微生物学技术

蛋白胨水使用方法：1、称取本品25g，加入蒸馏水或去离子水1 L，加热搅拌溶解煮沸至完全溶解，分装小试管，121℃高压灭菌15min。2、挑取少量待检菌的新鲜纯培养物，接种至培养基中，于36±1℃培养24—48h。必要时可培养4—5d。3、滴加(029030)靛基质试剂约0.5mL，覆盖于培养液表面，在两液接触处呈现玫瑰红色者为阳性反应，无红色者为阴性反应。蛋白胨水注意事项：1、试剂应密闭于棕色瓶 ...

一、菌种保存培养基 蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠3g，磷酸氢二钠2g，琼脂粉4.5g，蒸馏水1L 。 将上述的成分混合于水中，加热溶解，调pH至7.4~7.6，分装试管2/3左右高度，121℃高压灭菌15min，成为半固体培养基，备用。 培养基呈淡黄色半固体状。大肠埃希菌(ATCC 25922)生长良好动力阳性；福氏志贺菌(ATCC 12022)生长良好动力阴性；金黄色葡萄球菌(ATCC ...

一、革兰阳性杆菌分离培养基 1.罗-琴改良培养基 用于结核分枝杆菌培养。 磷酸二氢钾2.4g，硫酸镁0.24g，枸橼酸镁(或枸橼酸钠) 0.6g，天门冬素3.6g，甘油12ml，蒸馏水600ml，马铃薯淀粉30g，新鲜鸡卵液1L，2%孔雀绿水溶液20ml。 先将磷酸盐、硫酸镁、枸橼酸镁、天门冬素及甘油，加热溶解于600ml蒸馏水中。再添放马铃薯粉，边放边搅，并继续置沸水中加热30min，待冷却 ...

霍乱弧菌（V.cholera）是人类霍乱的病原体而霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传染病之一，曾在世界上引起多次大流行，主要表现为剧烈的呕吐，腹泻，失水，死亡率甚高，属于国际检疫传染病。 霍乱弧菌包括两个生物型：古典生物型（Classical biotype）和埃尔托生物型（EL-Tor bio-type）。这两种类型除个别生物学性状稍有不同外，形态和免疫学性基本相同，在临床病理及流行病学特征上没有 ...

（一）形态与培养特性 从病人分离出古典型霍乱弧菌和ELtor弧菌比较典型，为革兰氏阴性菌，菌体弯曲呈弧状或逗点状，菌体一端有单根鞭毛和菌毛，无荚膜与芽胞。经人工培养后，易失去弧形而呈杆状。取霍乱病人米泔水样粪便作活菌悬滴观察，可见细菌运动极为活泼，呈流星穿梭运动。营养要求不高，在PH8.8～9.0的碱性蛋白胨水或平板中生长良好。因其他细菌在这一PH不易生长，故碱性蛋白胨水可作为选择性增殖霍乱弧菌的 ...

（一） 霍乱弧菌的发病机理 正常胃酸可杀灭霍乱弧菌，当胃酸分泌缺乏或低下，或入侵的霍乱弧菌数量较多时，未被杀灭的弧菌就进入小肠，在碱性肠液内迅速繁殖，并通过粘液对细菌的趋化吸引作用、细菌鞭毛活动以及弧菌粘蛋白溶解酶和粘附素等的作用，粘附于小肠粘膜的上皮细胞表面，并在此大量繁殖。 霍乱弧菌产生强烈的外毒素，即霍乱肠毒素，由A亚单位和B亚单位组成。B亚单位与该处粘膜上皮细胞表面受体——神经节苷脂结合 ...

（一）致病性 人类在自然情况下是霍乱弧菌的唯一易感者，主要通过污染的水源或饮食物经口传染。在一定的条件下，霍乱弧菌进入小肠后，依靠鞭毛的运动，穿过粘膜表面的粘液层，可能藉菌毛作用粘附于肠壁上皮细胞上，在肠粘膜表面迅速繁殖，经过短暂的潜伏期后便急剧发病。该菌不侵入肠上皮细胞和肠腺，也不侵入血流，仅在局部繁殖和产生霍乱肠毒素，此毒素作用于不粘膜上皮细胞与肠腺使肠液过度分泌，从而患者出现上吐下泻，泻出物 ...

细菌的人工培养程序为:1、标本(估计菌量少的标本先增菌培养)2、根据培养目的接种于适当的培养基3、适宜的培养环境35℃-37℃18-24h4、观察细菌的生长情况选择可疑菌落进行分离、鉴定。根据对气体的需求细菌的人工培养方法可分为:1、需氧培养(需氧菌与兼性厌氧菌):置于空气中即可适于大多数细菌;2、厌氧培养(专性厌氧菌):需在无游离氧的环境中培养;3、二氧化碳培养(少数细菌如脑膜炎奈瑟菌、布鲁菌、 ...

细菌基因突变的类型和机制:1、碱基的置换:在DNA链上一个或几个碱基可以发生置换。碱基的改变影响到密码组成导致所编码的氨基酸改变而影响蛋白质功能;2、碱基的插入和缺失:当核苷酸序列插入或缺失一个碱基则使此后的序列中碱基发生移码突变导致密码子错误从而造成蛋白质的改变以致影响酶所催化的化学反应性质导致生物体遗传性状的改变;3、能在细菌质粒和质粒之间质粒和染色体或染色体不同部分之间自行转移的大段核苷酸构 ...

抗酸染色原理:分枝杆菌细胞壁含脂质较多其中主要成分为分枝菌酸此物具有抗酸性染色时与石炭酸复红结合牢固能抵抗酸性乙醇的脱色作用因此抗酸菌能保持复红的颜色达到染色目的。步骤:萋纳石炭酸复红染色加温促使菌体着色;3%盐酸乙醇脱色;吕氏美蓝复染未脱色细菌呈红色为抗酸性细菌脱色经复染呈蓝色的细菌为非抗酸性细菌。 (责任编辑：大汉昆仑王) ...

(1)营养物质:充足的营养是细菌进行新陈代谢的物质基础包括水分、碳源、氮源和维生素、无机盐类除此之外营养要求较高的细菌还需添加另外的物质和某些生长因子。(2)氢离子浓度(pH)、温度及气体也是细菌生长繁殖的基本条件。pH随菌种的不同有较大的差异但一般均要求pH7.2-7.4温度一般要求在35℃-37℃有的细菌可在室温下(22℃)生长。与细菌生长有关的气体有氧和二氧化碳。 (责 ...

常用固体培养基的质控菌株及标准 培养基 质控菌株 鉴定标准营养琼脂 福氏志贺菌ATCC12022 中度到大量生长血琼脂 金黄色葡萄球菌ATCC25923 中度到大量生长化脓性链球菌ATCC19615 生长β-溶血肺炎链球菌ATCC6305 生长α-溶血大肠埃希菌ATCC25922 生长巧克力琼脂 淋病奈瑟菌ATCC43069 生长脑膜炎奈瑟氏菌ATCC13090 生长流感嗜血 ...

蛋白胨中必须含有色氨酸否则会出现假阴性;色氨酸酶活性的最适pH为7.4-7.8pH降低靛基质产生减少可能出现假阴性或弱阳性反应;Kovac氏试剂(靛基质试剂I)应保存于带玻璃塞的棕色瓶中放置时间不宜过长否则其敏感度降低。 (责任编辑：大汉昆仑王) ...

(1)操作卡:各微生物室应具备标准的培养基操作卡内容包括培养基的成分配制及注意事项。(2)培养基的质量要求:1配制记录:应注明培养基原料的开封日期、储存条件、有效期、有否受潮结块等。在配制每批培养基时应作配制记录内容包括培养基的名称、数量、配方、灭菌、分装、贴标签、配制日期、有效期等;2培养基外观的检查:观察颜色和透明度是否正常液体培养基是否澄清固体培养基是否干裂及细菌生长pH是否在规定的土0.2 ...

内毒素的主要特性:1为革兰阴性菌的细胞壁成分细菌死亡裂解时释放;2其本质为脂多糖耐热加热100℃经1h不被破坏不能用甲醛脱毒成类毒素;3各种病原菌作用大致相同无特异性。4毒性作用包括热原性、低血压休克、组织损伤、弥漫性血管内凝血等;5促进免疫如有佐剂作用激活免疫系统、抵抗微生物侵袭等。外毒素的主要特性:1多为革兰阳性菌及少数阴性菌合成和分泌;2大多为多肽易被热、紫外线及化学剂变性经甲醛脱毒成类毒素 ...

一、体积小，面积大一个小体积大面积系统必然有一个巨大的营养物吸收面、代谢废物的排泄面和环境信息的接受面。二、吸收多，转化快发酵乳糖的细菌在1小时内可分解其自重1000～10000倍的乳糖；Candidautilis（产朊假丝酵母）合成蛋白质的能力比大豆强100倍，比食用公牛强10万倍；一些微生物在呼吸速率方面比高等动植物组织也强得多三、生长旺，繁殖快由于种种客观条件的限制，细菌的指数分裂速度只能维 ...

革兰氏染色法不仅用来观察细菌的形态，而且它还是细菌鉴定的重要方法，它可将全部细菌区分别革兰氏阳性菌和阴性菌两大类。革兰氏染色法的步骤为：涂片→固定→结晶紫色染色→水洗→碘液媒染→水洗→酒精脱色→番红复染→水洗→干燥→观察。　　涂片 与单染色法相同。　　固定 与单染色法相同。　　结晶紫染色 染色1分钟 ...

从饮水中分离大肠杆菌　　①制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。　　②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1：10稀释。　　③取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。　　④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18～24小时。培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。　　⑤将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。 ...

影响微生物生长与死亡的因素　生长是微生物与外界环境因素共同作用的结果。环境条件的改变，可引起微生物形态、生理、生长、繁殖等特征的改变；或者抵抗、适应环境条件的某些改变；当环境条件的变化超过一定极限，则导致微生物的死亡。　　为了抑制和消除微生物的有害作用，人们常采用多种物理、化学或生物学方法，来抑制或杀死微生物。常用以下术语来表示对微生物的杀灭程度。　　灭菌：用物理或化学方法杀灭物体上所有的微生物（ ...

高压蒸汽灭菌锅的操作过程与注意事项(1)准备。将灭菌锅放在2000瓦电炉上，或放在有足够火力的煤气灶、煤炉上，向锅内加水至水位标记线为止。将准备灭菌的培养基及空玻璃器皿用牛皮纸包好，装入锅内套层中，物品放置不宜过多，过挤，锅内应留出三分之一空间。然后盖严锅盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，关闭锅盖上的气阀。　　(2)加热。点燃热源，开始加热。当锅盖上的压力表达到0.5千克/厘米2时，打开放气阀， ...