免疫学技术

相关专题 （一） 免疫荧光细胞化学技术 1941年，浣熊等建立了免疫荧光细胞化学技术，它的原理是根据抗原抗体反应的规律，把已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗原或抗体，然后以它作为探针来检测组织或细胞内的相应物质。应用的方法有直接法、间接法、夹心法和补体法等。在荧光显微镜下，根据其形成复合物所发的荧光，来确定判断检测物的来源、性质和部位。 ...

相关专题 近年来单克隆抗体已广泛应用于基础理论与临床应用研究［1］。如何制备质量好产量高的单克隆抗体是当前各有关实验室研究的重要问题，通常用于生产单克隆抗体的方法有两种：①利用纯系小鼠生产免疫腹水，该法的优点是产量和效价高，但纯化困难，价格昂贵，生产周期长；②杂交瘤细胞常规体外培养法，此法虽然产量不高效价低，但不含正常小鼠免疫球蛋白，较易纯化 ...

相关专题 （一）动物的选择 目前应用最广的是小白鼠和大白鼠，尤以小白鼠为好。就品系而言以Balb/c小白鼠应用最广，因为所有的小白鼠骨髓瘤系均从Balb/c小白鼠系诱导出来。Balb/c系小白鼠必须用纯系的，雌雄均可，以8~12周龄为宜。 大白鼠也可，能产生较多量的单克隆抗体。现在已经在小鼠杂交瘤的基础上，发展了小鼠－大鼠，小鼠－ ...

相关专题 （一）保存 当获得产生所需的单克隆抗体的杂交瘤细胞后，必须将一部分杂交瘤细胞保存，否则在连续传代的过程中，可能产生突变或染色体的漂移以至丧失固有特性或丢失产生抗体的特性。另外在长期的培养过程中，难免不发生污染以至于毁灭。所以必须冷藏保存一部分。保存方法如下：1．材料(1) 细胞：取对数生长期的细胞。(2) 10％二甲基亚砜保护液（二 ...

相关专题 ELISA免疫实验技术 1. ELISA 的原理 ELISA 的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与 ...

相关专题 实验原理凡能刺激机体产生抗体，并能与抗体发生特异性结合的物质称为抗原。物质所具有的这种特性称为抗原性（Antigenicity）。当机体受抗原刺激后，在体液中出现的一种能与相应抗原发生反应的球蛋白，称免疫球蛋白（Immunoglobulin Ig）。含有免疫球蛋白的血清称免疫血清。医学上常见的抗原物质，种类很多，如病原微生物及其代谢 ...

相关专题 用免疫磁珠做细胞分选(MACS)是高效简捷的免疫细胞及其它细胞的分离纯化方法。 原理是已包被一抗的磁珠与细胞表面相应分子特异性结合，或者已包被二抗(羊抗小鼠或羊抗大鼠)的磁珠与预先已与细胞表面分子特异结合的一抗结合。磁珠携带与之结合的细胞吸附于分离柱/试管上，实现阳性细胞分离或阴性细胞的分离。本节介绍超微磁珠间接标记、用分离柱阳性分 ...

相关专题 细胞介导的免疫反应（cell mediated immune CMI）在机体抗感染及抗肿瘤免疫、移植排斥反应和自身免疫病中发挥重要的作用。CMI的主要效应细胞之一为细胞毒T淋细胞（cytotoxic T lymphocyteCTL）。目前在医学基础与临床研究中重视CTL活性测定，将其作为了解机体细胞免疫功能和探索疾病机理的重要方法之 ...

相关专题 Protocal： 1.小鼠颈椎脱臼处死，75%乙醇浸泡3分钟，取出小鼠置于无菌纸上，左腹侧朝上；2.在小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁，可见红色长条状脾脏；3.在脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露脾脏，用镊子提起脾脏，眼科剪分离脾脏下面的结缔组织，取出脾脏。放入盛有5ml Hanks 液的培养皿中；4.A：梳刮法：脾脏可 ...

相关专题 仪器：酶联免疫仪 酶标板 752分光光度计 实验原理 本方法是一种固相抗原型酶联免疫法(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay ELISA)先将ABA蛋白质复合物与固相载体(聚苯乙烯微量滴定板)结合然后将待测的ABA(样品或标准品)和兔抗ABA抗体加入微量滴定板的孔中进行竞争反应接着弃去上清 ...

相关专题 贝氏柯克斯体(俗称Q热立克次体)是常见的人畜共患病Q热的病染原体。由于Q热临床表现多样，临床上常误诊为伤寒、上呼吸道感染、肺炎、肝炎等［1］，因而简便而实用的诊断和流行病学调查方法的建立，对Q热病的诊、防、治均有重要意义。我们建立的免疫金法检测Q热立克次体，初步证明快速而实用，现将结果报告如下。 　　一、材料与方法　　1.Q热立克次 ...

相关专题 （一）原理 IgG是免疫球蛋白（Immunoglobulin，简称IgG）的主要成分之一，分子量约为15万~16万，沉降生活费数约为7s。IgG是动物和人体血浆的重要成分之一。血浆蛋白质的成分多达70余种，要从血浆中分离出IgG，首先要进行尽可能除去其他蛋白质成分的粗分离程序，使IgG在样品中比例大为增高，然后再纯化而获得IgG。 ...

相关专题 原理 混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时，B细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上，而多数T细胞则通过尼龙毛柱，这是获得富含T细胞群的有效方法。材料及试剂1．尼龙毛（Femwall LaboratoriesLP－1 Leukoqak leukocyte Filters）。2．烧杯、铝箔、漏斗、一次性手套等。3．装 ...

相关专题 1．酶标抗体的活性鉴定 一般以琼脂扩散和免疫电泳进行鉴定。使酶标抗体和相应的抗原(抗原浓度为1mg/ml)产生沉淀线洗涤后于底物溶液中显色显色后用生理盐水漂洗沉淀线不褪色说明酶和抗体都具有活性。良好的酶标结合物琼脂扩散滴度一般应在1：16以上。2．酶结合物的定量测定 包括酶量、IgG含量、酶与IgG克分子比值以及结合率的测定。酶量( ...

相关专题 免疫酶技术是把抗原抗体的免疫学反应与酶的高效催化作用原理有机地结合起来，即把具有催化活性的酶类通过化学的方法和抗体(或抗原)结合起来成为酶标记物。这种酶标记物同时具有免疫学反应性和化学反应性，将其与待测的抗原或抗体结合，通过酶的活性降解底物呈现出颜色反应从而显示出该免疫学反应的存在。酶的活性与底物以及与显色反应呈一定的比例关系。显色 ...

相关专题 1．纯度高、含杂蛋白少用IgG优于血清抗体，用Fab优于IgG。2．特异性强 即抗IgG与IgG在免疫电泳上只有一条沉淀线与IgG的全血清也只有一条沉淀线这才算是特异性的单价抗体。3．效价高 一般琼脂扩散鉴定为1︰64以上才算合格。 ...

相关专题 交联法交联法通常用的交联剂是戊二醛，戊二醛商品大多为25%的水溶液，利用戊二醛分子上对称的两个醛基，分别与酶和蛋白质分子中游离的氨基、酚基等以共价键结合而进行标记。标记时应尽量采用新鲜纯品，当戌二醛的OD235nm/OD280nm＜3时，即为好的交联剂。戊二醛交联法又分为一步法和二步法。⑴ 一步法：即把酶、戊二醛和抗体一起加入进行交 ...

相关专题 用检测抗体的方法从杂交细胞中筛选出生产指定抗体的杂交株是很重要的。检测抗体的方法很多，从沉淀反应到放射免疫测定。由于细胞培养液中的抗体浓度通常是很低的，而且传统的检测方法多是以多价抗原与多克隆抗血清相反应。杂交瘤产生的抗体则是单克隆的，所以并不是每项方法都能适用。一定要选择敏感的、快速的、一次又能检测多份样品的方法。常用的检测方法如 ...

相关专题 基本原理 由于SPA能与IgG的Fc片段非特异性结合，同时不影响Fab片段的活性所以当带有SPA的金黄色葡萄球菌与抗体混合，再加入适量的相应抗原，结果会使出现的凝集反应更易于观察。它对颗粒性抗原和可溶性抗原抗体反应都有协同凝集作用。此方法简便、快速、便于推广应用。材料与试剂1．金黄色葡萄球菌(1) SPA阳性株：NO.1800株(国 ...

相关专题 金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal Protein A、简称SPA)是细胞壁抗原的主要成分，几乎90%以上的菌株均含有这种成分，但不同的菌株含量差别十分悬殊。SPA占整个细胞壁蛋白成分的6.7%，通过胞壁肽聚糖以共价键与之结合。其它葡萄球菌如表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌不含SPA。SPA的理化性质 SPA是一种蛋白质由 ...