免疫学技术

1、石蜡切片和冰冻切片的比较？（1）要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是今天我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。（2）冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。 ...

ELISA的实验操作所要求的条件是比较严格的，无论是对实验的硬件条件还是对实验的操作人员的技术要求，都是如此。因此在做ELISA实验时，一定要注意以下几点。一、ELISA实验通用规则1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但最好有专业人员进行矫正。2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。3、要在实验前1小时将试 ...

免疫荧光方法中的重要环节1、冰冻切片制备：建议用新鲜组织，否则组织细胞内部结构破坏，易使抗原弥散。选用干净锋利的刀片、组织一定要冷冻适度等，防止裂片和脱片严重。2、组织切片固定：切好片风干后立即用冰丙酮等固定液进行固定5-10min，尤其要较长时间保存的白片，一定要及时固定和适当保存。3、血清封闭：为防止内源性非特异性蛋白抗原的结合，需要在一抗孵育前先用血清（与二抗来源一致）封闭，减弱背景着色。血清封闭的时间是可以调 ...

酶免疫组化的关键环节1、标本固定：固定的目的是①防止标本从玻片上脱落；②除去防碍抗原—抗体结合的类脂，使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果；③固定的标本易于保存。固定液的选择和固定时间的决定具体见： http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=12551952&sty=3&keywords=%B9%CC%B6%A8%D2%BA+%D1%A1%D4%F12、脱水、石蜡包埋和制片：脱水用梯度乙醇（由低到高 ...

梅毒螺旋体（Treponema pallidum, TP）抗体的检测是评估TP感染的有效手段，对TP抗体的测试应该包括抗体筛查实验和对有重复反应性标本更特异的确认实验。根据《梅毒检测技术规范》要求，为了提高梅毒检测准确性，对于初筛阳性的结果，应选用不同厂家或不同方法的产品做重复试验，以提高梅毒检测的准确率。 对于TP抗体血清学检测的方法有非特异抗体检测方法、特异抗体检测方法，包含免疫印迹和FTA-ABS产品等。血清学实验室检测 ...

酶联免疫技术是将抗原抗体反应的特异性与酶促反应的专一性和敏感性结合而形成的一种方法。这是一种固相酶免疫检测技术，始创于1971年。它既可用于测定抗原，又可用于测定抗体。其敏感性高，特异性强，已成为酶免疫技术中应用最广泛的一种方法。本实验以双抗夹心法检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）为例。 【实验目的】 通过本实验的学习，了解酶联免疫吸附的基本原理及其用途，并熟悉其操作步骤与技能。 【实验原理】 酶联免疫吸附试验是以免疫学反应 ...

对流免疫电泳是在琼脂扩散基础上结合电泳技术而建立的一种简便而快速的方法。此方法能在短时间内出现结果，故可用于快速诊断，敏感性比双向扩散技术高10~15倍。 【实验目的】 通过本实验的学习，复习巩固免疫学的基本知识，了解对流免疫电泳的基本原理及其用途，并掌握对流免疫电泳的操作步骤及技能。 【实验原理】 抗原抗体在一定的pH溶液中带有电荷，在电场的作用下可发生定向移动。将抗原抗体加入pH8.6的琼脂凝胶中，抗体只带有微弱的负电荷，而 ...

某些病原微生物或红细胞悬液等颗粒性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在下，经过一定时间出现肉眼可见的凝集小块，称为凝集反应（agglutination）。根据反应的方式不同，凝集反应可分为直接凝集反应、间接凝集反应和抗球蛋白试验等。直接凝集反应时颗粒性抗原和相应抗体直接结合，在有电解质存在的条件下，出现肉眼可见的凝集小块，为直接凝集反应。有玻片凝集法和试管凝集法。前者是一种定性实验，多用已知诊断血清检验未知抗 ...

1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊断、预防和治疗提供了新的方法。 1. 杂交瘤的基本原理　杂交瘤技术又称单克隆抗体技术(monoclonal antibody technique)。杂交瘤技术是使免疫动物的脾细胞在聚乙二 ...

细胞毒检测技术包括补体依赖细胞毒试验、NK细胞介导的细胞毒试验和特异性CTL活性检测，常用的实验技术有后两种。NK细胞（natural killer cell）是在天然免疫系统发挥主要作用的效应细胞，可直接杀伤病毒感染的靶细胞和某些肿瘤细胞。而细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）则是特异免疫系统发挥特异杀伤作用的效应细胞，可特异杀伤病毒感染细胞和肿瘤细胞。本节介绍乳酸脱氢酶(LDH)释放 ...

免疫标记技术（immunolabelling techniques）是指用荧光素、放射性同位素、酶、铁蛋白、胶体金及化学（或生物）发光剂作为示踪物，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应，借助于荧光显微镜、酶标检测仪等仪器，对实验结果直接镜检观察或进行自动化测定，可在细胞、亚细胞以及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性和定位研究；或应用各种液相和固相免疫分析方法，对体液中的半抗原、抗原或抗体进行定性定量测定。根据标记物的种类和 ...

第1节- 试剂1.1涂层缓冲液PBS（137 mM氯化钠，2.7 mM的氯化钾，8.1 mM的磷酸氢二钠，1.5 mM磷酸二氢钾）1.2封闭液5％脱脂乳于PBST中（0.05％Tween-20）1.3稀释剂2％脱脂乳于PBST中（0.05％Tween-20）1.4柠檬酸缓冲液3.65克柠檬酸，4.76克磷酸氢二钠，溶解于500毫升双蒸水1.5兔抗GST抗体兔抗GST抗体1.6 HRP结合山羊抗兔IgG（H + L）山羊抗兔IgG（H + L），結合过氧化物酶第2节- 分析方法注 ...

做过病理实验的人都知道，实验看似容易，但真想把它做好，还是需要花上很长一段时间去积累和摸索经验。我从事病理实验已有 6 年多了，在这段时间里，我做过许许多多病理相关实验，刚开始啥也不懂，一味按照网上操作流程来做，但做的结果往往并不是十分理想，最终结果未能达到预期的效果。经过一段时间的浏览和学习，在论坛内学习、请教，并结合实践操作，我经历了初级——查找资料和摸索方法；中级——问题求助和不断总结；高级——难题解答和经验分享这三个阶段 ...

1.2.1　抗体的结构抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。Ig由两个轻链（L）和两个重链（H）的单体组成。Ig的轻链是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda）两种型别。五类Ig的重链结构不同，这决定了它们的抗原性也不同。IgG和IgM的重链分别称为γ（gamma）链和μ（mu）链。重链和轻链 ...

一、石蜡切片和冰冻切片的比较？1.要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。2.冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。当你买 ...

随着免疫荧光技术的不断发展，荧光染料及其标记的抗体偶联物也被广泛的应用于生物学实验中。目前，市场上抗体及蛋白标记的荧光染料主要有CFTM系列(BIOTIUM, USA); Alexa Fluor®系列(Life technology, USA); DyLight系列; Cy系列; IR Dye系列等等。使用最多的为Alexa Fluor®系列和CFTM系列。CFTM系列染料的核心对比Alexa Fluor®系列具有以下几点优势：1. 新型罗丹明核心罗丹明染料以优异 ...

1.抗体一抗的选择，二抗的选择2.仪器：恒温培养箱、高压锅、移液器、枪头，摇床、试剂缸等3.试剂：二甲苯、无水乙醇、甲醇、过氧化氢、中性树胶、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾等，血清封闭液、一抗稀释液、DAB显色液，柠檬酸缓冲液等为北京德元国际科技有限公司提供。4.实验步骤1.洗载玻片:将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中,,便于组织吸附,然后置于清水中清洗,除去残余的重铬酸钾和浓H2SO4(大约冲一个小时左右),再将 ...

一、实验原理SmIg是B细胞的抗原识别受体，也是B细胞特异的表面标志，用直接免疫荧光法可检查出SmIg。用荧光素标记的抗Ig抗体，在一定条件下与淋巴细胞混合，荧光素标记的抗Ig抗体可以与B细胞表面的Ig结合，在荧光显微镜下观察可见B细胞膜上出现荧光。此方法可用来鉴定B淋巴细胞。二、实验材料1. ICR小鼠（北京大学医学部实验动物中心提供）2. 异硫氰酸荧光素（FITC）标记的兔抗小鼠Ig抗体（购自BD公司）3. Hank's液： ...

一、基本原理吞噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化的功能，在机体非特异性免疫中发挥重要作用。小鼠腹腔内注射硫代乙醇酸钠，可刺激巨噬细胞的聚集。四日后小鼠腹腔内注入羊红细胞悬液，一小时后解剖收集腹腔吞嗜细胞，染色、镜检可观察对羊红细胞的吞嗜现象。通过计算吞嗜百分比或吞噬指数可测定吞噬细胞的吞嗜功能。二、材料1. ICR小鼠（北京大学医学部实验动物中心提供）2. PBS缓冲液3. 3％硫代乙醇酸钠4. 1％羊红细胞悬液 ...

一、基本原理免疫电泳法是将凝胶电泳与双向免疫扩散两种技术相结合的一种实验方法。在电场作用下标本中各组分因电泳迁移率不同而分成区带，然后沿电泳平行方向将凝胶挖一沟槽，将抗体加入沟槽内，使抗原与抗体相互扩散而形成沉淀线。根据沉淀线的数量、位置及形状，分析标本中所含各组分的性质，本实验常用于抗原分析及免疫性疾病的诊断。二、实验材料1%离子琼脂（pH8.6巴比妥缓冲液加入等量蒸馏水，再加入1%琼脂。溶解后用脱脂棉过滤，分装 ...