免疫学技术

【摘要】 目的 对透射免疫比浊法定量测定血清D —二聚体的方法进行临床实验评价。方法 实验评价包括精密度、线性测定、回收实验以及干扰实验。结果 该D-二聚体定量测定试剂在精密度测定CV%小于5%，回收率在95~99%。线性测定良好，可达16ug/ml，回归方程为Y=1.0133X-0.0076，相关系数r=0.9997。对胆红素、血红蛋白 ...

【摘要】 目的 探讨大肠癌和胃癌患者血清β2微球蛋白(β2microglobulin，β2 MG)含量变化及其临床意义。方法 用免疫比浊法检测30例大肠癌和30例胃癌以及30例正常健康人血清β2 MG含量；动态检测大肠癌和胃癌手术前后β2 MG含量变化。结果 大肠癌组和胃癌组血清中β2 MG含量均明显高于健康对照组(P&l ...

目前，体液标志蛋白的检测方法主要采用免疫学方法，以酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）、放射免疫测定（Radio immunoassay，RIA）和胶体金层析法（俗称“金标”）这几种方法为主。ELISA方法虽然在临床上使用了近二十年，但它依然存在一些致命缺点，定量准确性差、操作时间长、自动化程度低，一般只能用于定 ...

时间分辨荧光免疫分析法是用三价稀土离子及其螯合剂作为示踪物，标记蛋白质、激素、抗体、核酸探针或生物活性细胞，待反应体系（如: 抗原抗体免疫反应、生物素亲合反应、核酸探针杂交反应、靶细胞与效应细胞的杀伤反应等）发生后，用时间分辨荧光技术测定反应体系中分析物的浓度，达到定量分析的目的。它之所以能够继放射性同位素标记、酶标记、化学发光、电化学发光后成为一种更新、更灵敏的检测方法，主要取决于它所用标记物三价稀土离子螯合物独一无二的物理及化学性质。主要报导了对使用的长寿命荧光团Eu3+螯合物的光谱研究结果，时间分辨技术及荧光增强技术的原理。实验表明: 选择336～337nm的激发波长，有利于Eu3+的配位二酮体的激发及能量转移。

目的: 制备时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂 4,7-二 氯磺酸基苯基-1,10-菲咯啉-2,9-二羧酸（BCPDA）。方法: 合成物的结构由熔点、元素分析、红外光谱和核磁共振谱确证；采用标记曲线法测定标记物中蛋白质的含量；应用荧光分光光度计测定Eu3+-BCPDA的荧光强度; 采用放免法测定标记蛋白质的活性。结果: BCPDA与Eu3+结合后可测量到的最低浓度为1×10-15Mmol•L-1 标记蛋白质的相对生物活性高于80%。结论: 成功地制备时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂，并建立 Eu3+-BCPDA-蛋白质标记物中蛋白质浓度的测定方法。

一、原理 当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。这一方法早于1959年Schultre和Schuick等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物，导致浊度的改变，再进行透射比浊测定，一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。其原理是，利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定 ...

时间分辨荧光免疫分析是一种新型的体外超微量分析技术。它具有高精度、自动化、大样本快速测定（1～2就能出结果）等技术优点。其在灵敏度和准确性方面明显高于ELISA，特异性又明显高于聚合酶链反应（PCR） 。因而，其应用已不再局限于临床诊断，已渗透入生物学研究的各个领域。本文就该技术的研究进展及应用做一简要综述。

液相蛋白芯片技术由美国纳斯达克上市公司Luminex研制开发并于2O世纪9O年代中期发展起来，是在流式细胞技术、酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)技术和传统芯片技术基础上开发的新一代生物芯片技术和新型蛋白质研究平台。液相蛋白芯片技术推动了功能基因组时代的蛋白质研究，相关的仪器、分析软件以及试剂盒研发备受瞩目并已形成一定的市场规模。现拟 ...

一、Required Materials and Equipment 1、Protein A or G agarose gel column (10 ml or 5 ml of packed beads; see guidelines below for choice of protein A or protein G) 2、Ice-cold Tris-buffered saline (TBS) ...

一、前言 对于人类重要疾病病原或动植物有害生物的首次鉴定确诊，通常需依循柯霍氏法则（Koch's postulates）进行，依此法则需满足四项条件：（一）在病患或罹病之动植物上能找到相同的病原；（二）由罹病体分离出来的病原应能纯化或培养；（三）纯化或培养出来之病原接种到实验动物体或相同之动植物时，仍会引起相同之疾病或病征；（四）发病后仍可自接种之实验动物体或动植物中分离出相同病原。但如每次确定病 ...

一、Materials 1、Antibody 7E3 2L sup grown in flasks frozen and thawed overnight. 2、BioRad Affi-Gel Protein A MAPS II Buffers cat. #1530-6160 ($161.00) 3、50 mM Tris pH7.8 4、40 g ammonium sulfate for e ...

多色微球液相芯片是一个多功能的液相分析平台，其有机整合了有色微球、激光技术、应用流体学、快速信号处理和数据分析系统，故特异度和灵敏度较高。目前，该技术已广泛应用于免疫分析、核酸研究、酶学分析及受体与配体的识别分析等领域中。 一、原理及优势 1、原理 多色微球液相芯片技术的分析基础是由微小的聚苯乙烯粒子组成的微球。这种微球结合了两种不同颜色的荧光染料(红色和橙色)，当微球被635nm的激光照射后，能 ...

1、use 2 mg of antibody per ml wet beads (use appropriate antibody/protein A or G combination) 2、mix antibodies with beads and bind at room temperature for at least 1 hr (on roller) 3、wash the beads tw ...

This protocol includes an ammonium sulfate cut affigel blue chromatography and affinity chromatography. 一、Solutions 1、Affigel Blue Prewash 0.1 M acetic acid 5.7 ml glacial acetic acid 1.4 M NaCl 81 g ...

一、Reagent and Materials 1、Hi-Trap Protein G Column (Pharmacia Biotech #17-0404-01) 2、20 mM Sodium Phosphate Buffer pH 7.0 1.084 g NaH2PO4 anhydrous 3.273 g Na2HPO4.7H2O q.s. to 1 liter with di-H2O ...

一、Conjugation of carrier (BSA) to peptide 1、Dissolve pure BSA 20mg/ml in 10mM phosphate pH 7.0. 2、Dissolve MBS-SMCC 25mg/ml in NNdimethylformamide. 3、Mix 20ml SMCC and 200ml BSA (500mg:4000mg or 1:8) ...

一、Reagents 1、Affi-gel Protein-A Agarose (BioRad #153-6153) 2、MAPS II Binding Buffer (BioRad # 153-6161) 3、0.314 g/ml diH2O 4、MAPS II Elution Buffer (BioRad #153-6162) 5、0.023 g/ml diH2O 6、MAPS II Re ...

【摘　要】目的 建立液相蛋白质芯片检测血清C反应蛋白（CRP）的方法，探讨该方法诊断冠心痛的临床应用价值。方法 用聚苯乙烯荧光微珠，将抗CRP单克隆抗体包被在微珠上，将另一针对CRP不同抗原表位的单克隆抗体生物素化；包被好的微珠加入到96孔板中，将待测血清分别加入各孔，用CRP标准品建立标准曲线，各孔中加入生物素化抗CRP单抗和PE荧光素标记的链霉亲合素。在Bio-Plex液相蛋白质芯片分析仪上检 ...

Fusion is an important procedure to produce monoclonal antibodies (MoAb). 一、PROTOCOL 1、prepare the culture of myeloma cells and maintain the concentration of the cells at the level of less than 10^6 c ...

【摘　要】目的 比较液相与固相蛋白芯片检测多肿瘤标记物的临床应用效果，并探讨液相蛋白芯片应用于临床检验的可行性。方法 分别用液相与固相蛋白芯片方法检测45例临床送检样本的AFP、CA125、CA242及CEA，对两种方法的操作步骤、有效检测范围、参考临界值及检测结果进行比较。结果 与固相蛋白芯片相比，液相蛋白芯片检测多肿瘤标记物的操作至少节省1h，标本用量节省8 ...