免疫学技术

相关专题 抗原实验技术及研究进展 抗体 1. 抗体的结构 抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白 (immunoglobulinIg)。Ig 分五类，即IgG、IgA 、IgM、IgD 和IgE。与免疫测定有关的Ig 主要为 IgG 和IgM。Ig 由两个轻链(L)和两个重链(H)的单体组成。Ig 的轻链是相同的，有κ(kappa) ...

相关专题 抗原实验技术及研究进展 (一)原理 当抗原遇到相应的抗体便形成抗原抗体复合物(Ag+Ab ↔Ag -Ab)，当用放射性同位素标记抗原再与相应的抗体结合便形成标记抗原和抗体复合物。即： Ag~DAb↔ Ag~FAb。 当标记抗原和未标记抗原一起加入相应的抗体时则两种抗原产生相互的竞争，而生成有标记抗原和抗体复合物以 ...

相关专题 抗原实验技术及研究进展 抗体是机体接受抗原刺激后产生的一种具有免疫特异性的球蛋白。在免疫学实践，为制备抗体常以抗原性物质(细菌、病毒、类毒素、血清及其他蛋白质)给动物注射。经过一定时间后，动物血清中可以产生大量的特异性抗体。这种含有特异性抗体的血清称为免疫血清。免疫血清不但对传染病的诊断、预防和治疗有重要意义，而且对器官移植，肿瘤以 ...

相关专题 抗原实验技术及研究进展 【原理】 双向扩散法是指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散而形成一定类型沉淀线的方法。沉淀线的特征与位置不仅取决于抗原抗体的特异性及相互间浓度比例，而且与其分子大小及扩散速度相关。当抗原抗体存在多种系统时，可呈现多条沉淀线以至交叉反应。 【材料】 生理盐水1%琼脂管(每管约4ml) 载玻片 打孔器及打孔 ...

相关专题 绿色荧光蛋白（GFP）是从水母中分离得出，作为分子生物学常用的荧光标记，可以实现活细胞内基因表达和定位，对细胞无毒害作用，细胞内的GFP检测比较简单（可利用荧光显微镜等检测），GFP在细胞生物学上具有广泛的应用前景。 免疫印迹(Western blotting 或 Immunoblotting)一般由凝胶电泳、样品的印迹和免疫学 ...

相关专题 免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。主要是利用荧光标记的抗体与待测抗原间反应进行抗原或者半抗原物质定位的技术。本文总结了免疫荧光技术常见的问题及解析。 1、问：近期要做免疫荧光双标，不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤及其注意事项? 参考见解： ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 酶联免疫斑点法ELISPOT最早可追溯到1963年的溶血空斑技术，到了20年后的1983年，该方法才被证实敏感度高且操作方便。之后才开始在检测上大显身手。那么，酶联免疫斑点法与其他传统技术相比，优势何在呢? ELISPOT的历史可以追溯到1963年Jerne等人创立的溶血空斑技术(hemo-lyti ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） CTL 提供唯一由实验室开发并精制的 ELISPOT 系统。 目前已经发展到第三代，称为Seriese 3系列。 根据客户的不同分析需要以及预算， CTL 设计了两种类型的分析仪，包括 Analyzer 和 ImmunoScan 两种产品。两者成像方式有所区别，分析软件均一样。为了提高 ELISPO ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 图注：ELISPOT 法在检测低频率产生细胞因子的细胞时具有独一无二的敏感性。将指定数目的能产生IFN- 的T细胞与一百万个抗原呈现细胞（Antigen Presenting Cells，APC）混合后，使用ELISPOT 法（上图）、胞质内染法（中图）和ELISA 法（下图）分别测量产生IFN- ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 为了实现ELISPOT的标准化，显色最好在恒温箱内进行，温度控制在25°C±5°C，显色25分钟为宜。另外，在37°C显色也是不错的一个方法，但要注意相应的缩短显色时间到12-18分钟，并且显色中勤检查。为了提高ELISPOT检测结果的可重复性，增加实验的可信度，必须建立一套标准化的实验操作规范。标 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） &NBSp; 一、简介ELISPOT技术 ELISPOT全名为Enzyme-linked Immunospot Assay，其技术原理与ELISA相似。其实验设计是在96微孔培养盘底部披覆PVDF薄膜，用来吸附特殊挑选、且无毒性(不含sodium azide、内毒素endotoxin)的单株抗体。静 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） &NBSp; 一、ELISPOT 技术简介 随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用 使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法(ELISA)检测体液中游离的细胞因子(CK)或抗体，但由于游离的循环抗体或 CK 的半哀期不同，使之在体液中不断的 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） ELISPOT基本操作过程： 一、包被96孔板： 用70％乙醇浸润96孔板中的PVDF膜30s 加入捕获抗体（PBS稀释），4℃过夜 倒空板中包被液，轻轻在纸上拍干，用PBS洗涤，禁用洗板机 加入100ul 2%的脱脂奶粉（或者BSA）室温孵育2小时，封闭板中空白位点 PBS洗涤1次。 （如果暂时不 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 试剂盒内容：PVDF96孔板，室温保存;0.1ml捕获抗体，4℃保存;0.1ml生物素标记检测抗体，4℃保存;15ul亲和素碱性磷酸酶标，4℃保存;0.25g牛血清白蛋白，4℃保存;0.25g脱脂乳，4℃保存;11ml底物缓冲液，4℃保存;11ml浓缩PBS(10X)，室温保存;11ml浓缩洗涤液( ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 廖爱华　VERA Rebmann ①　HANS Grosse2Wilde ①　(华中科技大学同济医学院生殖医学中心武汉430030) 　目的:建立一种新的检测人类HLA2 Ⅰ类抗体方法———酶联免疫斑点法( ELISpot) 。方法:以鼠B 细胞系HB95 为模型建立一系列特异性ELISpot 检 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 目前有什么类型的ELISPOT板?对使用各种类型的板有什么建议? ELISPOT板的主要生产商如：U-CyTech， Millipore， Nunc， BD， Whatman等。目前生产的ELISPOT板包括透明，不透明(白色)，PVDF膜等多种类型的板。 国外主要生产商所生产的各类型ELISPOT ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） ELISPOT 技术操作中应注意的问题: (1) 关于固相支持物(微量板) 的选择 目前有 96 孔聚乙烯板和硝酸纤维素膜微量板(NC) 两种 均为通过非共价键吸附抗原或抗体。在实验中 用NC做支持物时 背景颜色较深 不利于 对比 但用聚乙烯做支持物时 偶有斑点大小不 均或融合现象 这时使用琼脂糖固 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 1、目前有什么类型的ELISPOT板? ELISPOT板的主要生产商如：U-CyTech， Millipore， Nunc， BD， Whatman等。目前生产的ELISPOT板包括透明，不透明(白色)，PVDF膜等多种类型的板。 2、达科为公司对使用各种类型的板有什么建议? 国外主要生产商所生产的 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） 1、什么是ELISPOT检测? 酶联免疫斑点( enzyme-linked immunosorbent spot， ELISPOT) 检测技术是通过两种高亲和力的特异性抗细胞因子抗体来检测淋巴细胞分泌细胞因子情况的一种方法。 淋巴细胞在体内被抗原激活后，或者在体外培养中被培养液中含有的特异性抗原或刺 ...

相关专题 酶联免疫斑点法（ELISpot） ELISPOT的历史可以追溯到1963年Jerne等人创立的溶血空斑技术(hemo-lytic plaque forming cell assay ，HPF)，这项技术可用于检测并计数单个抗体形成细胞。随着单克隆抗体技术的成熟，1983年，Czerkinsky等采用此法检测脾细胞中分泌特异性抗体的细 ...