单克隆抗体的制备过程单克隆抗体在现代生物医学中的作用越来越大,它不仅被广泛应用于生化和免疫检测,而且治疗癌症和自体免疫疾病的单抗药物也逐渐批准上市。因此单抗的制备和筛选具有其内在的重要性。动物免疫取4只6周龄雌性BALB/c小鼠皮下注射抗原(20 μg/只),第一次免疫与等量弗氏完全佐剂乳化,0.2 mL/只;两周后进行第二次免疫,抗原与等量弗氏不完全佐剂乳化,皮下注射,0.2mL/只;两周后进行第三次免疫,免疫方法及剂量同 ...
溶血空斑形成试验是一种体外检测单个抗体形成细胞(浆细胞)的方法,故又称体外抗体形成细胞(Plaque Forming Cell, PFC)测定技术。此项技术不仅可以作为免疫基本理论研究的有力工具,广泛地用于检测产生IgM类型(包括其它各类免疫球蛋白及其亚类)的抗体形成细胞,它还可作为临床筛选抗肿瘤新药以及研究中药对抗体免疫功能影响的免疫学指标。一、原理: 溶血空斑形成试验的基本原理是将经绵羊红细胞免疫小鼠的脾细胞与一定量的绵羊 ...
Antibody Storage and Handling (Hevner Lab)1. General principlesa. Antibodies are precious resources and must be conserved—i.e., use as little as possible, do not waste, and keep cold.b. Antibodies are proteins and should be kept cold (refrigerated, on ice, or frozen) when not in use.c. The more dilu ...
进口内参抗体——在WB实验中为什么需要使用内参抗体?要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。虽然,顺利的时候Western Blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟,作为一种有活性的生物大分子,抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确,而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的 ...
转自生物谷网站免疫细胞化学技术的某些新进展免疫细胞化学技术在继续改进和完善中,新的技术方法不断出现。除目前国内已开始应用的免疫金技术和免疫金银技术外,80年代,新的免疫细胞化学技术还有半抗原交联抗体法和令人瞩目的分子杂交免疫细胞化学技术。免疫金银技术和分子杂交免疫细胞化学技术将分别以专章 叙述,本节 仅就半抗原交联抗体法作一简要介绍。 【半抗原交联抗体法(Hapten –Coupled techniques)】 近年来,为提高敏感 ...
这是我以前翻译的一外文综述,外文现在找不到了,拿出来大家看看,是否有用“抗肿瘤特异性抗原预防接种方法的设计和评价”抗肿瘤特异性抗原预防接种方法的设计和评价我们通过对临床前期小鼠模型的研究,对癌症患者应用肿瘤特异性接种的效果和安全性做出评价。第一批临床实验显示接种的方法是安全的,然而临床应答特别是由疫苗引起的免疫应答仍然缺乏。实际上很多实验到目前为止完成晚期癌症患者的很少,患者期待着抗肿瘤疫苗 的巨大功效。另外在 ...
不错的抗原修复方法,大家共享。Proteolytic antigen retrieval using TrypsinReagents:Calcium Chloride 0.1gTrypsin (Sigma Type II) 0.1gDistilled Water 100 mlSodium Hydroxide (0.1 M)Method:1.Dissolve calcium chloride in distilled water and pH to 7.8 with sodium hydroxide. Store at 37oC.2. D ...
载脂蛋白抗体的制备 抗原免疫动物产生的抗体是血清γ-球蛋白的一部分。抗体的理化性质及结构与γ-球蛋白相近似。γ-球蛋白是一组结构相似,但又有差异的蛋白质,通称为免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig),按其结构和免疫化学性质的差异,又可分为五类,分别称为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。载脂蛋白抗体以IgG最为稳定。因载脂蛋白的体液中含量不同以及分离纯化的难易的差别,可分别采用多克隆抗体制备法和单克隆抗体 ...
单克隆抗体的制备过程单克隆抗体在现代生物医学中的作用越来越大,它不仅被广泛应用于生化和免疫检测,而且治疗癌症和自体免疫疾病的单抗药物也逐渐批准上市。因此单抗的制备和筛选具有其内在的重要性。动物免疫取4只6周龄雌性BALB/c小鼠皮下注射抗原(20 μg/只),第一次免疫与等量弗氏完全佐剂乳化,0.2 mL/只;两周后进行第二次免疫,抗原与等量弗氏不完全佐剂乳化,皮下注射,0.2 mL/只;两周后进行第三次免疫,免疫方法及剂量同第 ...
一、免疫失败的可能原因及应采取的措施 有时不能获得满意的抗血清,可从下列几方面找原因,并改进之。 1、免疫动物的种属及品系是否合适,可考虑改变动物的种属或品系,或扩大免疫动物的数量。 2、抗原质量是否良好,可改用其它厂家的产品或改用同一厂家的其它批号,也可考虑改变抗原分子的部分结构,或改进提取方法。一、免疫失败的可能原因及应采取的措施有时不能获得满意的抗血清,可从下列几方面找原因,并改进之。1、免疫动物的种属及品系是否合适,可 ...
不同类型抗体的保存指南, 用以避免抗体污染或损伤请不时核查数据表以获取特定保存建议。如果恰当保存和处理, 大多数抗体应能保持活性数月乃至数年。保存温度和条件对于很多抗体而言, 分装成小等份并冻存于 -20℃ 或-80℃ 是最佳保存条件。分装成小等份可最大程度减少由冻融造成的损伤, 以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需冻融一次, 如有剩余, 可将剩余物保存于 4℃。在收到抗体时,在 10,000 × g 下离心20 秒以沉积截留于试剂瓶螺纹的溶液, 并以小等份转移至 ...
小弟因为课题需要,要对融合蛋白进行B CELL EPITOPE 预测,一时没有办法下手。在网站上游荡许久,找到一个专门从事这项研究的专家,于是给他发信求助。他还真是好人,给我回了这封信,关于表位预测的,希望对大家有用:Thank you for your interest in my work. Unfortunately there is no accuratemethod for predicting Linear B cell epitopes currently available via the ...
最近要免疫动物,所以搜集整理了一点方法。想请做过的ggjjddmm指导一下。看看有没有需要改进的地方? 制备多克隆抗体实验方案动物:新西兰兔(年龄>3个月)免疫佐剂:福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂方法一:100ug Hexon protein 溶于0.5ml Tris-HCL缓冲液中, ,与等体积的福氏完全佐剂混合后,于家兔后肢及后脚掌多点皮下注射。以后每隔两周加强免疫1次,抗原改用福氏不完全佐剂配制,用量同前,在每次加强免疫7d后,用免疫双 ...
免疫毒素是近年来新兴的一种肿瘤导向治疗方法。它利用抗肿瘤单抗与肿瘤细胞的特异性结合,将生物毒蛋白与抗体偶联,去定向攻击肿瘤细胞,而其对正常组织的杀伤较小,故被形象地称为“生物导弹”。免疫毒素由“弹头”和“载体”以一定的连接方法偶联而成。其“弹头”部分即生物毒蛋白,来自植物或微生物,为酶催化型毒素,效率很高,理论上一个分子进入胞浆即能杀死细胞。理想的毒素载体应具有与肿瘤细胞特异与“弹头”偶联后不影响彼此活性。目前,单克隆抗 ...
为了使生产抗体获得最佳效果,仔细地设计抗原多肽是很有必要的,设计应满足一个基本条件:在免疫过程中,该抗原既不会产生过强的免疫反应,同时又能产生出对感兴趣的蛋白有结合能力的抗体。尽管抗原设计是一个很复杂的课题,有诸多需要注意的细节,已超过了我们所能提供的范围,根据我们所积累的经验,有几点关键的基本设计原则可以提供给大家参考:1、确定抗体的用途(应用)新开展一个研究项目,弄清楚所感兴趣的蛋白的一些基本特性是很有必要的 ...
免疫检测法 抗体制备技术 抗体(antibody,Ab)是机体免疫系统受到抗原刺激后产生的特异性球蛋白,称免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。根据其重链稳定区的分子结构和抗原性的不同,可将为类Ig分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE等五大类。由遗传基因决定所产生的抗体,称天然抗体(natural antibody),由抗原激发免疫细胞产生的抗体,称免疫抗体(immune antibody)或称特异地性抗体。人工制 ...
本人利用该方法制备了高效价的多克隆抗体,与大家分享!AnimalsHealthy male New Zealand rabbits aged 3-6 months (body weight ~ 2.5 kg) lived in animal house at least for 3-4 days for adapting to the new circumstance.Polyclonal antisera productionSample A: Emulsify your aimed protein 200-300 mg in PBS with same volu ...
单克隆抗体制备技术Burnef(1957)细胞系群选择学说(clonal selection theory)认为,每一个淋巴细胞只具备单一的受体特异性,受到刺激后,只能产生一种针对其可识别的抗原决定簇的抗体;抗体的多样性是由机体遗传存在着能与众多抗原决定簇起反应的淋巴细胞系而决定的;一个祖先抗体形成细胞分裂繁殖而成的细胞系(克隆clone或无性繁殖细胞系)产生的抗体具有完全相同的分子结构和性状;从一个克隆细胞系产生的 ...
多少个香港铜锣湾,才够满足我的潮流控;多少个抗体网站,才够帮我找到品牌抗体?上丁香通(www.biomart.cn),一站帮你搞定!继丁香通ATCC细胞库发布之后两个月,丁香通第一期品牌抗体库正式发布。本次抗体库收集了Abnova、Abcam、CST、santacruze四个一线品牌的抗体库数据,并且可以通过“适用物种”、“应用范围”、“抗体来源”、“是否单克隆”等维度进行深入搜索,以下为使用示意流程。1、输入关键词,比如搜索“ ...
一、抗血清的制备 有了质量好的抗原,还必须选择适当的免疫途径,才能产生质量好(特异性强和效价高)的抗体。 (一)用于免疫的动物 作免疫用的动物有哺乳类和禽类,主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等,实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量,如一般制备抗r-免疫球蛋白抗血清,多用家兔和山羊,因动物反应良好,而且能够提供足够数量的血清,用于免疫的动物应适龄,健壮,无感染性疾患,最好为/// ...