实验仪器使用技术

单细胞凝胶电泳（SCGE）又称“彗星”法，是一种操作简便、快速、敏感性高的DNA损伤与修复的检测技术。尽管此法无需复杂的实验条件，但在建立过程中可能受诸多因素的影响而难以得到较理想的结果，我们就其主要的影响因素作如下分析。 1.琼脂糖凝胶薄板的制备：该实验需要制备两层琼脂糖凝胶薄板，应注意琼脂糖的浓度、制备时间和温度。第1层是紧贴冰冻玻片砂面的1%正常凝点（42 ...

单细胞凝胶电泳分析法（彗星分析法） 治愈癌症是一个难题，长期以来科学家们一直在苦苦探索.我们目前知道，致癌的过程与许多因素有关，但如果我们能阻止其中的任何一个步骤，癌细胞便无法形成。因此，探测致癌物质的技术与癌细胞的及时发现就显得尤其重要！然而截至目前为止，科学家们仍无法研究出一种简易基因测试法或综合的方法来检测出可能的致癌物。因此，致癌物对DNA的作用仍是癌症研究的一个重要课题。 ...

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） 一、目的要求 （1）学习电泳原理和技术 （2）学习和掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分离蛋白质技术 二、实验原理 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（简称Acr）单体和少量交联剂甲叉双丙烯酰胺（简称Bis）通过化学催化剂（过硫酸铵），四甲基乙二胺（TEMED）作为加速剂或光催化聚合作用形成的三维空间的高聚物。聚合后的聚丙烯酰胺凝胶形成网状结构。具有浓缩效应 ...

一、原理细菌体中含有大量蛋白质，具有不同的电荷和分子量。强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用，通过加热使蛋白质解离，大量的SDS结合蛋白质，使其带相同密度的负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）上，不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。采用考马斯亮兰快速染色，可及时观察电泳分离效果。因而根据预计表达蛋白的分子量，可筛选阳性表达的重组体。二、试剂准备1、30%储备胶溶液：丙烯酰胺（Acr）29.0g， ...

琼脂糖凝胶电泳检测调亡细胞 1.用不同方法诱导细胞调亡后，取106调亡细胞，置1.5ml离心管中，用PBS洗涤一次。在微量离心机上全速离心5秒钟，去上清液。加入100μl含5mol/L异硫氰酸胍，100mmol/L 2-巯基乙醇的25mmol/L枸橼酸钠缓冲液pH7.0，在旋涡混悬器上混悬20秒钟，破坏细胞，变性蛋白质。 2.加入50μl含7.5mol/L醋酸氨和0.8mg/ml糖原的 ...

人类基因组计划与美国塞莱拉遗传信息公司于2001 年在美国《科学》杂志和英国《自然》杂志联合宣布，他们绘制出了准确、清晰、完整的人类基因组图谱，至此，人类基因组计划已基本完成，随着后基因组时代的到来，蛋白质组学得到了空前的发展，蛋白质组研究旨在揭示基因表达的真正执行生命活动的全部蛋白质的表达规律和生物功能。包括蛋白质组、蛋白质组学、功能蛋白质组学和结构基因组学等新的概念的提出，蛋白质组学已成为当今 ...

【摘要】 本研究对蛋白质染色法进行比较和分析，以求获得满足蛋白质组研究所需的适宜的蛋白质检测法。实验采用2-D电泳分离急性早幼粒白血病细胞株NB4的全蛋白及1-D电泳分离蛋白质分子量标准物，从蛋白质检测的灵敏性、质谱兼容性、操作的简便性等角度，比较了传统考马斯亮蓝染色法、胶体考马斯亮蓝染色法、改良考马斯亮蓝染色法和银染法4种蛋白质着色法对凝胶分离蛋白质的检测影响，探讨了影响蛋白质染色与 ...

原理：在细胞核中，DNA是环状附着在核基质上，细胞裂解过程中，核基质被溶解、抽提，DNA的结构则未发生变化。如果DNA链上存在缺口，则使DNA超螺旋变的松弛，DNA环向外展，同时由于暴露了阴电荷，在电场力的作用下，松动的DNA环向阳极迁移，但是由于这种松动的DNA环一端仍附着于核DNA，其迁移距离受到限制，因此尾长并不总是真实反映链缺口的多少。实际应当依靠尾长与尾部的荧光强度同时来进行分析。 操作 ...

摘要　采用双向凝胶电泳技术和计算机辅助的图像分析方法对去甲肾上腺素诱导的应激心肌细胞与正常心肌细胞蛋白质进行分离和比较分析.正常心肌细胞可分离1 232 ±56 个蛋白点蛋白点匹配率为83.3 % ±1.0 %.有11 种蛋白质在NE 应激后发生了明显和稳定的质和量的改变(P <0.05)其中6 种(Mr/p I : 49.7 kD/7.8 38.3 kD/5.9 ...

摘要：采用石英砂加液氮研磨方法破碎花粉，然后用两种不同的方法提取水稻花粉总蛋白质，之后采用固相pH梯度等电聚焦/SDS-PAGE双向凝胶电泳对红莲型细胞质雄性不育水稻单核期花粉总蛋白质进行了分离。通过银染显色，PDQuest 2DE软件可识别约1 000 1 500个蛋白质点。其中TCA一丙酮提取法更适合提取花粉总蛋白质进行双向凝胶电泳分离，并可获得分辨率和重复性较好的双向电泳图谱。对红莲型细胞质 ...

摘要：目的建立并优化人胰液蛋白质组的双向凝胶电泳分离方法。方法通过比较几种常用的体液处理方法，确定了一种适于人胰液的蛋白质样品处理方法。经过一维等电聚焦和二维SDS -PAGE电泳后，有效分离了人胰液蛋白质组。 结果通过优化胰液蛋白质提取、上样量和固相IPG胶条分离范围的选择等步骤，建立了人胰液双向凝胶电泳的方法，并获得了分辨率较高、重复性较好的双向凝胶电泳图谱。 结论丙酮沉淀与双向凝胶电泳技术的 ...

尿毒症患者血清蛋白质组份的双向凝胶电泳-飞行时间串联质谱分析研究（武汉）为了建立和比较尿毒症患者及正常人的血清蛋白质双向电泳图谱，寻找和鉴定尿毒症患者差异表达的血清蛋白质谱。研究者以固相ph梯度（ipg）等电聚焦（ief）为第一向和垂直十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sds-page）为第二向，分别对尿毒症患者和正常者血清蛋白质样品进行二维双向电泳，经银染显色和imagemaster2d5.0 ...

蛋白质组研究的发展以双向电泳技术作为核心。双向电泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分离约1 000个E。coli蛋白，并表明蛋白质谱不是稳定的，而是随环境而变化。双向电泳原理简明，第一向进行等电聚焦，蛋白质沿pH梯度分离，至各自的等电点；随后，再沿垂直的方向进行分子量的分离。目前，随着技术的飞速发展，已能分离出10 000个斑点（spot）。当双向电泳斑 ...

先将混合物在一个直径1mm的玻管凝胶中进行等电聚焦凝胶。聚焦后将凝胶条小心的从毛细管中取出，然后放到另一平板凝胶的顶部（垂直板）或一端（水平板），再让胶条中已经分离的组分在平板胶中走SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。由于蛋白质的等电点和分子质量之间没有什么必然的联系，因此，经过双向电泳可将数千种蛋白质分开，显示出极高的分辨力。 ...

One-Dimensional SDS-PAGE Protein Gel and Staining (Gottschling Lab) Provides procedures for gel preparation gel staining... Preparation of SDS-Polyacrylamide Gels (SDS-PAGE) (William H. Heidcamp) SDS ...

液相色谱-质谱联用系统lc/ms/ms用于小分子化合物分析时的几点体会液相色谱-质谱联用系统用于小分子化合物分析时的几点体会液质联用仪因其对大部分化合物的高灵敏度得到越来越广泛的应用，适合于体内药物、体内有毒物质、药物的杂质等物质的定性和定量分析等领域。与传统的色谱分离检测器（紫外、荧光、视差、蒸发光散射、电化学等）检测的分析手段比较，质谱属于液相色谱的广适性检测器，具有明显的优势，该方法适用范围 ...

一、简介 生物芯片（biochip）是指采用光导原位合成或微量点样等方法，将大量生物大分子比如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等等生物样品有序地固化于支持物（如玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体）的表面，组成密集二维分子排列，然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交，通过特定的仪器比如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄影像机（CCD）对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而 ...

FCS Express V3是一在 Windows 98/NT/ME/2000/XP 环境下运作的流式数据分析软件，由加拿大商De Novo Software 公司行销全球，David Novo 及其团队所研发设计。FCS Express V3适用于分析本公司所有流式细胞仪产出的数据档案，含 FACScan、FACSort、FACSCalibur、FACSCanto、FACSArray、FACSA ...

RNA Gel (Crawford Lab) Gel Electrophoresis of RNA (Beverly Faulkner-Jones) great tips on RNA gel electrophoresis. Northern Gel and Transfer (gopher://iubio.bio.indiana.edu) Using glyoxala ...

电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷酸等）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。 电泳技术的基本原理和分类 在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。F＝QE质点的前移同 ...