遗传学实验技术

真核生物细胞状态是由内源和外源因素共同影响的，所有信号传递途径的终点都是DNA 。DNA 通过核蛋白复合物组成染色质，染色质是基因调控的一个重要作用位点。转录激活因子和辅助抑制因子的研究显示存在一种新的调节机制--" 组蛋白密码" ，其信息存在于组蛋白的转录后修饰等过程中。该类修饰包括组蛋白磷酸化、乙酰化、甲基化、ADP- 核糖基化等过程。随着越来越多组蛋白核心结构区域和羧端修 ...

ChIP（染色质免疫沉淀）方法是研究活体“蛋白质－DNA”相互反应的一种非常强大的工具。目前，这种方法用于染色质结构的动力学研究、转录因子的调节和辅助调节因子及其他表观遗传变化的研究。 ChIP的使用过程分为三个主要步骤：第一步，在甲醛固定后分离和破碎染色质；第二步，使用感兴趣的蛋白的抗体完成特定染色质片段的免疫沉淀；第三步，分析免疫沉淀片段以确定出靶标DNA是否与感兴趣的 ...

SSH是一项可以快速获取两个不同生物材料中差异表达基因的分子生物学技术，是快速筛选差异表达基因的有效方法，也是寻找新基因的重要手段。该技术尤其适合以genome尚不完全清晰的物种或者以特殊材料为研究对象的科研工作者。是基因芯片技术的有效补充。 基本流程:通过差减文库构建，文库验证和筛选（逆向斑点杂交），获得阳性克隆，对阳性克隆测序及生物信息分析，可判定差异基因的情况。另外结合RACE技术可进一步克 ...

mRNA差异显示技术是由美国波斯顿Dena-Farber癌症研究所的Liang Peng博士和Arthur Pardee博士在1992年创立的。它也称为差示反转录PCR（differential display of reverse transcriptional PCR）简称DDRT-PCR。mRNA差异显示技术是将mRNA反转录技术与PCR技术二者相互结合发展起来的一种RNA指纹图谱技术，具有 ...

真核生物中，从个体的生长、发育、衰老、死亡，到组织的得化、调亡以及细胞对各种生物、理化因子的应答，本质上都涉及基因的选择性表达。高等生物大约有30000个不同的基因，但在生物体内任意8细胞中只有10%的基因的以表达，而这些基因的表达按特定的时间和空间顺序有序地进行着，这种表达的方式即为基因的差异表达。其包括新出现的基因的表达与表达量有差异的基因的表达。生物体表现出的各种特性，主要是由于基因的差异表 ...

［摘要］ 差异表达基因与疾病密切相关，深入研究可在基因水平揭示疾病的发病机制，从而探索疾病治疗的有效方法。随着分子生物学技术的发展，各种研究差异表达基因的方法应运而生，尽管每种方法都有其缺陷和不足之处，但毕竟为我们提供了切实可行的研究方法，现就目前的主要研究技术做一综述。 ［关键词］ 差异表达基因；差异显示PCR方法；消减杂交法 Technology on differential gene a ...

真核生物中，从个体的生长、发育、衰老、死亡，到组织的分化、凋亡以及细胞对各种生物、理化因子的应答，本质上都涉及基因的选择性表达。高等生物大约有30 000个不同的基因，但在生物体内任意细胞中只有10%的基因得以表达，而这些基因的表达是按事件和空间顺序有序地进行着，这种表达的方式即为基因的差异表达。其包括新出现的基因表达与表达量有差异的基因表达。生物体表现出的各种特性，主要是由于基因的差异表达引起的 ...

1、基本原理 真核生物中，从个体的生长、发育、衰老、死亡，到组织的得分华、调亡以及细胞对各种生物、理化因子的应答，本质上都涉及基因的选择性表达。高等生物大约有30 000个不同的基因，但在生物体内任意8细胞中只有10%的基因的以表达，而这些基因的表达式安事件和空间顺序有序地进行着，这种表达的方式即为基因的差异表达。其包括新出现的基因的表达与表达量有差异的基因的表达。生物体表现出的各种特性，主要是由 ...

多态性（polymorphism）是指处于随机婚配的群体中，同一基因位点可存在2种以上的基因型。在人群中，个体间基因的核苷酸序列存在着差异性称为基因（DNA）的多态性(gene polymorphism)。这种多态性可以分为两类，即DNA位点多态性(site polymorphism)和长度多态性 (longth polymorphism)。 基因多态性的主要检测方法简述如下： 1．限制性片段长 ...

本文先讲最简单的一个点的定点突变技术，其它较长片段的突变，删除，插入技术以后会慢慢奉上： 在做实验之前，我们首先要搞清楚实验的目的和实验的原理。 实验的目的应该比较明确吧：就是要把自己的基因上面的一个碱基换成另外一个碱基。一般情况下我们会有几种可能使我们需要这样去做： 第一 我们吊出来的基因有点突变，相信这可能是大家经常会遇到的问题。基因好不容易吊出来，并装进了自己的载体，却发现有一两个碱基跟自己 ...

表观遗传学是与遗传学(genetic)相对应的概念。 遗传学是指基于基因序列改变所致基因表达水平变化，如基因突变、基因杂合丢失和微卫星不稳定等；而表观遗传学则是指基于非基因序列改变所致基因表达水平变化，如DNA甲基化和染色质构象变化等；表观基因组学(epigenomics)则是在基因组水平上对表观遗传学改变的研究。所谓DNA甲基化是指在DNA甲基化转移酶的作用下，在基因组CpG二核苷酸的胞嘧啶5' ...

PCR Protocol 10X PCR Buffer 1.0 MgCl2 (2.0mM) 0.8µl dNTPS miundefined 0.8µl Primer-F (µg/µl) 0.1µl Primer-R (µg/µl) 0.1µl Taq (5U) 0.1µl 32P dCTP ...

This method was successful in our lab using prostate tissue and for our specific objectives. Investigators must be aware that they will need to tailor the following protocol for their own research obj ...

This method was successful in our lab using prostate tissue and for our specific objectives. Investigators must be aware that they will need to tailor the following protocol for their own research obj ...

目的　克隆人肺鳞癌肿瘤差异性表达基因。 方法　应用抑制性消减杂交技术( suppression sub2 tractive hybridization SSH) 构建人肺鳞癌cDNA 消减杂交文库筛选后挑选阳性克隆进行测序并在Gen Bank 数据库中进行同源性比较最后经RT2PCR 验证。 结果　成功克隆10 个差异基因片段其中2 个为新基因(Gen2 Bank 登录号分别为:C20 :AF36 ...

实验原理 荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组进化研究待许多领域。FISH的基本原理是用已知的标记单 ...

多项乳腺癌微阵列研究结果给科学家提供了有关该病的更多遗传学信息，这将有助于今后靶向治疗药物的开发。 纽约大学癌症研究所的Julia Smith表示，研究人员正在寻找可以用在实验室鉴别早期乳腺癌、转移性乳腺癌或癌前病变的基因指纹。例如，现在已知人乳腺癌中8p11-12染色体有改变，该染色体的微阵列分析已经鉴定出4个新基因(FIJ14299、C8orf2、BRF2和RAB11FIP)可能与乳腺癌的发展 ...

宫颈癌是导致妇女癌症死亡的第一杀手，患病者通常在25到50岁之间。这种癌症的病因是受到人类乳突病毒感染，而且在基因水平上是因为病毒的两种致癌基因E6和E7过表达造成的结果。在澳大利亚，每年因宫颈癌死亡的妇女由300多人。 昆士兰大学免疫学和癌症研究中心的研究人员最近开发出了一种治疗宫颈癌的新方法。研究的领导者Nigel McMillan博士称这些发现建立在“基因沉默”方法的 ...

美国俄亥俄州哥伦布(COLUMBUS Ohio)消息，科学家通过对突变检测方法的比较研究发现，人们以前可能低估了存在于乳腺与卵巢肿瘤易感患者身上的关键基因突变数量。这个突变研究新发现对临床肿瘤遗传学家和他们的患者都具有深远的意义。 这项研究发表于2001年12月11日的医学遗传学杂志(Journal of Medical Genetics)上。他们用四种不同的方法去比较两类与乳腺和卵巢肿瘤发生强相 ...

（一）不同种属动物 1．灵长类动物：从种系发生上看，非人灵长类实验动物与人类的亲缘关系最近，它们也会发生各种形态上和生物学性质上与人的肿瘤相似的病变。已知，它们的肿瘤发病率与动物的种属、性别、年龄及捕养的时间有关。在实验室条件下，猕猴的自发性肿瘤发病率较高。在动物园内，猕猴的肿瘤发生率约为1%。在老年灵长类动物中，以上皮性肿瘤和恶性淋巴瘤为最常见，脑肿瘤则少见。常用中子或质子射线照射加以引发，可以 ...