1) Digest plasmid to be used with a blunt-e ...

一、质粒DNA的提取及鉴定　　（一）质粒DNA的提取及鉴定　　1．收获细菌　　（1）将2ml含相应抗生素的LB液体培养基加入到通气良好的15ml的试管中，接入一单菌落，于37℃剧烈振荡培养过夜。　　（2）将1.5ml培养物倒入1.5ml离心管中，用台式离心机于4℃以12000g离心5min，将剩余的培养物贮存于4℃。　　（3）吸尽培养液，使细菌沉淀尽可能干燥。　　2．碱裂解法小量抽提质粒　　（1）将细菌沉淀重悬于100μl预冷的溶液Ⅰ（50mmol/L葡萄糖，2 ...

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