免疫学技术

免疫球蛋白的组合多样性 胚系未重排基因中有众多的V、D、J基因片段，在重排过程中可以有各种组合。在人免疫球蛋白基因的重排中，就VH而言有65个功能性VH基因片段，27个D基因片段，6个JH基因片段，这样就有65× 27× 6＝1l 000种VH；人的κ轻链约有40个功能性Vκ基因片段，5个Jκ基因片段，这样就有200种不同的Vκ。 对λ轻链而言，约有30个VL片段和4个Jλ，组合起 ...

免疫球蛋白的连接多样性 Ig各基因片段之间的连接往往并不准确，有插入、替换或缺失核苷酸的情况发生，从而产生新的顺序，称为连接多样性。造成连接多样性的机制有两种。P-核苷酸和N-核苷酸的加入图示D-J重排时P―核苷酸和N―核苷酸的加入。 D基因3，末端6个核苷酸和J基因5，端6个核苷酸以橘红色显示。 A・在RSS序列互补介导的环出剪切过程中，RAGl和RAG2共同作用，在D、J基因与RS ...

免疫球蛋白的多样性及其产生机制 Ig胚系基因通过基因重排和抗原的刺激，由活化B细胞分化发育为浆细胞后产生Ig。自然界中有数量巨大的抗亨物质，可刺激机体产生同样数量巨大的特异性免疫球蛋白。由此构成了免疫球蛋白多样性(1gdiversity)。 Ig有两个基本的特哇：作为抗体可特异性结合抗原，但又可同时作为抗原分子，诱导机体产生抗免疫球蛋白的免疫应答。虽然Ig分子的基本组成为H2L2， ...

体细胞高频突变形成免疫球蛋白的多样性 体细胞高频突变发生于基因重排后成熟B细胞受抗原刺激后的分化发育阶段，而并非像上述两种机制发生于胚系基因片段上，突变频率高，而且只出现于次级淋巴器官的生发中心。主要方式是替代性点突变。点突变的位置并非完全随机分布，主要发生于重排后的可变区基因3，和5，端300个左右的碱基内，其突变频率较细胞中正常基因突变频率高105倍，这样既能产生最大序列的多样性，又不 ...

抗体在疾病的诊断和免疫防治中的重要作用，使人们对抗体的需求越来越大。人工制备抗体是大量获得抗体的重要途径。早年人工制备抗体的方法主要是以相应抗原免疫动物，获得抗血清。由于抗原常常含有多种不同的抗原表位，加之所获得的抗血清也未经免疫纯化，因此，获得的抗血清实际上是含多种抗体的混合物，即多克隆抗体(polyclonal antibody)。用于制备抗血清的动物也因抗体需求量的增加 ...

免疫球蛋白的类别转换S-S重组 在JH和CH之间有一含数千碱基长的内含子序列，其中每一个CH片段(Cδ除外)上游2～3kb处有一段串联重复性DNA序列，长度为2―10kb，称为S区(switchregion)或转换部位(switchsites)。不同类别恒定区基因的S区序列各不相同，但具有基本的共同序列GAGCT和GGGGT因类别转换发生在S区，故又称为S-S重组。各种细胞因子如IL-4、 ...

免疫球蛋白的类别非缺失性转换 B细胞接受抗原刺激后，可转换表达不同的重链恒定区基因，从而改变所产生的抗体分子的类型，但仍保持其原有的抗原特异性。这种现象称为类别转换或同型转换(1sotypeswitch)。所有的B细胞在未经抗原刺激前，其细胞膜上最早表达的是IgM，进入外周时表面共表达IgM和IgD。在抗原激活B细胞后，膜上表达和分泌的Ig类别可转换成IgG、IgA、IgE等其他类别或亚类 ...

免疫球蛋白多样性的生物学意义 自然界存在着数量巨大的抗原物质，必须有带有特异性BCR的B细胞与之反应，产生同样数量巨大的免疫球蛋白与之结合。 因此，Ig的多样性是特异性免疫应答的基础和前提，保证了机体对多种多样的抗原都能作出积极而有效的防御反应，也使得机体清除多种多样的抗原有了可能。 同时，Ig的多样性也是鉴别抗原，研究抗原及其诱导的免疫应答的物质基础。Ig的多样性还有助于 ...

基因工程抗体 DNA操作技术和基因工程技术的发展，使得人们不仅可用杂交瘤技术生产单抗，也可通过基因工程手段人为制备各类抗体。抗体可在动物细胞中表达，如骨髓瘤细胞(myelomacell)，结合大规模培养的生物反应器，抗体产量据报道可高达500mg／Lo也可用其他的动物细胞来表达，包括昆虫细胞在内。 细菌系统因其遗传背景清楚、转化效率高、繁殖迅速、培养基便宜、而且早已建立的微生物发酵 ...

抗体片段及其衍生形式 1．双特异性抗体 将两套轻链、重链基因导入骨髓瘤细胞中，选择合适的抗体恒定区及Ig类型，可获得产量大、均一性和高纯度的双特异性抗体。另外，以化学交联技术或杂交―杂交瘤技术也可获得双特异性抗体。 2．Fab抗体 Fab抗体是由重链Fd(即VM+CHl)和完整轻链通过二硫键结合而成的异二聚体，仅含一个抗原结合部位。将重链Fd和完整轻链的编码基因连接，5，端融合 ...

主要组织相容性复合体 主要组织相容性复合体(MHC)是由一组高度多态性基因组成的染色体区域。MHC基因产物能在不同细胞表面表达，通常称之为MHC分子或MHC抗原，又因这些抗原在器官移植中代表供受者双方的组织相容程度，也称为移植抗原或组织相容性抗原。脊椎动物中，从鱼到人类都存在结构与功能相似的MHC遗传区域，如小鼠的MHC是H-2，堵的MHC是SLA，人的MHC是HLA。 MHC是现 ...

小鼠H-2（小鼠的MHC复合体）系统 1900年Landsteiner发现人体ABO血型，引起了寻找各种动物红细胞抗原的热潮。1939年Gorer在鉴定近交系小鼠血型抗原时发现四组血细胞抗原，后证实第Ⅱ组抗原与肿瘤及移植物的排斥密切相关，就将之重新命名为H-2即histocompatibility-2。因而现今，H-2代表了小鼠的MHC复合体。 H-2复合体位于小鼠第17号染色体的一 ...

经典的HLA基因 经典的I类、Ⅱ类和Ⅲ类区域的基因，即经典HLA。此类基因所在的区域具有以下几个特点： ①是免疫功能相关基因最集中、最多的一个区域，I类、Ⅱ类、Ⅲ类相加共218个基因中40％基因产物均具有免疫功能； ②是基因密度最高的一个区域，平均每16 kb就有一个基因； ③是多态性最丰富的一个区域； ④是与疾病关联最为密切的一个区域。HLA区域内主要基因及已正 ...

扩展的主要组织相容性复合体 xMHC这段区域长度从HLA工类区域最远端的HCP5P15算起，最终扩展到HLAⅡ类区域的接近着丝粒处的KIFCI，共7．6Mb，包括下列5个亚区及421个基因座位。 (1)扩展的I类亚区(extendedclassⅠsubregion)：长3．9 M山含有182个基因座位。 (2)经典的I类亚区(classicalclassⅠsubregi。n) ...

人类主要组织相容性复合体HLA HLA(human leucocyte antigen)基因系统是人类主要组织相容性复合体。人类第一个HLA抗原由法国Dausset在1958年从三个多次接受输血患者的血清中检出，当时命名为MAC，相当于目前正式命名的HlA―A2加上HLA―A28。基因产物称为HLA抗原或白细胞抗原。有关HlA的研究工作在临床器官移植配型和国际大协作推动下发展十分迅速，涉及 ...

HLAⅢ类基因区 位于HLAI类和Ⅱ类区之间从PPIP9到BTNL2包含有62个基因座位．长度为0．9Mb。其中58个表达基因，2个假基因，每14 516bp就有一个基因，因此是整个基因组中基因密度最大的一个区域。除了LOCA01250基因外，其余基因均在1999年已发现。此外，在Ⅲ类基因区的表达基因中，有的产物发挥重要作用．如参与细胞转录调节(CREBLl、BTKl9、PBX2、RDBP ...

HLAⅡ类基因区 HLAⅡ类基因区位于HLA复合体的着丝粒端，即从DRA到HLA-DPA3的一段区域，长度为0．9Mb，包含34个基因座位，其中16个为表达基因，3个后选基因，15个假基因。在16个表达基因中除了BRD2(原名RING3)外均有免疫学功能。Ⅱ类区域内至少含有DR、DQ、DP、DOA、IX)B和DM六个亚区。 (1)HLA-DR亚区：DR亚区有1个DRA基因及9个DRB ...

HLA I类基因区 HLA I类基因区位于复合体的最远端，即从端粒端的HCP5p15到MICB之间，长度为1．9Mb，包括122个基因座位，其中41个为表达基因，12个为后选基因，3个为非编码基因及66个假基因。根据编码产物分布、功能及多态性不同又可分为经典工类基因和非经典I类基因。 (1)经典HLA I类基因：又称HLA-Ia，是指最早发现的三个功能基因即HLA-A、HLA-月和 ...

HLA基因的多态性 丰富的多态性(polymorphism)是HLA基因系统的一个最重要特点。HLA复合体中很多基因座位的DNA序列在人群中存在许多变异体，称为等位基因(allele)。大量的等位基因往往为经典HLA基因所拥有。前面提到，如B座位的等位基因数高达805个(图4―3)。对每一个个体，任何一个座位均有2个等位基因，分别来自父母亲，这些等位基因均能得到充分的表达，称为共显性(co ...

HLA分子的组织分布 经典HLAI类分子(HLA-A、B、C)和Ⅱ类分子(HLA-DR、DQ、DP)以糖蛋白形式表达在细胞膜表面，HLAⅢ类分子则以可溶性形式存在于血浆中。非经典HLA I类分子的表达有别于经典I类分子。经典的HLA I类分子HLA-A、HLA-B表达在除绒毛外滋养细胞外的所有有核细胞表面，HLA-C分子则可表达在包括绒毛外滋养层细胞内的所有有核细胞表面。但不同组织和不同细 ...