生物化学技术

1.逆转录PCR(RT-PCR)用来扩增RNA的方法。2.竞争逆转录PCR(competitive reverse transcription-polymerase chain rection C-RT-PCR)低丰度RNA定量的好方法。3.多重PCR（multiples PCR）在同一PCR体系中加入多对引物可用于基天长度很长，发生多处缺失的检测。扩增同一模板的几个区域。4.多种PCR可同时加入 ...

DNA的碱基序列决定着基因的特性，DNA序列分析（测序，sequencing）是分子生物学重要的基本技术。无论从基因库中筛选的癌基因或经PCR法扩增的基因，最终均需进行核酸序列分析，可藉以了解基因的精细结构，获得其限制性内切酶图谱，分析基因的突变及对功能的影响，帮助人工俣成基因、设计引物，以及研究肿瘤的分子发病机制等。测序是在高分辨率变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的基础上建立起来的。目前最常用的方法有 ...

直接注射法 将含有DNA的溶液直接注射到肌肉，以引起邻近的细胞摄入DNA燕进行表达，在肌细胞中，基因表达可持续数月。磷酸钙共沉淀法 将氯化钙、DNA和磷酸盐缓冲液混合，形成磷酸钙微沉淀 ，附着于细胞膜并经过细胞内吞作用耐是入细胞质。该方法的转化效率通常很低。脂质体染法 指质体能在体内或体外提供运载外源性遗传物质进入细胞的载体。脂质体介导的基因转移的最大优势在于能在活体内应用。受体介导的基因转移 依 ...

PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象，一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构，这种二级结构依赖于其碱基组成，即使一个碱基的不同，也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率。由于该法简单快速，因而被广泛用于未知基因突变的检测。用PCR-SSCP法检测小于200bp的PC ...

液相杂交（solution hbridization）是指使变性的待测核酸单链与放射笥核素标记的已知的酸单链（探针）在溶液中保温，使之形成杂交复合物。反应结束后，用羟磷灰石法或酶解法将未被杂交的单链和杂交双链分开，然后结膈后在杂妆分子中的探针量，就可推算出被测的核酸量。

CCM为在Maxam-Gilbert测序法的基础上发展的一项检测突变的技术，其检测突变的准确性可与DNA测序相仿。其基本原理为将待测含DNA片段与相应的野生型DNA片段或DNA和RNA片段混俣变性杂交，在异源杂合的双链核酸分子中，错配的C能被羟胺或哌啶切割，错配的T能被四氧化饿切割，经变性凝胶电泳即可确定是否存在突变。该法检出率很高，也是检片段最长的方法，已有报功检测了1.7kb片段，如果同时对正 ...

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摘要 对比快速溶剂萃取PSE (SpeedExtractor E-914)和传统索氏萃取方法，研究表明快速溶剂萃取PSE (SpeedExtractor E-914)能够高效地萃取测定鱼中的17个二噁英PCDD/Fs， 12个类二噁英和6个非类二噁英多氯联苯。脂肪含量不同的鱼样品（鳗鱼和鲑鳟鱼）中分离PCDD/Fs和PCBs。经过多步色谱纯化后，萃取物通过HRGC/HRMS分析。快速溶剂萃取PS ...

试剂盒 – 采用最佳分析方法，领先业界美国Oxford Biomedical Research（OBR）公司成立29年来，主要研发、生产和销售识别和分析氧化应激和慢性炎症生物标志物的产品，领先采用最佳分析方法，产品质量高。OBR其他产品：类十二烷酸（类花生酸）代谢、细胞因子、信号转导、血管生物学、外源物代谢的生物标志物的分析试剂盒、重组蛋白、抗体、质粒等。一．硫代巴比妥酸法（TBARS ...

This method was successful in our lab using prostate tissue and for our specific objectives. Investigators must be aware that they will need to tailor the following protocol for their own research obj ...

蛋白质与多肽激素的放射免疫分析第一节　概述　　1960年，美国学者Yalow 和Berson 创立了放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA），并首先用于糖尿病人血浆中胰岛素含量的测定。这是医学和生物学领域中方法学的一项重大突破，开辟了医学检测史上的一个新纪元。它使得那些原先认为是无法测定的极微量而又具有重要生物学意义的物质得以精确定量，从而为进一步揭开生命奥秘打开了一条新的道路，使 ...

Methylation of Fatty Acids (Kropinski Method)OBJECTIVE:To methylate fatty acids in whole cells or lipopolysaccharide.REAGENTS : Methanol-Hydrochloride Reagent Kit 10mg of whole cells or 1 mg of lipopo ...

Analysis of Oligosaccharide Ligands by High Performance Liquid Affinity ChromatographyWeiTong Wang~GlycoTech Corporation Rockville Maryland 20850 High performance liquid affinity chromatography (HPLAC ...

　1．原理　用Iodogen为氧化剂，对蛋白质和多肽抗原进行碘化标记，把125I直接引进分子中的酪氨酸残基上。标记过程中被标记样品不与Iodogen混合，标记后取出样品即停止反应，不使用任何还原剂。　　2．方法　（1）标记之前，先把Iodogen溶于有机溶剂，涂于管底，并使之干燥。　　（2）标记时，将蛋白质溶液10～20μg/10μl(0.5mol/LpH7.5PB)置于反应管中，反应管置于冰浴 ...

Carbohydrate AssaysREFERENCE: Wright and Rebers Anal. Biochem. 49: 307-319 1972.OBJECTIVE: To determine the relative amounts ofLPS carbohydrates present in a given strain. The assay can be done on one ...

　（1）放射性碘源的选用：无载体的131I或125I均可用于碘化标记，但应尽量选用新鲜的、比放射强度高的、含还原剂量少的放射性碘源。碘源的比放射强度最好≥50～100mCi/ml，至少也要30mCi/ml，否则加入碘源的容量要增加，随着带入碘源中含有的还原剂（为放射性碘源运输保存所需加入）量也增加，这将会显著降低碘利用率及标记蛋白比放射强度。放置较久和放射性碘源，一方面因衰变致比放射强度降低，另一 ...

　　本法反应温和，对抗原、抗体免疫活性影响小，已被广泛应用。缺点是标记率较低，一般为20～40%。　　1．原理此法是利用乳过氧化物酶（Lactoperoxidase）有促进微量过氧化氢对125I-的氧化作用，生成125I+，并标记在多肽、蛋白质酪氨酸分子上。　　2．方法以标记蛋白质抗原为例。　　（1）反应液组成：蛋白质2～5μg溶于磷酸缓冲液10～25μl中，加入Na125i 1m Ci(10μl ...

Gel-elongation assay for type II fatty acid synthesisSrinivas Kodali Andrew Galgoci Sheo Singh Dr. Jun Wang Dr. jun_wang2@merck.com Merck Research Laboratories Related Journal & Article InformationMan ...

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