遗传学实验技术

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相关专题 问：我欲提酵母质粒。我在为酵母细胞破碎犯愁，有人说超声波就可以。但大多人说对于酵母不行，高手们请指教了!谢了! 答：军科院的方法： 1、用酵母细胞裂解液重悬酵母菌 2、加酚-氯仿 3、加玻璃珠 4、振荡半小时 5、乙醇沉淀 6、电转大肠杆菌 Detailed: Plasmid Isolation from Yeast Reagen ...

相关专题 完美酵母质粒提取实验Protocol 问：请教如何从酿酒酵母抽提质粒? 用胞壁松解酶处理以后，再用SDS处理，是否就可以破碎酵母了，因为是抽提质粒，不是抽基因组DNA，可以不用蛋白酶K处理吗?请各位朋友提宝贵建议(不用玻璃珠破细胞)。我要尽可能把样品中的质粒都抽提出来，然后 REAL TIME PCR定量，好计算每个酵母细胞中的质粒 ...

相关专题 完美酵母质粒提取实验Protocol 问: 想从酵母提取质粒转化大肠杆菌按分子克隆的方法可能都线性化了转化率为0请问有什么好的办法? 答: 以下是我的方法曾提过数百个好像转化效率还可以基本上都提出来了. 个人体会是Lyticase的活性要好而且涡流混匀这一步好像要尽量充分吧u see酵母质粒所以不好提就是因为酵母细胞有很厚的细胞壁再 ...

相关专题 完美酵母质粒提取实验Protocol 问1:在提取酵母质粒的时候有一步用到玻璃珠谁能告诉我玻璃珠的作用而且在哪能买到玻璃珠贵不贵?谢谢! 答1:在高盐浓度条件下DNA吸附于玻璃珠上吸附了DNA的玻璃珠经离心、洗涤去掉盐和杂物后进行洗脱重悬于水或TE缓冲液中.DNA回收率高而无降解操作简单、快速、方便. 答2:玻璃珠SIGMA有可以问 ...

相关专题 完美酵母质粒提取实验Protocol 问: 求教酵母破壁的液氮研磨方法的详细步骤需要什么试剂? 答: 取1L酵母诱导完后离心(centrifugation)收菌体称湿重用蛋白(protein)纯化buffer悬浮菌体重量(g):buffer体积(毫升)=1:1--1:2.用注射器将菌液加入液氮中控制加入速度使得菌液进入液氮中后形成小 ...

相关专题 我给你介绍两个必叫简单点的酵母破壁方法，非常实用，我作过很多实验，这两个方法是我自己总结出来的，希望对你有用! 酵母的细胞壁比较厚不易破，而且细胞壁中含有的一些成分容易影响以后的实验，所以破壁的步骤非常关键!其他步骤只要你按照说明就可以了。 1. 酚氯仿剧烈振荡方法破壁：培养好的1ml酵母细胞在STE溶液中洗涤两次后，用70ulT ...

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相关专题 那些实验室常用的克隆载体 这两年在美帝净做克隆实验了，以前读PHD时候还觉得自己分子克隆挺牛X的，来这边之后做了各种各样的构建才知道以前是坐井观天，刚才粗粗统计了一下，在美帝一年零八个月，我构建的质粒超过四百个，其中有很简单从PCR构建到拿WB结果的一共不到一周，也有巨难的花了四个月时间换了几次strategy才弄好激动得我半夜給老 ...

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