转基因实验

基因组编辑技术是指可以在基因组水平上对 DNA 序列进行定点改造的遗传操作技术，其在基因功能研究和改造、生物医学和植物遗传改良等方面都具有重大的应用价值。科学家自 20 世纪 90 年代末就开始探索基因组定点编辑技术，但直到 2002 年，也仅在小鼠和果蝇等少数模式生物中实现了同源重组介导的基因组定点编辑，且因同源重组的效率很低，限制了其应用前景。进入 21 世纪后，随着蛋白质结构与功能研究的新突破和人工核酸内切酶 (engineeredendon ...

什么是 CRISPR?CRISPR（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）, 是细菌中用于与病毒进行斗争的免疫武器。 生命进化历史上，细菌为了将病毒的外来入侵基因清除，进化出 CRISPR 系统，利用这个系统，细菌可以不动声色地把病毒基因从自己的染色体上切除，这是细菌特有的免疫系统。这种切除功能其中比较典型的模式是依靠一个复合物，该复合物能在一段 RNA 指导下，定向寻找目标 DNA 序列 ...

肿瘤迁移模型通常是在具有免疫缺陷的小鼠上采用细胞系异种移植的方式来构建。在新环境下，有关肿瘤细胞习性的大量信息通常都是通过迁移模型来获取的。被称为「肿瘤中心论」的设计方法，在动物组织中，其主要研究对象是人肿瘤传播的细胞自发影响因素。实际上，采用复杂的动物模型做为肿瘤的「培养皿」，其不仅为肿瘤生长提供了丰富的营养物质还为肿瘤的生存提供了支持。作为全身性疾病，转基因或基因敲除鼠癌症模型可以用来研究肿瘤迁移速度，并为 ...

真核生物染色体 DNA 的忠实复制发生在每个细胞周的 S 期。在复制叉双向移动的特定结构（称为起点）中，复制是受高度调节的和启动的。许多成熟的技术已经被应用到研究染色体复制动力学和特征中。许多技术都能提供了一个宏观水平的复制视角（例如基于流式细胞术、基于 2 维和凝胶电泳）。不管怎么样，另一种诞生于 50 年前，被称为 DNA 纤维分析的方法，在单个 DNA 纤维水平上揭示 DNA 复制特性，具有绝对的优势。最初基于放射自显影的技术现在已近被结合有卤代胸苷类似物的免 ...

识辨转录因子靶基因对理解酵母菌转录基因调控网路非常重要。我们开发了一种名叫转座子「名片」的技术，该技术的原理是，通过利用转录因子可调控 Ty5 复古转录酶（Ty5 retrotransposase）将转座子插入与转录因子结合位点相邻的基因中。该方法不仅可以在许多编码转录因子中重复使用，当对大量转录因子进行研究时，还具有降低劳动强度的潜在作用。

在最新出版（2016.02）的冷泉港实验指南的头版，详细阐述了 CRISPR-Cas9 系统在小鼠基因编辑中应用在现代生物学中，实现对小鼠基因进行编辑或许是最重要的进步之一。然而，传统基因工程手段都很费时费力。可编程核酸酶的使用极大的提高了基因编辑技术的准确性（如，锌指核酸酶、转录激活效应核酸酶），但是这些核酸酶的设计和使用仍然纷繁复杂成本高昂。随着下一代可编程核酸酶系列--CRISPR-Cas9 系统的出现，使得基因编辑的能 ...

CRISPR/Cas-mediated genome editing in the rat viadirect injection of one-cell embryos通过直接注射单细胞胚胎，利用CRISPR/Cas 技术介导大鼠基因编辑Conventional embryonic stem cell (ESC)–based gene targeting, zinc-finger nuclease (ZFN) and transcription activator–like effector nucle ...

我们实验室在细胞信号转导方面非常强，但是目前的趋势是没有动物体内的结果使文章的档次大打折扣。导师意识到这一点，3年前在我开始硕博连读的阶段铁了心要我构建基因敲除的小鼠来验证一些体外研究的结果。由于我们是一个传统的cellular biochemistry的实验室，基因敲除小鼠方面我们只有从书本上学来的理论知识。这样的课题对我来说真是极具挑战性，但是想到将来可能出非常好的成果，我也信誓旦旦的接下了任务。我们前期 ...

Genome Engineering Using CRISPR-Cas9 SystemLe Cong and Feng ZhangAbstractThe Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR)-Cas9 system is an adaptiveimmune system that exists in a variety of microbes. It could be engineered to function in eukaryotic cel ...

引言本实验所用基因传递系统（基因枪）原理： 低压基因递送系统（GDS-80基因枪 U.S. Patent Number: 6,436,709 B1），根据火箭喷嘴原理和空气动力学原理设计，是用于传递生物微粒进入靶细胞的一种新型系统。如图1中所示，当左侧出现输入气体压力时（如：氦气），两个腔室之间将形成巨大的压力差，一旦该气体穿过装载样品的咽喉处，GDS-80中的气体输出将为生物粒子提供足够的动能量，使它们加速到接近超音速的速度（约300m/s）。 ...

1、 选取7~8周龄雌性小鼠，阴道口封闭，作为供体，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。 2、 47~48小时后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并与正常公鼠合笼；另取数只适龄母鼠（2月龄以上）作为受体，阴道口潮红，与结扎公鼠合笼。 3、第二天上午9:00前观察供体、受体，有精栓者拿出备用。受体笼拿出作好隔离措施。 4、10:30左右，断颈处死供体，手术取出整个输卵 ...

视频演示通过转基因斑马鱼功能性评估潜在的顺式调控元件的方法，如根据序列保守性选择测试元件，克隆序列并显微注射至斑马鱼胚胎。

动物转基因技术 世界上已报道了多种生产转基因动物的方法，主要有4类：①融合法，包括精子融合法，微细胞介导融合等。②化学法，包括DNA―磷酸钙沉淀法、DEAE―葡聚糖法、染色体介导法等。③物理法，包括显微注射法、电脉冲法、细胞冻存法等。④病毒感染法，包括重组DNA病毒感染、重组RNA病毒感染等。但真正成熟并可以稳定生产转基因动物的方法只有三种，即核显微注射DNA法、精子介导法和核移植法等基因 ...

转基因动物自1980--1983年产生后，迅速发展。

转基因动物自1980--1982年产生后，迅速发展。

转基因动物自1980--1981年产生后，迅速发展。

Promega提供一种先进的双报告基因技术，结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试，并结合pRL载体系统，表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶。

Attractene Transfection Reagent 高效转染各种贴壁真核细胞 ♦ 高效DNA转染，极低细胞毒性 ♦ 快速、简便的操作流程 ♦ 所有贴壁细胞 （包括难转细胞）的最佳选择 ♦ 非常适用于瞬时转染，稳定转染，共转染和 shRNA载体转染 ♦ 不含来自动物的组分 更高效率转染质粒DNA Attractene 试剂采用非 ...

(from Hogan et al. Manipulating the Mouse Embryo Cold Spring Harbor 1994) Day 1 1. Dissect embryos and place each yolk sac in a 1.5 ml microfuge tube (can be frozen at -20°C prior to extraction). ...

Use 4ml polycarbonate snap-cap tubes for all steps. Rocking of tubes should be performed at all times. All steps are carried out at room temperature unless otherwise stated. Day 0 1. Dissect embryos ...