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毕式酵母表达常见的问题及其解析

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甲醇酵母表达实验的注意若干事项

相关专题 蛋白表达技术全攻略 试验的注意事项 1、信号肽识别位点的设计 以质粒pPICZαA为例。在利用PCR反应在外源基因两端引入酶切位点的试验中。如果质粒pPICZαA双酶切中丢失了KEX2蛋白酶的酶切位点Lys-Arg,应该在上游中,增加了编码Lys、Arg的密码子AAA、AGA 。酵母细胞膜中中的KEX2蛋白酶 ...

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常用蛋白质分子量标准参照物列表

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45种常见蛋白质分子量参考

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一种潜力无限的基因表达方法——甲醇酵母

相关专题 蛋白表达技术全攻略 你还在用E.col做基因表达的研究吗?有点跟不上发展的脚步咯。新兴且发展迅速前途无限的甲醇酵母系统正越来越被人们熟知和看好。本文对这一新的基因表达系统的特点和科研进展做详细的介绍。 1 甲醇酵母表达系统的特点 1.1 宿主 七十年代巴斯德毕赤酵母曾被用于生产单细胞蛋白(SCP)有很好的发酵基础菌体密度可达10 ...

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关于BSA封闭液的使用方法大讨论

相关专题 它们都是BSA A、请问各位高手在进行免疫荧光的实验时浸一抗之前要用的封闭液中1%的BSA是怎么配制? 封闭液封闭后还用PBS清洗干净再浸一抗吗? 1.可以直接用0.02M的PBS配制 2.不用PBS清洗干净,直接浸一抗。 B、各位高手,间接法中我想摸索封闭液BSA的最佳浓度,用抗原包被后,用不同浓度的BSA(0.5%,1%,2%, ...

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赖氨酸的作用

相关专题 赖氨酸是人体必需氨基酸之一,能促进人体发育、增强免疫功能,并有提高中枢神经组织功能的作用。赖氨酸为碱性必需氨基酸。由于谷物食品中的赖氨酸含量甚低,且在加工过程中易被破坏而缺乏,故称为第一限制性氨基酸。 缺乏赖氨酸的症状包括疲劳,虚弱,恶心,呕吐,头晕,没有食欲,发育迟缓,贫血等。可以在医疗专业人员议下采取赖氨酸营养补品。 ...

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BSA的配制方法

相关专题 它们都是BSA生物实验中的封闭剂 1.BSA封闭液的配制 石蜡切片做免疫荧光的时候用4%BSA in PBS +0.05% Tween 20 细胞免疫荧光的时候用 1%BSA in PBS + 0.05% Tween 20 2.0.1%BSA怎么配 直接用水配就行了!按体积比就行!看你干什么用!要是用来PCR可以用dd水配制! 3. ...

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NI-NTA蛋白提纯的原理、步骤与常遇问题分析

相关专题 Ni柱中的氯化镍或者硫酸镍可以与有HIs(组蛋白)标签的碱性蛋白蛋白结合,组蛋白标签一般是6个组氨酸(碱性氨基酸)。在蛋白上样后,带有组氨酸标签的蛋白特异性结合到柱子里,其他的杂蛋白流出。Ni-NTA纯化介质是Ni离子金属螯合介质。 蛋白过镍柱纯化的原理:Ni柱中的氯化镍或者硫酸镍可以与有HIs(组蛋白)标签的碱性蛋白蛋白结合,组 ...

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亲和层析法纯化蛋白实验中需要注意的事项

相关专题 蛋白纯化技术专题 1.上样 亲和层析纯化生物大分子通常采用柱层析的方法。亲和层析柱一般很短,通常10cm左右。上样时应注意选择适当的条件,包括上样流速、缓冲液种类、pH、离子强度、温度等,以使待分离的物质能够充分结合在亲和吸附剂上。 一般生物大分子和配体之间达到平衡的速度很慢,所以样品液的浓度不易过高,上样时流速应比较慢,以保证样品 ...

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葡聚糖凝胶柱的使用方法

相关专题 蛋白纯化技术专题 1 Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用,Sephadex G-25羟丙化后就是Sephadex LH-20。其既有分子筛作用,在由极性与非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层析效果。虽然价位很高,但由于性能颇佳,可再生利用,所以倍受亲睐。此外上柱样品损失很少,对处理小样品较好,这也是我们实验室常用的原因之一 ...

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凝胶过滤实验中的注意事项

相关专题 蛋白纯化技术专题 1.层析柱的选择 层析柱大小主要是根据样品量的多少以及对分辨率的要求来进行选择。一般来讲,主要是层析柱的长度对分辨率影响较大,长的层析柱分辨率要比短的高;但层析柱长度不能过长,否则会引起柱子不均一、流速过慢等实验上的一些困难。一般柱长度不超过100cm,为得到高分辨率,可以将柱子串联使用。层析柱的直径和长度比一般在 ...

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蛋白质纯化的方法选择

相关专题 蛋白纯化技术专题 蛋白质纯化的方法选择 随着分子生物学的发展,越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术,并研制成套试剂盒,使基因克隆表达变得越来越容易。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的,分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物,以研究其生物学作用,或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。相对与上游工作来说,分子克 ...

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植物蛋白质提取方法大全

相关专题 一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清液,样品制备完成。 蛋白质提取液:300 ...

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蛋白质分离纯化的一般程序

相关专题 蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤: (一)材料的预处理及细胞破碎 分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态,不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有: 1. 机械破碎法 这种方法是利用机械力的剪切作用,使细胞破碎。常用设备有,高速组织捣碎机、匀浆 ...

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福林-酚法植物体内可溶性蛋白质含量的测定汇总

相关专题 该方法是双缩脲法的发展,包括两步反应: (1)在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质—铜络合物。 (2)此络合物将试剂磷钼酸—磷钨酸(FolIn试剂)还原,混合物深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物),颜色深浅与蛋白质含量成正比。此方法操作简便,灵敏度比双缩脲法高100倍,定量范围为5~100μg蛋白质。FolIn试剂显色反应由酪氨 ...

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蛋白质纯化经验总结

相关专题 蛋白纯化技术专题 1)我现在手头有个融合蛋白,纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析,之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。 请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列,没有问题。细胞破碎后,融合蛋白在沉淀里,我用助溶剂提取后,可以用GST做亲和层析,但效率只有50~60%左右。洗脱完融合蛋白不需要助溶剂,但这样的 ...

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GST融合蛋白纯化--筛选表达株(英文)

相关专题 蛋白表达技术全攻略蛋白纯化技术专题 Purification of GST fusion proteins in E.coli GST Sugden labMcArdle Laboratory for Cancer ResearchUniversity of Wisconsin-Madison Medical School Scre ...

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蛋白纯化反相柱的选择

相关专题 蛋白纯化技术专题 HP-RPC的选择首先要看蛋白质的分子量,20kDa左右的一般用C4或C8,再小一点的可以用C18,太大的蛋白并不适于反相分离。C18通用性最好,但是有时候保留过强可能会导致收率较低。如果目的蛋白不是很针对,可以考虑通用性最强的C18柱。一般来说,4.6mm的内径比较常见,250mm长的柱子比150mm的柱子分离度要 ...

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His.Tag序列蛋白纯化法宝之HIundefinedBIND的选择

相关专题 蛋白纯化技术专题 各种His.Bind基质的产品如何选择:本文介绍带Ni NTA琼脂糖、无Ni IDA琼 脂糖、带Ni的IDA琼脂糖预装柱、无Ni IDA触须甲酰化、带Ni的IDA纤维素预装筒、带Ni的IDA磁性琼脂糖……等His.Bind基质的特点和应用。 His.Bind基质选择指南:与任何纯化介质一样,His.Bind树脂在接 ...

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