病毒

beingconfident 最近做慢病毒感染细胞，慢病毒载体是自己包装的，含有筛选基因，marker基因，还有目的基因。第一次做筛选基因是G418，但是可见部分细胞表达marker基因，但是加药筛选不死，最后检测目的基因有表达。很奇怪。后来重做将筛选基因换成Hygromycin，感染48h小时加药，细胞死亡明显，最后形成单克隆，但是没有看到marker基因的表达，测目的基因有表达，两次结果都有些戏剧性。总结起来我的 ...

raker 病毒核酸中的C、G含量有什么意义？版主freecell留言:是“核酸”，不是“核算”。freecell G+C含量，是病毒的分类依据之一。raker 它对病毒的作用没有么？比如它的生化特性等等，仅仅是作为分类依据?freecell raker wrote:它对病毒的作用没有么？比如它的生化特性等等，仅仅是作为分类依据?病毒的生化特性多是由其基因组编码的蛋白决定的，例如对酸碱的稳定性、热敏感性、对有机溶剂的稳定性等等。未发现核酸 ...

最近在做原核表达，包涵体。以前也做过，但经验不多。从园子里也学到不少。一点失败的教训以及纯化过程中的体会，贴出来与大家共享，同时希望得到同行们的指正:)1. 首先介绍一下背景。载体是novagen公司的pET22b，Amp抗性。菌株是Invitrogen的BL21 star DE3，是一个蛋白降解酶突变菌株，也就是说是一种优化表达菌株。2. 第一次失败。第一次做诱导的时候，重复了很多次，但总是诱导不出来。PCR，酶切都正确。但没等测序 ...

把这个小结拿出来跟大家分享，希望对大家有所帮助，也请大家发帖多多交流，共同进步！1.应该在细胞状态最好的时候,进行病毒接种或复苏;2.接种前头天,进行细胞传代,细胞数量应以能让细胞在第二天内达到覆盖满90%的培养瓶为准,并且一定要在细胞传代后48h内接种病毒;3.第二天细胞长为单层且状态较好时,开始接种病毒;4.先移弃培养瓶中的生长液,用undefinedPBS轻轻洗细胞面3次,最后用移液管吸干净培养瓶中残留的undefinedPBS.为保持培养 ...

采用一系列方法将病毒工程化开发用于疾病治疗已经成为一种新型的应用，该应用广泛的定义为病毒疗法，包括基因治疗的病毒载体(Figure 1)和具有溶瘤细胞功能的病毒(Figure 2)。虽然这些产品大部分都处在临床开发阶段，但是药物作用靶点的多样性以及未来创造财富的机会都是令人鼓舞的。病毒疗法是一门以病毒为基础的技术，一个重要的挑战就是在任何的时间点包括早期的研发，产品的生产，产品的包装上市都能清楚地了解样品的质量和性能 ...

在做病毒包装实验中，有科研工作者常遇到：用同样一个病毒载体系统进行病毒包装实验，为什么有人做的很好，次次成功，有人却是时常做不出来，稳定性很差，不是滴度低就是根本不出毒，从我们对不同载体系统病毒包装的多年经验总结，主要以下几个方面心得：第一，病毒包装的几个关键节点就是细胞因素、载体系统(尽量使用成熟的商业化载体系统)、构建重组的质粒正确与否、质粒抽提纯化情况、包装转染控制(24、48 小时的细胞及荧光状态判断)、目的基因 ...

我们知道噬斑法和TCID50法检测的是感染性病毒的浓度，并不体现病毒的总浓度（总颗粒数）。现在有越来越多的研究显示，很多病毒在包装过程中由于缺失基因组，形成空心病毒。或者在合成过程中，基因的突变或者缺陷导致蛋白的突变，造成病毒没有感染性。而这些非感染性病毒的数量在总病毒数量中所占的比例意义重大，能影响体内和体外的研究结果。所以快速的病毒总浓度定量方法是非常必要的。 流感疫苗的生产中，从鸡胚培养 ...

带有水疱性口炎病毒（vesicularstomatitisvirusG，VSV-G）蛋白的假型逆转录病毒载体已被证明可将基因高效递送到各种细胞中。其效率受相对细胞的生长速度以及细胞膜上的磷脂酰丝氨酸的水平影响。 一、材料与试剂 1. DMEM（GIBCO，11995-065） 2. 胎牛血清FBS（GEMBIO900-108） 3. 青霉素/ ...

一、材料和试剂 1. Hairpin-pLKO.1vector（OpenBiosystems） 2. Packagingvectors:第二代包装质粒包含gagpol和rev基因（pCMV-dR8.91或pCMV-dR8.74psPAX2）和包被质粒（pMD2.G）（Addgene） 3. 脂质体2000（Invitrogen） & ...

材料和试剂 1. 6 cm 细胞培养皿（Fiosher）。 2. 人类或小鼠细胞系，细胞试验所需要的生长培养基。 3. 凝聚胺。 4. 合适的选择性抗生素。 仪器 1. 细胞培养箱 步骤 1. 慢病毒感染方法应该根据不同的细胞系和以细胞为基础的试验来进行优 ...

1 适用范围 本标准规定了禽流感的血凝试验、血凝抑制试验。 本标准适用于禽流感抗体的检测（主要适用于血清样品）。 2 血凝试验 2.1 材料与试剂 2.1.1 器材：普通天平、分析天平、普通离心机、微型振荡器、注射器、冰箱、高压灭菌器、微量移液器及96孔V形血凝反应板。 2.2.2 pH7.2磷酸盐缓冲液(PBS)，配制方 ...

慢病毒（慢病毒（Lentiviruses）属于逆转录病毒科。慢病毒核蛋白质前整合复合物具有噬核特性，病毒基因组运输至细胞核，从而使慢病毒可以感染和在非有丝分裂细胞中复制。这一特性使慢病毒成为基因治疗的转移载体。 HIV （Human immunodeficiency virus） 、EIAV （Equine infectious anemia virus） 、 FIV （Feline immunodeficiency virus） 、 SIV （Simian immunodeficiency virus） 。其中研究最多最为透彻的是HIV。

一、目的要求掌握鸡胚尿囊腔接种培养新城疫病毒的操作技术。二、器材1.鸡胚 应选用健康鸡群的受精蛋，接种鸡的鸡胚应无母源抗体，以免影响病毒在胚胎中的增殖。实验用的鸡胚多采用9—10日龄的活胚。2.接种材料 新城疫I系疫苗3.各种器械 孵卵器、照蛋箱、蛋架、打孔器、1ml结核菌素注射器、41/2号注射针头、镊子、3%碘酊、75%酒精棉球、铅笔、酒精灯、剪刀、眼科镊子、灭菌的疫苗瓶、灭菌滴管 ...

1. 75cm2方瓶中接种 293 细胞，至密度达到 90%，加入适量病毒上清感染细胞。 3- 4d 后，细胞几乎变圆，且有一半细胞漂浮，则收集所有细胞。约500g 转速离心，弃上清。 2. 以灭菌 PBS 重悬沉淀，反复冻融4 次。4℃下 7000g 离心 5min.病毒纯化至少 需要 30 瓶 75cm2方瓶细胞。 3. CsCl 连续梯度离心纯化：50ml 离心管中称量 4.4g CsCl ...

传统的空斑实验方法测呼吸道合胞病毒的PFU值由于其空斑形成较小且需要借助特异性的表面融合蛋白抗体来确定故操作繁琐费用较高。这里介绍给大家三种简单易行的空斑形成实验操作方法： 方法一 1、以5×10e5/ml的密度接种Hep－2细胞到6孔板中，每孔加入3ml细胞悬液； 2、待细胞长成单层后（不得超过48hr），移去营养液，每孔加入400ul的PBS和100ul毒液（10倍系列稀释）； ...

一、慢病毒的储存与稀释： 1. 病毒的储存：用户收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口） 注：A．病毒可以存放于-80℃ 6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，我们建议在使用前需要重新滴定病毒滴度 B．反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10%；因此在病毒使用过程中应尽量避免反复冻 ...

一、慢病毒包装简介及其用途 慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干 ...

一 目的基因的克隆（以pshuttle-CMV质粒为例） 1. 选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。 2. 重组质粒鉴定： 酶切鉴定或测序。 3. 重组质粒扩增，纯化并 ...

一旦重组病毒已被纯化和鉴定，即可在293 细胞中进行大量扩增。本手册提供了递增培养规模和腺病毒感染周期的基本方法，按这一方法最终得到的病毒量约为3×1011～3×1012。由于一个细胞中所含的病毒颗粒为1000～10000，因此1L 培养细胞可得到约5×1012 病毒颗粒。如果要把病毒用氯化铯梯度离心纯化，则必须至少3×108 的细胞，这样才能正确 ...

一、技术背景： Adeasy 系统利用了腺病毒具有的高感染能力，可高度浓缩等优点，并破坏了腺病毒基因组中的早期基因E1，使之成为较为安全、高效的病毒载体。利用带有E1 基因的293 细胞作为包装细胞，通过倍比扩增，富集病毒颗粒，并通过CsCl 梯度离心，透析进行分离纯化。对绝大多数的细胞株可以达到近乎100％的感染效率。但需要指出的是Adeasy 同样具有所有病毒载体或转染试剂都不可避免的细胞毒 ...