实验基础

历史上对微生物尤其是细菌的鉴定，主要是根据其形态、染色和生化特征，进行手工分类鉴定。20世纪70年代以来，随着微生物学和光电、色谱等技术的发展和计算机的广泛应用，微生物鉴定的自动化逐步成为现实。

平板菌落计数法是一种经典的计数方法。虽然速度慢,需要平板上长出菌落一段时间后才能计数.但是由于平板菌落计数法通常做梯度稀释,所以计数的线性范围大.由于是菌悬液涂布,所以比较均匀,能较好的反应菌落的疏密程度.重复性,平行性很好。

细菌转化指某一受体细菌通过直接吸收来自另一供体细菌的含有特定基因的脱氧核糖核酸（DNA）片段，从而获得了供体细菌的相应遗传性状。这种方法已被引入其他生物，例如采用原生质体转化法，可将外源DNA注入到不具摄取DNA能力的生物中，使其获得某些新的特性。

菌的分离是在微生物技术中的一项基本操作，也是在日常科研中经常用到一项技术。本文主要介绍了几种常见菌的分离方法。

从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。

在医学微生物检验及研究工作中,经常分离细菌,接触菌种。菌种是一种重要的生物资源。菌种的保存不仅有利于重现已经做过的研究,证实发现新的菌属和菌科,而且也是研究、推广、开发和实际应用科研成果的基础。因此菌种的保存工作在细菌学中至关重要。

微生物是包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，却与人类生活密切相关。

微生物是包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，却与人类生活密切相关。

海洋微生物的培养基：Marine Ameba Medium

海洋微生物的培养基：Marine Agar with Sulfur(ATCC Medium 1922)

海洋微生物的培养基：Marine Agar with Naphthalene

海洋微生物的培养基：Marine Agar with κ- and λ-Carrageenan

海洋微生物的培养基：Marine Agar with l-Carrageenan

海洋微生物的培养基：Marine Agar with Biphenyl

海洋微生物的培养基：Marine Agar 2216(DSMZ Medium 604)

海洋微生物的培养基：Marine Agar (DSMZ Medium 123)

肉浸液肉汤培养基：将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL,混合后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH7.4~7.6煮沸并过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌30min.

细胞色素氧化酶试验：取37℃（或低于37℃）培养20h的斜面培养物一支，将两种试剂各2~3滴，从斜面上端滴下，并将斜面略加倾斜，使试剂混合液流经斜面上的培养物。如系平板培养物，则可用试剂混合液滴在菌落上。于2min内呈现蓝色者为阳性。阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应，2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果。

取白色洁净滤纸沾取菌落。加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加深；再加α-萘酚溶液一滴，阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。阴性于两分钟内不变色。以毛细吸管吸取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反应与以上相同。

将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，121℃高压灭菌15min.放在冰箱内使其充分冷却。每100mL培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0mL（最后浓度为1∶10000），分装于12mm×100mm灭菌试管，每管约4mL,立刻用灭菌橡皮塞塞紧，放在4℃冰箱内，至少可保存两个月。同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成为稀释菌液，挑取1环接种于氰化钾（KCN）培养基。并另挑取1环接种于对照培养基。在36±1℃培养1~2d,观察结果。如有细菌生长即为阳性（不抑制），经2d细菌不生长为阴性（抑制）。