免疫学技术

一、原理双向琼脂扩散实验，是将抗原和相应抗体分别加入同一凝胶板内的相邻小孔中。两者相互扩散当扩散到他们的浓度比例合适的部位相遇时就会形成抗原抗体复合物的沉淀。二、操作步骤1.取一块干净的玻璃板，用少量75%乙醇冲洗，晾干后置于水平台，将1%琼脂糖融化，56℃水浴中保温。2.将琼脂糖铺于玻璃板上，厚度约为1�。3.打孔，孔距为4�，4.将抗血清按二倍稀释法稀释成1:2 1:4 1:8 1:16 1: ...

（一）原理 亲和层析是一种吸附层析，抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原（或抗体）固相化后，就可以使存在液相中的相应抗体（或抗原）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到分离提纯的目的。 此法具有高效、快速、简便等优点。 （二）载体的基本要求和选择 理想的载体应具有下列基本条件：①不溶于水，但高度亲水；②惰性物质，非 ...

培养基（1）斜面和分离培养基(g／L)：可溶性淀粉10，(NH4)2SO4 2．5，NaC1 0．6，MgSO ・7H2O 1．2，K2HPO4・3H2O 3．0，CaCO3 3．0，琼脂粉 20，pH 7．2～7．4，用蒸馏水配制。种子培养基(g／L)：玉米淀粉25，花生饼粉1O，黄豆饼粉8．0，酵母粉5．0，酵母膏5．0，玉米浆4．0，CoCl2・6H2O 0．003，淀粉酶0．0025，pH ...

1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备 抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。抗菌药物直接购自厂商或相关机构。所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。用分析天平精确称取抗生素粉剂 ...

丝状真菌地鉴定主要根据形态特征。形态特征包括群体形态和个体形态。1 群体形态群体形态即菌落的形态。观察菌落形态时多采用固定的培养基，将固体培养基制成平板，以点植法接种，即用接种针尖沾取少量孢子点植在平板上适当的位置，例如中心，或三角形的三点。然后于25－28℃培养一定时间（如2、4、7、10天）进行观察，观察时可用肉眼或借助放大镜、低倍镜、解剖镜等。观察的要点一般包括下列几项：（1） ...

最重要的是选择好一抗、二抗或者还有三抗，注意抗体的特异性、效价和交叉反应，最好用单抗。其他常用试剂有：1、0.01M(pH7.4)的磷酸盐缓冲生理盐水（PBS），稀释抗体和洗片子用；2、清洁液、纯水，洗玻片用3、多聚赖氨酸处理载玻片，防止脱片4、固定液：4%多聚甲醛或冷丙酮等；5、15%~30%蔗糖，组织脱水用；6、梯度酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋，或者OCT包埋做冰冻切片；7、抗原修复液：枸橼 ...

许多实验室研究人员习惯将组织蜡块切片后长期保存在室温条件下而切片后的组织在室温下长期保存抗原易损失。研究发现切片在室温下保存3个月以上免疫组化染色结果会出现减弱或阴性故进行了新、旧切片保存时间对照实验。选择11种不同组织蜡块每例连续切10片共110片常温空气中放置1个月、3个月、6个月、1年再与新切片进行对照实验。实验结果表明蜡块切片后室温保存3个月抗原对多数抗体的敏感性下降50%部分切片丢失更多 ...

Fix cells in 2% formaldehyde in PBS/pH 7.4 for 15 min. at 20oC. 2% formaldehyde is made up fresh prior to use by dissolving the appropriate amount of EM grade paraformaldehyde (Prill form from Electro ...

抗原物质

ELISA是一种免疫测定。免疫测定（immunoassay，IA）是应用免疫学技术测定标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。1.1　抗原　　抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。抗原进入机体后，可刺激机体产生抗体和引起细胞免疫。在免疫测定中，抗原是指能与抗体结合的物质。能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于5000的蛋白质。小分子化合物在与大分子蛋白质结 ...

ELISA Inhibition Assay Sensitize a 96-well microtiter plate with purified antigen. Prepare a solution of the purified antigen of interest in phosphate buffer (see recipe below) such that a concentrati ...

DAY 1 1. Coat Nunc immuno-module plates overnight in usual manner. 2. Set up competition assay between antibody and competing substance :- Prepare a 1:2 serial dilution of the competitive substance fr ...

The ELISA protocols for detection of the antibody binding to an antigen-coated microtitre plate are standard laboratory techniques and will not be described here. We will just mention that most recomb ...

Springer Lab，The CBR Institute for Biomedical Research Inc. Department of Pathology Harvard Medical School http://cbr.med.harvard.edu/investigators/springer/lab/protocols/melissa_chemotaxis.html Purpo ...

一、类病毒� 20 世纪 70 年代初期，美国学者 Diener 及其同事在研究马铃薯纺锤块茎病病原时，观察到病原无病毒颗粒和抗原性、对酚等有机溶剂不敏感、耐热 (70 ℃ ~75 ℃ ) 、对高速离心稳定 ( 说明其低分子量 ) 、对 RNA 酶敏感等特点。所有这些特点表明病原并不是病毒，而是一种游离的小分子 RNA 。从而提出了一个新的概念―类病毒 (Viroid) 。在这个概念提出之前，人 ...

1.应该在细胞状态最好的时候进行病毒接种或复苏;2.接种前头天进行细胞传代细胞数量应以能让细胞在第二天内达到覆盖满90%的培养瓶为准并且一定要在细胞传代后48h内接种病毒;3.第二天细胞长为单层且状态较好时开始接种病毒;4.先移弃培养瓶中的生长液用undefinedPBS轻轻洗细胞面3次最后用移液管吸干净培养瓶中残留的undefinedPBS.为保持培养瓶中pH环境的稳定及减少undefinedPBS对细胞的刺激作用可再用生长液轻轻洗细胞 ...

用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片： 1）抗原热修复 可根据实验室的具体条件，选用微波炉抗原修复、高压锅抗原修复或水浴高温抗原修复。抗原热修复可选用各种缓冲液，如TBS、PBS、重金属盐溶液等，但实验证明，以0.01M枸橼酸盐缓冲液（pH6.0）效果最好。请选用我公司提供的ZLI-9064 枸橼酸盐缓冲液（粉剂）配制，取该粉剂一包溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，其pH值在6.0 ± 0.1，如因 ...

酶联免疫检测技术的应用 真菌毒素的检测：黄曲霉毒素 B 1 、 M 1 以及 T-2 毒素，脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素 DON ），二乙酰草镰刀菌烯醇（ DAS ），玉米赤霉烯酮，赫曲霉毒素 A （ OA ）。 农药的检测：主要有除草剂与杀虫剂两大类，例如杀暝松（ FN ）、甲氟磷酸异已酶（ SOMAN ）、草不绿（ Alachor ）、西维因（ Carbaryl ）、多菌灵及克菌丹（ Capt ...

硝酸纤维素膜又称为NC膜 在胶体金试纸中用做C/T线的承载体同时也是免疫反应的发生处.所以NC膜成为该试验中最重要的耗材而由于其属于非标准器件基本上每个项目开始阶段都会遇到如何选择合适的NC膜的问题.同时也存在是否要对NC膜进行后期处理及如何处理的讨论. 一. NC膜的生产原理这个虽然看上去属于生产厂商的事情但是GMP有个观点是强调对过程的控制才会有好的结果.那么只有了解NC膜的大致生产过程和基本 ...

一、骨髓移植概述骨髓移植（bone marrow transplantation BMT）的实质是造血干细胞移植，干细胞具有能复制并分化为造血和免疫活性细胞的能力。根据干细胞的来源不同可分为自体、同基因（syngeneic）和异基因（allogeneic）BMT。同基因骨髓移植是指同卵孪生同胞间的移植，由于供、受者在遗传学上相同，故与自体骨髓移植一样，不存在免疫不相容的问题。异基因的骨髓移植（ ...