微生物学技术

实验十九 牛肉膏蛋白胨培养基的制备 　　一、目的要求 　　1．明确培养基的配制原理。 　　2．通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。 　　二、基本原理 　　牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源， ...

实验十八 微生物大小的测定 　　一、目的要求 　　掌握用显微测微尺测量微生物大小的基本方法。 　　二、基本原理 　　微生物细胞大小，是微生物的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小，只能在显微镜下测量。用来测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺（图Ⅳ-4）和镜台测微尺（图Ⅳ-5）。 　　镜台测微尺（图Ⅳ-5）是中央部分刻有精确等分线 ...

Ⅵ．消毒与灭菌 　　消毒（disinfection）与灭菌（sterilization）两者的意义有所不同。消毒一般是指消灭病原菌和有害微生物的营养体而言，灭菌则是指杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子。消毒与灭菌的方法很多，一般可分为加热、过滤、照射和使用化学药品等方法。 　　一、加热法 　　又分干热灭菌和湿热灭菌两类。 　　1．干热灭菌 　　有火焰 ...

实验二十 高氏1号培养基的制备 　　一、目的要求 　　通过对高氏1号培养基的制备，掌握配制合成培养基的一般方法。 　　二、基本原理 　　高氏1号培养基是分离和培养放线菌的合成培养基。这种培养基是由可溶性淀粉（作为碳源），KNO3（作为氮源），NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O（作为无机盐，为微生物提供钠、钾、磷、镁、硫等离子）和FeSO4 ...

实验二十一 马丁氏培养基的制备 　　一、目的要求 　　通过对分离真菌用的马丁氏（Martin）培养基配制，掌握对选择培养基的配制方法，并明确选择的原理。 　　二、基本原理 　　马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基。此培养基是由葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、孟加拉红（玫瑰红，Rose Bengal）和链霉素等组成。其中葡萄 ...

实验二十二 干热灭菌 　　一、目的要求 　　1．了解干热灭菌的原理和应用范围。 　　2．学习干热灭菌的操作技术。 　　二、基本原理 　　干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭 ...

Ⅶ．微生物的纯培养 　　自然界中各种微生物混杂地生活在一起，要研究某种微生物的特性，其先决条件必须使该微生物处于纯培养状态，也就是说，培养的是微生物的某一个种或株，培养中的所有细胞有着共同的来源和仅是同一细胞的后代。使用显微操作器（micromanipulator）单细胞挑取法，可以直接得到纯培养，但一般都用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或划线平板法来分离、纯化微生物以获得纯培养，因后几种方 ...

实验二十四 紫外线灭菌 　　一、目的要求 　　了解紫外线灭菌的原理和方法。 　　二、基本原理 　　紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，波长为200—300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成，从而抑制了DNA的复制。另一方面，由于辐射 ...

实验二十五 微生物的分离和纯化 　　一、目的要求 　　掌握倒平板的方法和几种分离纯化微生物的基本操作技术。 　　二、基本原理 　　在土壤、水、空气或人及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。 　　为 ...

实验二十六 微生物的培养特征 　　一、目的要求 　　1．了解不同微生物培养在斜面上和液体、半固体培养基中的特征。 　　2．进一步熟练和掌握微生物的无菌操作接种技术。 　　二、基本原理 　　微生物的培养特征是指微生物培养在培养基上所表现出的群体形态和生长情况。一般可用斜面、液体和半固体培养基来检验不同微生物的培养特征。它们培养在斜面培养基上，可以呈丝线状、刺 ...

实验二十三 高压蒸汽灭菌 　　一、目的要求 　　1．了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围。 　　2．学习高压蒸汽灭菌的操作方法。 　　二、基本原理 　　高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器 ...

实验二十七 大肠杆菌生长曲线测定 　　一、目的要求 　　了解大肠杆菌生长曲线的基本特征，从而认识微生物在一定条件下生长、繁殖的规律。 　　二、基本原理 　　一定量的微生物，接种在适合的新鲜液体培养基中，在适宜的温度下培养，以菌数的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，做出的曲线叫生长曲线。一般可分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期。不同的微生物有不同的生长曲线 ...

实验二十九 菌种保藏 　　一、目的要求 　　学习与比较几种菌种保藏的方法。 　　二、基本原理 　　微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。 　　低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。 ...

实验二十八 厌氧微生物的培养 　　一、目的要求 　　学习几种厌氧微生物的培养方法。 　　二、基本原理 　　厌氧微生物在自然界分布广泛，种类繁多，作用也日益引起重视。培养厌氧微生物的技术关键是要使该类微生物处于除去了氧或氧化还原势低的环境中。 　　焦性没食子酸与碱性溶液作用后，形成碱性没食子酸盐，在此反应过程中能吸收氧气而造成厌氧环境；牛肉渣内既含有不 ...

Ⅷ．微生物数量的测定 　　单细胞微生物个体生长时间很短，很快进入繁殖阶段，生长和繁殖难以分开，个体生长很难测定，而且实际应用意义不大，因此，它们的生长不是依据细胞大小，而是以群体的生长作为单细胞微生物生长的指标。 　　群体生长表现为细胞数目的增加或细胞物质的增加。测定细胞数目的方法有显微镜直接计数法、平板菌落计数法、光电比浊法等。测量细胞物质的方法有细胞干重的测定、细胞某种成分如 ...

Ⅸ．环境因素对微生物的影响 　　微生物的生命活动要求一定的外界环境条件，外界环境条件适宜时，微生物进行正常生长繁殖；不适宜时，则会使微生物生长受到抑制或发生变异，甚至死亡。　　不同的环境因素对微生物的影响不同；同一因素因浓度或作用时间不同，对微生物的影响也不一样；有的因素对某些微生物来讲是必需的，而对另一些微生物又是有害的，如好氧微生物必须在有氧条件下才能生长繁殖，而厌氧微生物在有氧情况下将 ...

实验三十一 平板菌落计数法 　　一、目的要求 　　学习平板菌落计数的基本原理和方法。 　　二、基本原理 　　平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁 ...

实验三十二 光电比浊计数法 　　一、目的要求 　　1．了解光电比浊计数法的原理。 　　2．学习光电比浊计数的操作方法。 　　二、基本原理 　　细菌菌体是不透光的，光束通过细菌悬液，将会由于被散射或被吸收而降低其透过量。细菌悬液的浓度同光密度成正比，同透光度成反比，而光密度或透光度可以借光电池精确测出。所以可用光电比浊计来测定细菌相对数目。可先用血球计数板计 ...

实验三十 显微镜直接计数法 　　一、目的要求 　　1．明确显微镜计数的原理。 　　2．学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。 　　二、基本原理 　　利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定 ...

实验三十四 氧对微生物的影响 　　一、目的要求 　　了解氧对细菌生长的影响及其实验方法。 　　二、基本原理 　　各种菌对氧的要求是不同的，根据它们对氧的要求或所能耐受的量可将细菌分为四个类型。专性好氧菌必须在有氧的情况下生存，例如枯草芽孢杆菌；专性厌氧菌则要求在完全无氧的条件下生长繁殖，分子氧对它们有害，例如破伤风梭菌（Clostridiumtetani）、丙 ...