微生物学技术

储存液　　磷酸二氢钾　　　　　　　　34g　　1mol/L氢氧化钠溶液　　　　175mL　　蒸馏水　　　　　　　　　　825mL　　pH7.2　　制法　　先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后，再用蒸馏水稀释至1000mL。稀释液：取储存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL。分装每瓶100mL或每管10mL，121℃高压灭菌15min。 ...

成分　　明胶　　　　　　　　　2g　　磷酸氢二钠　　　　　　4g　　蒸馏水　　　　　　　　1000mL　　pH6.2制法　　加热溶解，校正pH，121℃高压灭菌15min。 ...

　　由于各种所需要的营养不同，所以培养基的种类很多。据估计目前约有数千种不同的培养基，这些培养基可根据所含成分、物理状态、以及不同的使用目的等而分成若干类型。　　1.按照培养基的成分来分　　培养基按其所含成分，可分为合成培养基、天然培养基和半合成培养基三类。　　(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，但价格较贵，而且微生物在 ...

变形杆菌具有尿素酶，可分解尿素产生氨，培养基呈碱性，以酚红为指示剂检测呈红色，由此区别于沙门氏菌。 吲哚（i）、甲基红（m）、vp（v）、枸橼酸盐利用（c）四种试验，常用于鉴定肠道杆菌，合称之为imvic试验。大肠杆菌呈“ --”，产气杆菌为“-- ”。气相、液相色谱法通过对细菌分解代谢产物中挥发性或不挥发性有机酸和醇类的检测，可准确、快速地确定细菌的种类，是目前进行细菌生化鉴定的高新技术。

玻片处理：将玻片用洗衣粉煮沸10分钟，水洗，再用清洁液浸泡，加温10分钟，水洗，再放入95%酒精脱脂，同时取出凉干，可制成涂片．染色液的配制： 20%的鞣酸溶液（加温溶解） 2毫升 钾明矾饱和液 2毫升 石碳酸饱和液 5毫升 10%碱性复红无水乙醇溶液 ...

包涵体的形成主要因为在重组蛋白的表达过程中缺乏某些蛋白质折叠的辅助因子，或环境不适，无法形成正确的次级键等原因形成的。1、表达量过高，研究发现在低表达时很少形成包涵体，表达量越高越容易形成包涵体。原因可能是合成速度太快，以至于没有足够的时间进行折叠，二硫键不能正确的配对，过多的蛋白间的非特异性结合，蛋白质无法达到足够的溶解度等。2、重组蛋白的氨基酸组成：一般说含硫氨基酸越多越易形成包涵体，而脯氨酸 ...

　整细胞筛选(直接寻找杀菌化合物)靶筛选(寻找生化抑制剂)优点选择透过细胞的化合物；已知抗菌特点；很高的可重复性；具有成功运用的历史。更敏感(能检测到适合于优化的弱透过性的化合物)；易筛选；方法多样；方便合理药物设计；能以生物学新领域为靶。缺点不灵敏；许多有活性的化合物是有毒的；化合物优化无理性基础(靶未知)；多种作用机制；近年来很难再发现新药。需要将体外抑制剂转变成抗菌药(被透过性复杂化)；靶的 ...

限制性核酸内切酶和修饰酶产生的质粒携带有编码合成限制性核酸内切酶和修饰酶的基因。 大肠杆菌素质粒（Col plasmid，或称Col因子）携带有产生大肠杆菌素（colicin）酶系基因的质粒，赋予大肠杆菌产生大肠杆菌素的能力。大肠杆菌素（colicin）是一种由E.coli 的某些菌株所分泌的细菌素，具有通过抑制复制、转录、转译或能量代谢等而专一地杀死其他肠道细菌的功能，其分子量约4×104 ~8 ...

　　1．传代培养保藏法　　又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。　　2．液体石蜡覆盖保藏法　　是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。　　3．载体保藏法　　是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、 ...

　1、计数器测定法：　　即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果。　　本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。　　2、电子计数器计数法:　　电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞， ...

1。细菌保存于穿刺培养物中：一般细菌保存于穿刺培养物可以维持两年。具体方法如下：用灭菌接种针挑取分散良好的单菌落，针缓慢穿过琼脂到达瓶底，连续几次，盖上瓶盖拧紧，做好标记。室温下存放于暗处。（最好一点可以将瓶盖放松，在适当温度下培养过夜，再拧紧瓶盖并加封Parafilm膜，室温或最好在4度避光保存）。2。细菌保存于含有甘油的培养物中：（1）在液体培养基中生长的细菌培养物：取0.85ml细菌培养物， ...

　　野生型噬菌体λDNA全长约50kb，上有65种限制酶酶切点，除ApaⅠ、NaeⅠ、NarⅠ、NheⅠ、Sna BⅠ、XbaⅠ和XhoⅠ等7种限制酶各有一个切点外，其余都多于2个。有些酶切点在λ增殖所必需的基因区域内。因此，噬菌体λ必须经过改造才能用作载体。现在用的λ载体大都除去了某种限制酶的酶切点。因此，作为载体的噬菌体λ都短于野生型。　　噬菌体λ载体有两种类型：①插入型。由于改建后的噬菌体λ ...

病毒学研究中常选用的实验动物有金黄地鼠、小白鼠、豚鼠、家兔、绵羊、禽类、猴等。分离病毒广泛使用的是乳鼠，它对柯萨基病毒、呼吸道病毒和虫媒病毒感染有很高的易感性。 选用实验动物不仅考虑它的易感性，还考虑接种途径，例单纯疱疹病毒的易感动物为家兔、豚鼠，接种途径分别是角膜、脑内和肉趾。 常见病毒敏感动物的选择：病毒易感动物的研究一直是病毒学中的重要内容之一。实验动物在人类病毒学发展史上起重要 ...

　　采用家兔法。亦可用细菌内毒素检查法，有异议时用家兔法仲裁。　　1 家兔法　　按《生物制品热原质试验规程》进行，判定标准按该规程4.2项要求进行，其抽样方法与注射剂量如下：　　1.1 抗凝剂　　按家兔体重2ml/kg注射。　　1.2 采血器及分血浆器　　采血器及分血浆器应有批号，每批抽一定数量进行检查，方法为用100ml氯化钠注射液通过，检查流过液，应无肉眼可见的混浊或异物，注射剂量按家兔体重1 ...

一. 点滴法1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养，一般培养16~24小时。2. 取300 μl 寄主细菌悬浮液加入5 ml 冷却至45℃的0.7﹪琼脂培养基中，均匀混合后立即平铺于已凝固的1.8﹪琼脂培养基上，并静置30分钟以上使其凝固。3. 以1% peptone为稀释液，将噬菌体原液做10倍序列稀释，一般稀释至107倍即可。4. 将平板划分为八个区域，以pipetman取不同稀释 ...

cellulase活性的检测方法很多，包括： 1.棉线切断法；采用Monod 恒温振荡器将缝纫机线(15 支纱) 的一端浸入含有5 ml 酶液的试管中pH 5. 0 40 ℃72 r·min - 1振荡测定纱线切断所需时间以此来得到酶活力。2.滤纸崩溃法采用Monod 恒温振荡器将两片滤纸(1 ×1 cm) 加入装有5 ml 酶液试管中40 ℃72r·min - 1 pH 4. 0 。计算滤纸完全 ...

硫乙醇酸盐培养基　胰酪蛋白胨（或酪素胰酶消化液，以总氮计2000mg）15g酵母浸出粉（或酵母透析液200ml）5g葡萄糖5g氯化钠2.5gL-胱氨酸（或半胱氨酸盐酸盐）0.5g硫乙醇酸钠（或硫乙醇酸0.6ml）0.5g琼脂0.65～0.75g新鲜配制的0.1%刃天青溶液（或0.2%美蓝溶液0.5ml）1.0ml去离子水（或蒸馏水）加至1000ml最后pH7.1±0.2　2　硫乙醇酸盐培养基（不含 ...

　　1　菌种　　1.1　需氧菌　　乙型溶血性链球菌（32210株），短芽胞杆菌（7316株）。　　1.2厌氧菌　　生孢子梭状芽胞杆菌（64941株）。　　以上菌株均由中国药品生物制品检定所分发。　　2　培养基　　凡应用于无菌试验的培养基（增菌和试验用）都应进行灵敏度试验。　　3　操作　　3.1　不应在同一无菌操作室内同时操作2个菌株。　　3.2　将菌种接种于适宜的培养基，经30～35℃培育一定时间 ...

　　1　菌种　　白色念珠菌、腊叶芽枝霉，由中国药品生物制品检定所分发。　　2　培养基　　凡应用于霉菌无菌试验用的培养基都应进行灵敏度试验。　　3　操作　　3.1　操作霉菌的无菌室应与其他无菌室隔离，有2个以上菌株试验时，不应在同一无菌操作室内同时进行。　　3.2　将菌接种在土豆培养基上，20～25℃培养5～7天后用灭菌生理盐水洗下菌苔，移入装有玻璃珠的大管中将孢子打散，经装有脱脂棉注射器过滤。将菌 ...

Ⅴ．培养基的制备 　　培养基是人工地将多种物质按各种微生物生长的需要配制而成的一种混合营养基质，用以培养或分离各种微生物。因此，营养基质应当有微生物所能利用的营养成分（包括碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素）和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。 　　一、按成分的不同分 　　1．天然培养基 　　主要成分是复杂的天然有机物质 ...