DNA基础知识

一. 植物遗传转化的方法 植物遗传转化技术可分为两大类：一类是直接基因转移技术，包括基因枪法、原生质体法、脂质体法、花粉管通道法、电激转化法、PEG介导转化方法等，其中基因枪转化法是代表。另一类是生物介导的转化方法，主要有农杆菌介导和病毒介导两种转化方法，其中农杆菌介导的转化方法操作简便、成本低、转化率高，广泛应用于双子叶植物的遗传转化。 二.农杆菌介导的基因转化方法 （一）农杆菌的Ti质粒与 ...

定位克隆（positoinal cloning），又称图位克隆（map-based clonig），1986年首先由剑桥大学的Alan Coulson提出。用该方法分离基因是根据功能基因在基因组中都有相对较稳定的基因座，在利用分离群体的遗传连锁分析或染色体异常将基因伫到染色体的1个具体位置的基础上，通过构建高密度的分子连锁图，找到与目的基因紧密连锁的分子标记，不断缩小候选区域进而克隆该基因，并单明 ...

DNA微阵列技术（m ...

Hi....I need a prot℃ol for extracting DNA from hair/roots...(specifically horse)...and any additional information such as ?storage pr℃edure/timing/etc....thanks.... -tree- --------------------------- ...

根据WHO资料，全球范围内恶性肿瘤是人类仅次于心脑血管病的第二大死亡原因，占总死亡人数的22%，并逐年增加。 10种常见肿瘤：胃癌、肝癌、食管癌、结直肠肛门癌、白血病、子宫颈癌、鼻咽癌、乳腺癌和膀胱癌。 肿瘤的早期发现、早期诊断、早期治疗是患者获得长期生存的最主要途径。以肝癌为例，肿瘤直径＜2cm，5年生存率几乎100%；直径每增加1cm，5年生存率下降20%。肿瘤诊断三大支柱是图像诊断（包括B ...

Higuys : I have a problem about mutagenesis. I want to mutate 2 base pairs in plasmidand use stratagenne mutagenesis protocol.Design 2 oligos as primers.After I run PCR I only see one band less than ...

试验原理： 煮沸法是根据Holmex和Quigley(1985)的方法改进而成的。在基因工程中， DNA 分子的切割是由限制性内切酶来完成的。限制性内切酶能识别特定的 DNA 序列，在一定的条件下切断双链 DNA 。限制性内切酶的作用效率是受多方面因素影响的，如反应温度，缓冲体系，离子种类与浓度， DNA 的纯度和甲基化程度等。对 DNA 进行酶切时，首先要选择适合的缓冲液。对于单酶切，应选用该酶 ...

摘要：通过PCR，从E.coli K12 Y1090株系中扩增获得glgC基因，插入pUC19的PstI和SacI 位点之间，得到重组质粒pAGP。对所克隆的glgC基因进行全序列测定，结果表明，与已发表的序列相比，有7个核苷酸发生了改变，核苷酸顺序的同源性为99.4 %; 推导的氨基酸序列的同源性为99.2 % 其中，第296位由赖氨酸变为谷氨酸。通过寡核苷酸介导的定点诱变，将第1007位核苷酸 ...

・CaCl2 感受态细胞的制备的实验步骤 1．前夜接种受体菌（ DH5α或 DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜（约16小时）； 2．取 1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时（250-300rpm）； 3．将 0.1M CaCl2 溶液置于冰上预冷； 以下步骤需在超净工作台和冰上操作 4．吸取 ...

采用粘末端连接必须对目的DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接。酶切可以是单酶切也可以是双酶切。单酶切操作比较简单，但双酶切如果两种酶所用缓冲液成分不同（主要是盐离子浓度不同）或反应温度不同，这时可以采用如下措施解决：1）先用一种酶切，然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一种酶切；2）先进行低盐要求的酶酶切，然后添加盐离子浓度到高盐的酶反应要求，加入第二种酶进行酶切；3）使用通用缓 ...

Equilibriation of Phenol Caution: Phenol and chlorofom are very toxic. Wear gloves protective eye wear and lab coat. Use hood. Phenol dissolves and denatures proteins. It dissolves protein that is ti ...

一、个体识别 个体识别以同一认定理论为指导原则。通过对物证检材 的遗传标记作出科学鉴定，依据个体特征来判断前后两次或多次出现的物证检材是否同属一个个体的认识过程。第一次出现的往往是与案件事实有联系，并且是在案发现场留下该个体的生物检材，如血痕、精斑等。是未知个体，是要查找的对象，称“被寻找个体”。 个体第二次出现一般是侦查或调查活动的结果，第二次出现的个体一般是已知身份的 ...

Dr. William H. Heidcamp Biology Department Gustavus Adolphus College http://homepages.gac.edu/~cellab/chpts/chpt14/ex14-6.html Materials •DNA •CsCl •0.3 N NaOH •0.2 M Tris-HCl buf ...

I recovered DNA from gel by Millipore's kitIt's simple.Cut the band from gel and centrifuge for 10 minutesbut the efficiency is disappointedonly 20% or so. Can anyone reccomend me other methods?Thanks ...

问题：转化后无克隆菌产生 可能的原因：转化过程有问题或感受态细胞失活 建议：可通过转化pUC18/19等未切割的可用于抗性筛选的质粒，检测感受态细胞的转化效率和转化操作是否正确 问题：插入对照DNA片段的阳性率低 可能的原因：10×快速连接缓冲液稀释不当 建议：提供的T4 连接酶缓冲液为十倍浓度，10μl 反应体积加1μl T4 连接酶缓冲液 &n ...

Prior to getting cells: 1) Turn on 42 deg bath. Takes about 30 min to reach 42 deg. 2) Put 0.1 M sterile CaCl2 on ice. 3) One tube of cells is good for several transformations. For two transform ...

1. 细菌离心后，加入溶液I蜗旋振荡时，发现菌体呈絮状不易混匀，或成细砂样。—— 很可能是细菌发生溶菌，可减少培养时间、降低培养温度试试看，通常降低培养温度 会使细菌生长更加稳定；同时也可以试试平板培养 ，培养后，用PBS将菌落洗下，再进行质粒的提取，固体培养基上细菌生长的要好一些。 2. 加入溶液II，菌液浑浊度没有发生明显变化。—— 裂解不完全， ...

This procedure isolates DNA from agarose gels by filtration through a filter-paper column. The column is made in a 500 μl tube from a slurry of filter paper in TE buffer. Materials Whatman 3MM fil ...

实验原理： 体外通过基因工程手段所构建的含目的基因的重组质粒，选用转化和筛选技术， 可获得含重组的阳性克隆。在此阳性克隆中，DNA可在生物体系中大量扩增，繁殖， 保存以及表达目的基因的产物，这是PCR体外扩增DNA所不能替代的。配合DNA重组技术，所获得的，不同目的需要的阳性菌株已广泛应用于科研，医药生产和生物发酵等领域。 质粒转化不同细菌有不同的转化效率，转化效率的高低与实验的成败直接相关， 通 ...

1、用合适的酶切割DNA并电泳。 2、于紫外灯下从凝胶上切下所要的DNA带，装入含1×TBE缓冲液的透析代内，用夹子封好袋口，并检查有无漏孔。 3、将透析袋（纵长）与两极间的边线垂直放于电泳槽内电泳，4～5V/cm电泳至DNA贴紧袋壁。 4、取出透析袋，挤出凝胶块，吸出袋内液体放入1.5ml的离心管内，10000rpm离心5min。 5、吸出上清放入离心管内，加入等体积的饱和酚和等体积 ...