微生物学技术

脑膜炎球菌和李斯特菌的培养

停产，用次氯酸钠将房间整个清洁消毒，所有器具高温灭菌或用次氯酸钠浸泡。 地面用量：有效氯浓度2500ppm，大于30min； 器具：有效氯浓度500ppm，20min。摇床用甲醛加高锰酸钾熏蒸，用前再用紫外照射半小时。 发酵罐高温灭菌。 如果空气中噬菌体浓度也较高的话，可以用甲醛熏蒸，3g/平米；或用紫外照射，但要注意，因为这两种方法都可能对仪器造成腐蚀。下水也要用次氯酸钠处理。空气中噬菌体的检测 ...

1 样品采集 将一定的样品放入灭菌三角瓶中，加入对数生长期的敏感指示菌如大肠杆菌菌液3～5mL，再加20mL二倍肉汤蛋白胨培养液。 2 增殖培养 30℃振荡培养12～18h 使噬菌体增殖。 3 离心分离 将上述培养液以3000rpm离心15～20min 取上清液，用pH7.0，1%蛋白胨水稀释至10-2～10-3，用于噬菌体检查及效价测定。 4 生物测定法 4.1双层琼脂平板法 4.1.1 倒下层 ...

噬菌体： M13KE T7 宿主细胞 ： ER2738 BL21/BLT5403/BLT5615 噬菌体释放方式： M13噬菌体溶源性，不裂解宿主菌。极大地简化了每轮淘选过程中的噬菌体纯化步骤，只用简单的PEG沉淀方法即可。 T7是裂解性的，其展示的蛋白不需分泌。这一优点使更多的序列可能被展 ...

一、细胞的裂解 1、单层细胞的裂解 a）吸出培养液，以7ml用冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲盐溶液PBS冲洗细胞培养皿内的单层细胞，重复1次，将平板置于冰上直至所有单层细胞冲洗完毕。也可将平板放在一块铝板上，再将铝板置于冰盘上。 b）直径为90mm的培养皿需加0.5ml RNA提取缓冲液，并使之遍布整个平板的表面。（RNA提取缓冲注液配方：0.14mol/L NaCl，1.5mmol/L MgCl2， ...

细菌内毒素的简介及提取方法

1 目的 1.1 了解厌氧微生物的生长特性 1.2 观察厌氧微生物（双歧杆菌）的形态特征 1.3 掌握厌氧微生物的滚管分离、培养与计数技术 2 原理 目前培养厌氧微生物的简便而又有效的技术包括有：厌氧箱培养技术；厌氧罐培养技术；厌氧袋培养技术；亨盖特厌氧滚管技术。这里介绍的是亨盖特厌氧滚管技术。亨盖特厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特（Hungate）于1950年首次提出并应 ...

1．厌氧缸法。接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。 2．厌氧袋（Bio-bag）即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。塑料袋透明而不透气，内装气体发生管（有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿）、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。先折断气体发生 ...

厌氧菌在有氧的情况下不能生长。要培养厌氧菌，必须创造一个无氧的环境。通常用培养基中加入还原剂，或用物理、化学方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。厌氧缸法 接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养 ...

酵母菌种鉴定的方法

一、标本的采集和储存 出现症状后72小时内采样。粪便量尽量不少于5ml。贮存于2～8℃，但最多不能超过3天；长期贮存应在－20℃或－70℃。成形便和肛拭子诊断意义较小。 二、所需材料 IDEIA™ norovirus试剂盒（DakoCytomation公司）1000µl和200µl微量加样枪及相应不带滤芯的枪头酶标仪洗板机吸水性能好的卫生纸去离子水(无须高压) ...

轮状病毒（rotavirus，RV）纯化方法，仅供参考 方法一 氯化铯密度梯度离心纯化法（用密度梯度来做，首先我们需要什么样的转头，角式的，或者是甩平转头，一般用甩平转头。在准备密度梯度时，对病毒的浮力密度要清楚是多少，具体数字，然后我们才能知道用多大浓度的梯度介质。） 1、病毒浓缩 （1）PEG沉淀病毒：在收集到的病毒上清加入终浓度5％的PEG6000 4℃搅拌过夜，10000rpm 4℃ 1. ...

一、异硫氰酸胍提取法（这是提禽流感病毒的详细步骤，供参考） 1、取200ul样品数+阴性对照+阳性对照加入1.5ml灭菌eppendorf管； 2、加600ul异硫氰酸胍，然后加入对照和样品，再加200ul氯仿，颠倒混匀； 3、13000rpm离心15min； 4、在第3步离心快结束时，另取同样多eppendorf管，加入400ul于-20℃预冷的异丙醇； 5、取第3步离心的上清（一定不要吸取到中 ...

1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒； 2、慢慢搅动并加入NaCl终浓度是0.5mol/L有助于病毒的沉淀，再等量加入10％PEG(一般使用的是PEG6000就可以了。如果对样品的纯度不是严格要求的话，可以建议使用Millpore公司的离心浓缩柱，Amicon系列的可以一次浓缩15ml样品。)； 3、4℃过夜或放置一段时间； 4、8000/min离心30分钟，收集病毒沉淀； 5、将病毒沉淀 ...

1、试剂来源 Vero/slam细胞由国家麻疹实验室提供，使用代次不超过15代。 2、操作步骤 2.1维持液的配制 100mlDMEM& ...

传统的空斑实验方法测呼吸道合胞病毒的PFU值由于其空斑形成较小且需要借助特异性的表面融合蛋白抗体来确定故操作繁琐费用较高。这里介绍给大家三种简单易行的空斑形成实验操作方法： 方法一 1、以5×10e5/ml的密度接种Hep－2细胞到6孔板中，每孔加入3ml细胞悬液； 2、待细胞长成单层后（不得超过48hr），移去营养液，每孔加入400ul的PBS和100ul毒液（10倍系列稀释）； 3 ...

结核杆菌的培养基的配制及其计数

麦氏比浊管是McFarland发明的一种用于微生物比浊的不同浊度的标准浊度管，能快速、简便的确定细菌浓度。

概述 大多数微生物可用超低温保存，超低温保存法是适用范围最广的微生物保存法。需要复杂营养的微生物种，如用其他的贮存方法不能保持其活力（ 如植物的病原性真菌），通常可用超低温的方法保存（ATCC 1983；Halliday，Baker 1985）。此法是将冻存在小管或安瓿里的细胞以较慢的冷冻速率（1℃／分钟）冷冻，直至—150℃，再将这些小管贮存在-150～-196℃的液氮中。 超低温的 ...

有学者利用离子交换层析和分子筛层析纯化甲型流感病毒。整个过程操作方便，可操作性强，避免了密度梯度离心等操作。 Hemagglutinin Stability Stability of HA activity was investigated by titrating inactivated supernatant to different pH using 1M sodium hydroxide ...