生物化学技术

问：最近做氨基酸含量得测定，我买的标准品是sigma得，是粉剂，怎么溶解，请大家帮帮忙啊？谢谢！ 答：日立氨基酸分析仪，标样本身是溶液，用0.02NHCL稀释即可。 答：溶解方法很多吧，用HPLC测，有用甲醇溶的，有用双蒸水溶的，有用流动相溶的，看自己怎么测吧。但是水溶会很慢。尤其是谷氨酸，谷氨酸盐就不是了。 ...

问：新购的非必需氨基酸sigma，瓶子上注明为100×，文献上说需要添加量为1%。这里的1%如果换算为原液的量是不是就变成万分之一。另外有些文献上说0.01mM/L又是多少呢，怎么换算？ 答：是应该就是这个意思（１００ml培养液添加１ml），刚才是我理解错了。至于0.01mM/L，这个数字出现在另外一个文献上。也许１００ml培养液添加１ml非必需氨基酸后，非必需氨基酸的浓度就刚好是0. ...

问：1. Name: Boc-Glu(OBzl)-OH 2 Name: Boc-Glu(OcHex)-OH 3 Name: Boc-Glu(Ofm)-OH 请问各位大侠：上述保护氨基酸脱去羧基保护基但又不影响氨基保护基的反应条件。详细结构请看附件，谢谢！ 答：都是很常规的脱保护反应Boc对大部分质子酸路易斯酸敏感，所以要选择非酸性条件： 1、Pd－C/H2rt. Ref:.Org. ...

问：我最近用红系裂解物翻译系统表达一种32个氨基酸的短肽，因为实验条件有限，不能用35S标记的蛋氨酸进行合成，所以不能用放射自显影进行检测，我想问问能否用蛋白电泳的方法检测，我查文献看到有一种tricine gradient gel，不知道可不可以检测这种短肽？有没有人知道这种胶的配方？参考这个文献吧。 答：我分析小于10kd 的肽，就是参考的这一个。效果吗，很好呀！ 答：体外翻译系 ...

问：在高等生物中，尤其是人体内，所含有的蛋白质均由L－型氨基酸构成，但是，据研究表明，随着人体的衰老，机体内一些氨基酸会自发转变为D－型。这种立体议购现象的出现是否是机体开始衰老的一个标志，能否通过降低异构化过程来推迟机体衰老？欢迎大家讨论。 答：有意思，很有可能构型的确蕴涵着丰富的生物学信息。但这个过程能用什么方法才能控制呢？很有意思的命题！ 问：怎样识别和分离体内旋光性不同的氨基酸呢？目前来看 ...

问：哪位做过不进行衍生化反应直接测定氨基酸的试验，最好是反相色谱测定非芳香族氨基酸？ 答：可以作到用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.01mol/L磷酸水溶液（pH=2.5）为流动相B，采用梯度洗脱，在25分钟内流动相A由35%增加到70%，并在27分钟时降为35%的A，用35% A平衡6分钟，检测波长为210nm，你可以试一下！ ...

问：小弟最近用20%盐酸水解某酯类中间体得到如下氨基酸，反应完后用NaOH中和至等电点附近，看到有些灰白色沉淀析出，静置过滤后，滤纸上却只留下了深褐色泥状固体，特别像巧克力化了那种样子，滤液还是呈红棕色，而且这东西(滤饼)在有机溶剂中几乎都不溶，很难重结晶，又来了一次酸溶碱沉还是这样的东西，请问高人如何将这种氨基酸提取出来并纯化？（注：我用滤饼和滤液分别点板，滤饼有三个点，说明肯定有杂质，而滤液反 ...

问：我实验中需要确定多肽（8肽）中的某个氨基酸的作用，把该氨基酸用其它氨基酸置换。请教“进行氨基酸置换”时有什么要求？如何选择哪个氨基酸可用来做置换前者？选择时有什么原则或方法？ 答：1. 一般地，在蛋白中研究某部分（domain）氨基酸的重要性，通常采取Ala scanning的办法。因为Ala的侧链最简单，如果发生了什么效应可以减少一些其它因素的可能。 但这种情况，基 ...

问：最近在做酵母双杂交，有些营养缺陷培养基要单独加氨基酸，不知道这些氨基酸配成母液以后能不能高温高压灭菌啊？请各位高手指教，谢谢！ 答：一般来说，在配制培养基过程中，在高温高压过程中易配破坏的成分如葡萄糖，氨基酸，抗生素等，多采用0.22um的滤膜过滤除菌。所以，建议楼主最好，过滤除菌后单独加入。 问：基酸不能高压灭菌吗?？可是在测定蛋白质中氨基酸含量的时候，酸解的条件可是110℃浓盐酸的条件下 ...

问：小分子水溶性γ位的氨基酸酯如何水解？如何显色？如何析出固体？谢谢！ 答：是谷氨酸吗？1）甲醇/NaOH水溶液，或THF/NaOH水溶液皂化。2）水合茚三酮显色。3）等电点水/甲醇重结晶。 答：甲醇溶解，加入过量1N NaOH搅拌，监测原料是否消失。茚三酮显色。反应完后PH调至中性，浓缩至干，水|甲重结晶。 答：当然会啊，所以要注意PH值。一般顶多用1N的NaOH，而且还要保持在冰浴 ...

建议：开辟一系列植化讨论专题，欢迎大家踊跃发言。大家可以随意提出自己得看法和意见：大到植化的研究进展，小到实验研究技术。 Topic大致包括： 1、天然药用植物的提取和分离； 2、天然化合物的结构鉴定和解析； 3、天然化合物的结构修饰和衍生化处理； 4、天然化合物的药理活性； 5、天然药用植物的研究进展； 6、新方法新技术的研究及应用进展； 7、天然药用植物化学在中药现代化中的地位 ...

问：我有一蛋白想做氨基酸组分分析，想用6MHCl处理成单氨基酸后用高效液像色谱议做，请问具体如何做，谢谢？ 答：这个问题比较大，呵呵，以前做过一点，和楼主讨论一下吧。 首先，氨基酸组成分析工作量不小，而且要求操作者有较高的操作水平，如果你只是为了检测一下的话，不如花点钱寄出去测测，自己做有时徒劳无功啊。液相色谱是可以做，但是检测机构都有专门的氨基酸分析仪（虽然核心也是一个HPLC）。 如果楼主坚持 ...

问：我最近在做AA，3篇文献都说精AA去峰时间在苏AA的前面，可是我和同事每人做了两次，都发现刚刚相反苏AA先，虽然去峰时间很接近，我用的是WATERS AQC-Tag法测定的，不知道你们可做过？ 答：用WATERS AQC-TagF方法测定氨基酸，我们经常做，精AA出峰时间一直在苏AA的前面。你可以看一下我的标准氨基酸定位色谱图。 ...

问：最近本人做一系列的氨基酸缩合反应，但有一类特定的羧集和氨基就是不反应，试了很多种方法，如EDCI，CDI，PyBOP等，由于羧基化合物中有一个未保护的咪唑环，也曾尝试过用二氯亚砜做酰氯，好象也不行，不知道各位大侠有没有更好的高招，或者是否用某种保基将咪唑环保护起来可行，请赐教！要参与反应的胺是一个脂肪族伯胺，只是位阻有点大，但是那个胺也并非不能缩合，用它和其他的不带咪唑环的酸反应，很好进行，用 ...

问：我们用的是岛津LC－2010CHT的高效液相色谱仪，采用waters的AccQ-Tag法测定17种氨基酸，但是每个进样瓶的第一针进样都偏低，差不多要低到一半，很郁闷，想了很多办法都没解决，检其它样品没有这种情况出现过。请问有没有和我们遇到相同的事情？ 答：我测血浆样品时遇到过你说的问题，原因是开始的时候柱子中的基质没有平衡。解决的办法是在实验开始的时候进几针空白血浆样品（我们做的是液质联用， ...

问：在薄层板上喷茚三酮试剂，吹干后110度高温显色5分钟，结果有明显的紫红色的斑点，但在空气中久置会慢慢褪色，几个小时后只能看到很弱的一点点小的紫红色了，请问这正常吗？ 我有同学做过氨基酸的薄层分析，他说在空气中时间越长显色越明显，而我的是相反的，是不是根本不是a-氨基的反应，而是不相干物质的干扰？ 答：还有就是我的样品需要在较高的温度下才显色，而对照的氨基酸则很快就显色了，这样是不是就代表我的样 ...

问：请教我现在测定氨基酸（只是打算测定其中的天门冬氨酸和谷氨酸以及丙氨酸三种氨基酸）：现用岛津液相，LC-10AT的泵和SPD-10A的检测器，色谱柱ods C18柱(250 X 4．6mm)，检测波长254nm，柱温40cc，流速lmL·min～，流动相A：0．1mol·L- ，醋酸钠溶液(pH6．5)一乙腈(93：7)，流动相B：乙腈一水(8o：20)，并按下述进行 ...

问：人体内是否含有D-氨基酸？ 答：人体很多组织和体液中都含有D-氨基酸。分为结合和游离两类。结合D氨基酸如一些长寿蛋白，牙齿珐琅质，晶状体等。游离D氨基酸比如胎儿血液中和羊水中。 人体内的D氨基酸有两个来源：体内和体外。体内包括人体胃、肠道细菌中所含的D氨基酸和消旋作用形成。体外来源主要是服用一些药物和日常食物中含有的DAA。 ...

问：本人正在做 L-丙氨酸苄酯的合成反应。请各位给点建议？具体方法或文献更好！ 答：我只做过氨基保护了的、羧基游离的氨基酸。 1、Cs2CO3代替Na2CO3 2、PhCH2Cl一定要用重蒸过的。用PhCH2Br更好。 3、反应过程保持碱性（9-10）。 答：很简单，L-丙氨酸8.9(100mmol)tosl.ho219.9（105mmol)苄醇100ML 苯或甲苯50ML 回流2小时分水到理能 ...

问：请教一下诸位学习生化的高手：1. 必需氨基酸的一个主要特点是不是人体不能合成。2. 必需氨基酸包括那几种。我查了一下网上有7中到10种的不同说法。记得读书时书上是8种，这是怎么回事？3. 儿童的必需氨基酸与成人是否相同？有人说儿童的会多一些，如精氨酸对儿童就是必需氨基酸。谢谢了先。 答：应该是8种，定义：必需氨基酸是人体必不可少，而机体内又不有合成的，必须从食行中补充的氨基酸，称必需氨基酸。 ...