免疫学技术

免疫学的发展自Jenner发明牛痘苗之后，停滞了将近一个世纪。进入19世纪后微生物学在法国免疫学家Pasteur和德国细菌学家Koch 等人的努力下得到了迅速发展。在方法学上创造性地解决了细菌的分离培养，从而能获得纯种细菌医学教育|网搜集整理，为人工菌苗的制备创造了条件。Pasteur更有意识的研究获得减毒菌株的方法，通过系统的科学实验，终于发现了应用物理、化学以及生物学方法可获得减毒菌株。在1881年 Paste ...

异嗜性抗原（heterophile antigen）是一类与种属特异性无关，存在于不同种系生物间的共同抗原。如溶血性链球菌的多糖和蛋白质抗原与人体的心肌、心瓣膜或肾小球基底膜之间可有共同抗原存在， 当机体感染了溶血性链球菌并产生抗体后，可以与含有异嗜性抗原的上述组织结合，通过免疫反应造成机体的组织损伤， 临床表现为风湿病或肾小球肾炎医学教育|网搜集整理；大肠杆菌O14型的脂多糖与人的结肠粘膜之间也有异嗜性抗原存在，此与溃 ...

抗原抗体溶液在电解质的存在下结合，形成絮状沉淀物，这种絮状沉淀受抗原和抗体比例的直接影响，因此产生最适比例的测定方法，常见有：1.抗原稀释法：抗原进行一系列稀释与恒定浓度抗血清反应。2.抗体稀释法：抗体进行一系列稀释与恒定浓度抗原反应。3.方阵滴定法：为了保证抗原抗体在最适比例条件下进行反应医学教育|网搜集整理，达到最大沉淀反应的效果，就必须对抗原和抗体最佳工作浓度做出选择。将上述我们讲过的抗原稀释法和抗体稀释法 ...

五种免疫球蛋白都具抗原性、皆可提取及纯化，但如分解成片段（如Fab片段、Fc片段、轻链片段等）作为免疫原可制备出分辨力更高的特异性抗血清。制备方法有：1.温和条件下离析亚单位。如改变pH医学教育|网搜集整理；用盐酸胍或脲等强变性剂将亚单位分开；2.用还原法或氧化法解离二硫键；3.溴化氰裂解法。用溴化氰裂解蛋白质肽链；4.酶裂解法。如木瓜酶可将IgG裂解成2个Fab片段及1个Fc片段医学教育|网搜集整理；胃蛋白酶可将Ig ...

应用佐剂的目的是为了增强抗原对机体的免疫原性医学教育|网搜集整理，从而提高体液免疫应答和细胞免疫应答水平。1.增强免疫原性。2.增加抗体的滴度。3.引起或增强迟发型超敏反应。

特异性和交叉性：抗原抗体的特异性结合是指抗原分子上的抗原决定簇和抗体分子可变区结合的特异性，是由两者之间空间结构互补决定的。抗原与相应抗体的结合具有高度的特异性，主要依靠抗原分子上的抗原决定簇和抗体末端可变区的氨基酸排列和立体构型，只有抗原决定簇的立体构型和抗体分子的立体构型完全吻合，才能发生反应。如抗新城疫病毒的抗体只能与新城疫病毒结合医学教育|网搜集整理，而不能与其他病毒结合。但较大分子的蛋白质常含有多 ...

为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水或酒精等溶剂。分子量为389.4，最大吸收光波长为490～495nm，最大发射光波长520～530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。其主要优点是：①人眼对黄绿色较为敏感；②通常切片标本中的绿色荧光少于红色。（2）四乙基罗丹明（RB200）：为橘红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮。性质稳定，可长期保存。最大吸收光波长为570nm，最大发射光波长为595～600nm，呈橘红色荧光。（3）四甲基异硫氰酸罗 ...

应用佐剂的目的是为了增强抗原对机体的免疫原性，医学教育|网搜集整理从而提高体液免疫应答和细胞免疫应答水平。1.增强免疫原性。2.增加抗体的滴度。3.引起或增强迟发型超敏反应。

双向扩散试验：在琼脂内抗原和抗体各自向对方扩散，在最恰当的比例处形成抗原抗体沉淀线，根据沉淀线的位置、形状以及对比关系，可对抗原或抗体作出定性分析。双向扩散试验也分为试管法和平板法。1、试管法：在含有抗原的溶液和含有抗体琼脂中间医学教育|网搜集整理，加一层普通琼脂，让下层抗体和上层抗原向中间自由扩散，在抗原、抗体浓度最适时形成沉淀线。2、平板法：是在琼脂板上相距3～5mm打一对孔，或者梅花孔、双排孔、三角孔等。在相应孔 ...

单向扩散试验：琼脂内混入抗体，待测抗原从局部向琼脂内自由扩散，如抗原和相应抗体结合，则形成沉淀环。1、试管法：将一定量的抗体混入0.7%琼脂糖溶液中，注入小试管内，上层加抗原溶液使待测抗原在凝胶中自由扩散，在抗原抗体比例恰当位置形成沉淀环。2、平板法：是将抗体或抗血清混入0.9%琼脂糖内，未凝固前倾注成平板，然后在上打孔，将抗原加入孔中，放37℃让其自由扩散，24～48h后可见孔周围出现沉淀环，测定环的直径或面积计算标本 ...

T细胞表面标志检测：1.特异性抗原检测：用单克隆抗体检测T细胞表面抗原的方法有两大类：一类是用标记抗体染色，如免疫荧光法、酶免疫法、ABC法及免疫金银染色法；另一类用抗体致敏的红细胞作花环试验。2.特异性受体的检测原理：T细胞表面有特异性绵羊红细胞（E）受体医学教育|网搜集整理，当人的T细胞与绵羊红细胞悬液按一定比例混合后，置4℃至少2小时或过夜，T细胞表面的E受体可与绵羊红细胞结合形成玫瑰花样的花环，称为活性E（E ...

B细胞表面有CD19、CD20、CD21、CD22和CD29等分化抗原，其中有些系全部B细胞所共有医学教育|网搜集整理，而有些仅活化B细胞所特有，据此可用相应的CD系列单克隆抗体，通过间接荧光免疫法、酶免疫组化或ABC法加以检测。

雌二醇，常缩写做E2，是雌激素中生物活性最强的一种，在女性主要由卵巢分泌，它能促进和维持女性生殖器官、乳腺、长骨生长并对维持女性性征起重要作用。妊娠三个月后的妇女也可由胎盘大量产生医学教育|网搜集整理。在男性主要由肾上腺皮质和睾丸产生，对蛋白质、脂类、水电解质及钙磷代谢起着重要作用。正常妇女月经周期雌二醇参考值：卵泡期：早79.7±3.8pg/ml；晚144±10.3pg/ml。排卵期：214.1±27pg/ml。黄体期：早1 ...

散射比浊法是指一定波长的光沿水平轴照射，通过溶液使遇到抗原抗体复合物粒子，光线被粒子颗粒折射，发生偏转，光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物颗粒大小和多少密切相关。散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测抗原越多，形成的复合物也越多，散射光也越强。散射光的强度还与各种物理因素，如加入抗原或抗体的时间、光源的强弱和波长、测量角度等密切相关。（一）散射颗粒与散射光悬浮在反应溶液中的分子，无论是固体或胶体粒子都 ...

二级试剂的作用是信号扩增，选择是根据一抗的标记形式而决定的，对于无标记的一抗，可以选择对应一抗来源种属的标记二抗，或者更便宜的标记蛋白A（来自金黄葡萄球菌ProteinA可以高度亲和来自人，兔，豚鼠的IgG，医学教育|网搜集整理但对大鼠、山羊和鸡的IgG亲和力弱）。不过，二抗是更可靠的选择——除了要选择对应一抗的来源种属，也要根据你准备采用的检测方法选择合适的标记。

已发现，肿瘤细胞MHC～Ⅰ类分子表达缺陷或降低，同时可异常表达非经典MHC～Ⅰ类分子（如HLA～G、HLA～E等）。经典MHC～Ⅰ类分子缺失可致抗原提呈障碍，影响肿瘤特异性CTL活化和抗肿瘤效应；NK细胞表面KIR识别肿瘤细胞表面异常表达的非经典MHC～Ⅰ类分子医学教育|网搜集整理，从而启动抑制性信号，抑制NK细胞的胞毒作用。

肿瘤抗原可被某些非特异性成分（如唾液粘蛋白等）覆盖，或被封闭性因子（blockingfactor）“封闭”，从而干扰免疫细胞对肿瘤抗原的识别和杀伤。封闭因子可能是：①封闭抗体（blockingantibody）,其可与肿瘤细胞膜抗原结合，并封闭之；②可溶性肿瘤抗原，它可与淋巴细胞表面特异性抗原识别受体结合；③抗原～抗体复合物，它可与肿瘤细胞表面的肿瘤抗原结合医学教育|网搜集整理，又可通过其抗原成分封闭免疫细胞表面的抗原识 ...

近期发现，肿瘤细胞可分泌IL～10、TGF～β、VEGF和PGE2等细胞因子，可抑制DC前体细胞发育，阻止其向成熟DC分化；抑制DC（尤其肿瘤浸润部位DC）表达MHC～Ⅱ类分子和B7.在上述因子作用下医学教育|网搜集整理，DC能诱导TIL对肿瘤抗原的耐受。此外这些因子还下调其他免疫细胞功能，有利于肿瘤细胞逃逸免疫攻击。

B细胞表面有CD19、CD20、CD21、CD22和CD29等分化抗原，其中有些系全部B细胞所共有，而有些仅活化B细胞所特有，据此可用相应的CD系列单克隆抗体，通过间接荧光免疫法、酶免疫组化或ABC法加以检测。

较大网格的抗原抗体复合物容易从液相中沉淀出来，即沉淀素反应（precipitinreaction）；免疫复合物的沉积还与局部因素有关，在毛细血管分支多、血流缓慢或富含胶原组织的部位，容易发生免疫复合物沉积。如果免疫复合物在血流中形成医学教育网|搜集整理，可通过循环沉积在全身各处，例如在动脉弹力层、血管周围、肾小球基底膜和关节滑漠等部位；所引起的病理现象可统称为血清病。另外，高浓度的抗原抗体复合物可以在某一局部形成 ...