生物化学技术

是通过适当保护的亚磷酰胺核苷的3′端磷酸基团与5′末端羟基的酯化每次产生一个碱基而合成的，5′端羟基是通过一个接头连接到固相载体上。合成是从3′到5′的方向合成，而酶促反应是以相反的方向进行的。每一轮偶联反应包括四种反应：轻度碱水解、轻度酸水解、亲核取代和 氧化还原 替换。在偶联过程每一阶段反应后，未参与反应的化学物被洗掉。 ...

问：吴教授为什么不合成表面抗原、核心抗原表位（T.B.Th1)的氨基酸全序列？而只合成这些表位的部分氨基酸序列，再将他们组合在一起？如：核心抗原上第18-27氨基酸序列我们都知道是HbcAg的CTL表位，那141-151，117-215。。。都是什么？ 答：HBV核心C基因在不同亚型间最为保守 在它编码的180多个氨基酸中，CTL表位多位于第150位氨基酸（amino acid AA）以前，其中1 ...

1963年，R.B.Merrifield［1］创立了将氨基酸的C末端固定在不溶性树脂上，然后在此树脂上依次缩合氨基酸，延长肽链、合成蛋白质的固相合成法，在固相法中，每步反应后只需简单地洗涤树脂，便可达到纯化目的.克服了经典液相合成法中的每一步产物都需纯化的困难，为自动化合成肽奠定了基础.为此，Merrifield获得1984年诺贝尔化学奖。 今天，固相法得到了很大发展.除了Merrifield所建 ...

在肽合成的技术方面取得了突破性进展的是R.Bruce Merrifield，他设计了一种肽的合成途径并定名为固相合成途径。由于R.Bruce Merrifield在肽合成方面的贡献，1984年获得了诺贝尔奖。下图给出了肽固相合成途径的简单过程（合成一个二肽的过程）。 氯甲基聚苯乙烯树脂作为不溶性的固相载体，首先将一个氨基被封闭基团（图中的X）保护的氨基酸共价连接在固相载体上。在三氟乙酸的作用下，脱 ...

合成的理论来讲主要就是把氨基酸按一定的顺序排列起来，利用氨基和羧基的脱水形成肽键，进而形成我们所需要的结构。为了避免副反应的进行，我们需要事先把不需反应的氨基进行保护，使它们在合成过程中不会参与反应，从而避免副产物的生成。否则，一般羧基活化方法使反应活性提高的同时总伴随着反应选择性下降;反之，选择性虽然改善，但反应活性则又不够。 因此，肽合成的根本问题是氨基的保护问题。合成多肽可以通过溶液相和固相 ...

基于将单个N-α保护氨基酸反复加到生长的氨基成份上，合成一步步地进行， 通常从合成链的C端氨基酸开始，接着的单个氨基酸的连接通过用DCC，混合炭酐， 或N-carboxy酐方法实现。Carbodiimide方法包括用DCC做连接剂连接N-和C-保护氨基酸。重要的是， 这种连接试剂促接N保护氨基酸自己炭基和C保护氨基酸自由氨基间的缩水，形成肽链， 同时产出N，N?/FONT>-dy ...

多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序一般从C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成。固相合成法，大大的减轻了每步产品提纯的难度。为了防止副反应的发生，参加反应的氨基酸的侧链都是保护的。羧基端是游离的，并且在反应之前必须活化。固相合成方法有两种，即Fmoc和tBoc。由于Fmoc比tBoc存在很多优势，现在大多采用Fmoc法合成。 具体合成由下列几个循环组成： 1. 去保护：Fmoc保护的柱 ...

本实验中由苯胺和醋酸经高温脱水而生成酰胺，由于反应温度高，会引起反应原料苯胺的氧化，所以此反应中加入还原剂金属锌以抑制苯胺的高温氧化。 本实验中产品是经水结晶而纯化的，结晶是最简单、有效、经济的纯化手段，结晶时常有少量絮状物不溶，导致加入过多溶剂形成不饱和溶液，使结晶收率低或不结晶。为此结晶溶液需过滤除去絮状不溶物杂质，对于遇冷结晶的溶液需保温过滤。为了得到好的结晶，常需保温结晶，结晶时间较长。 ...

问：现在有没有比较好的方法标记内毒素LPS的，或直接标记好的？ 答：可以用FITC标记的，附件是文献。 ...

（1）10 ×缺口平移缓冲液：200mmol/l Tris-HCl，pH7.4含50mmol/L MgCl2；100mmol/Lβ-巯基乙醇、1mg/ml BSA。　　（2）缺口平移反应终止液：200mmol/L NaCl；10mmol/l Tris-HCl，pH7.4；11mmol/L EDTA； 0.5% SDS。　　（3）DNaseⅠ:干粉状DNaseⅠ(2000～30 ...

1．标记DNA探针 每次标准的反应可标记10ng至3线性的DNA，也可标记更大量的DNA，但所有的成分和体积要相应增加。 （1）DNA探针热变性，煮沸10min，迅速冷却于冰/乙醇中5min以上，待用。 （2）取Eppendorf管（1.5ml）置于冰上，加下列及试剂： 新鲜变性的DNA 1-3 六聚核苷酸混合物 2（管5） dNTP标记用混合底物 2（管6） 加无菌重蒸水至 19 D ...

非放射性物质标记核酸探针的方法通常是通过在核酸分子中引入诸如半抗原、生物素等惰性小分子。这些小分子一般通过连接到dUTP等核苷三磷酸上。这种经修饰的核苷三磷酸再通过酶促反应掺入到探针中，例如用于随机引物法标记长链探针或是通过末端转移酶标记寡核苷酸的3′端。 杂交后用与一种酶相连接的抗体（或者如果是生物素，则用链霉抗生物素蛋白streptavidin）来检测，这些酶如碱性磷酸酶或辣根过氧 ...

Introduction Luciferase can be used as a reporter gene to measure the activity of promoters and/or the transfection efficiency. Aims You will be provided with the HEK293/COS cells that you transfected ...

问：有没有做辣根过氧化物标记的朋友啊，能不能把你们的步骤发给我。本人开始做，发现很多人用的浓度都不一样。 答：1.1 试剂准备 1) 10mg/mL HRP 2) 0.06mol/L NaIO4 3) 0.16mol/L乙二醇 4) 碳酸盐缓冲液(Na2CO3 0.7952g NaHCO3 1.4702g 溶于500mL蒸馏水中，调pH值到9.5) 5) 2.5mg/mL NaBH4 6) 0.0 ...

问：我想知道，用什么方法进行酶标记可以非常有效呐？过碘酸钠标记怎么样？ 答：第一节 间接法测抗体 基本原理 将特异性抗原包被在固相载体上，形成固相抗原，加入待检标本（含相应抗体），其中抗体与固相抗原形成抗原-抗体复合物，再加入酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体，亦称二抗），与上述抗原-抗体复合物结合。此时加入底物，复合物上的酶则催化底物而显色（反应过程见图1－1）。 试剂与设备 纯化抗原。 ...

当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时，主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合，形成FITC-蛋白质结合物，即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基，一般最多能结合15～20个，一个IgG分子可结合2～8个分子的FITC，其反应式如下 FITC-N=C=S + N-H2-蛋白质 → ...

摘要 分子信标技术是一种基于荧光共振能量转移现象（FRET）和碱基互补配对原则建立起来的一种分析技术。分子信标作为一种荧光标记的分子探针，具有极强的特异性和较高的灵敏度，目前已经成为基础医学和生物学的重要研究工具。本文着重介绍了分子信标的基本原理及其应用，并对其近年来的研究进展做以简单介绍。 1 引言 在基因时代和蛋白质时代，人们迫切需要一种具有高灵敏度和高亲和力的生物分子探针，用以进行定性和定量 ...

1996年Tyagi和Kramer首次建立了分子信标探针，最初目的是能在液相中定量测定靶标的量。分子信标技术以其操作简单、灵敏度高、特异性强、可对核酸进行实时定量测定、甚至可以用于活体分析等特点不仅在生物学研究中有着广泛的应用，而且在疾病基因检测与诊断等生物医学基础和临床研究中也将充当重要的角色。近来，人们通过改变经典分子信标的结构，设计出许多新型的分子信标，如用ssDNA链做环、用RNA-DNA ...

Tyagi和Krammer于1996年设计了一种可以特异性识别核酸序列的新型荧光探针这种荧光探针通过与核酸靶分子进行杂交后发生构象的变化而发出荧光他们将其命名为分子信标(Molecular Beacon)。 分子信标具有背景信号低灵敏度高、特异识别性强、操作简单，不必与未反应的探针分离即可实时检测，可用于活体分析等优点。在生物化学分析，生物医学研究和临床诊断中有着广泛的应用价值。 分子信标的结构 ...

探针标记方法有： 1、DNA的缺口平移法。缺口平移是一种快速、简便、成本相对较低以及生产高比活性均一标记DNA的方法。该技术可以制备序列特异的探针。当使用重组质粒探针时，虽然任何形式的双链DNA都可以进行缺口平移标记。但通常使用限制性核酸内切酶将插入片段进行酶切和凝胶电泳纯化后再进行缺口平移标记。此外，用这种探针进行杂交可产生较低的背景信号。 2、DNA的随机引物法。这种方法是使用寡核苷酸引物和大 ...