相关专题 一.质粒酶切及线性化 1)用维特洁日常型小量DNA纯化试剂盒抽提9KSF2,可得到较纯的质粒10μg/3ml菌液,终体积80ul。 2)线性化质粒 使用80μl酶切体系 9KSF2质粒 70μl 内切酶(SacI, SalI, BglⅡ) 2μl 10 x buffer 8μ ...
相关专题 张伍魁范清林宋礼华(安徽医科大学基础医学院合肥230032) 摘要巴斯得毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统作为一个日臻完善的外源蛋白真核表达系统由于它所具有的一些其它表达系统不可比拟的优势而得到越来越广泛的应用。分别从该表达系统的优点、外源基因整合及调控机理、表达蛋白糖基化及翻译后修饰等方面综述了其在外源蛋白表达中 ...
相关专题 Department of Medicine Michigan State University East Lansing Michigan USA. hongbao@msu.edu Abstract: western blotting is a useful and sensitive method to measure the ...
相关专题 (李欣 郭树华 军事医学科学院放射医学研究所 北京 100850)摘要 要在一种宿主表达系统中成功表达外源蛋白并获得较高产量,必须要较为全面地了解影响其表达的诸多因素。影响外源基因在巴氏毕赤酵母中表达的因素主要包括:外源基因的特性、表达框的染色体整合位点和方式、宿主菌的甲醇利用表型、基因剂量、分泌信号、产物稳定性和翻译后修饰等。本文 ...
相关专题 I 血液及组织样品的制备分析组织中某种物质的含量、探索物质代谢的过程和规律,经常使用动物的肝、肾、脑、粘膜和肌肉等组织,也选用全血、血浆、血清或者无蛋白血滤液等血液样品,有时也采用尿液、胃液等完成各种生化实验。掌握以上各种实验样品的正确处理和制备方法是保证生化实验顺利进行的关键。一、血液样品(一)采血测定用的血液,多由静脉采集。一般 ...
相关专题 Isolating a protein may be compared to playing a game of golf. In golf the player is faced with a series of problems each unique and yet similar to problems previously ...
相关专题 High Level Expression?Protein BiochemistryWesterns and pull-down assaysEnzyme AssaysSub-mg quantitiesProtein StructureStructural BiologistsNMR and X-ray crystallograph ...
相关专题 Materials LB medium Kanamycin stock solution Ampicillin stock solution Lysis buffer for purification under native conditions 1´ PAGE sample buffer 2´ PAGE sample buffe ...
相关专题 Materials Ni_NTA Spin ColumnsLB mediumKanamycin stock solutionAmpicillin stock solutionIPTG stock solutionBuffers A–D 5× SDS-Page sample buffer1. Pick single colonies ...
相关专题 摘要:考马斯亮兰G250与蛋白质结合,在0-1000ug/ml范围内,于波长595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比,可用于蛋白质含量的测定。考马斯亮兰G250与蛋白质结合迅速,结合产物在室温下10分钟内较为稳定,是一种较好的蛋白质定量测定方法。1. 实验部分1.1 仪器与试剂:Labtech UV POWER紫外分光光度计;玻璃比色 ...
相关专题 IntroductionEGFP will be measured by direct visualisation with a UV microscope and the appropriate filters. By using an inverted microscope we are able to assay the Ce ...
相关专题 【原 理】本实验采用磺酸型阳子交换树脂(732型)分离酸性氨基酸(天冬氨酸Asp pI=2.97)和硷性氨基酸(赖氨酸Lys pI=9.74)的混合液。在pH5.3条件下,因为低于Lys的pI值,Lys可解离成阳离子挂在树脂上;高于Asp的pI值,则Asp可解离为阴离子,不能被树脂吸附而直接流出色谱柱,在pH 12条件下,因高 ...
相关专题 蛋白质的定量分析是生物化学和其它生命学科最常涉及的分析内容,是临床上诊断疾病及检查康复情况的重要指标,也是许多生物制品,药物、食品质量检测的重要指标。在生化实验中,对样品中的蛋白质进行准确可靠的定量分析,则是经常进行的一项非常重要的工作。蛋白质是一种十分重要的生物大分子:它的种类很多,结构不均一,分子量又相差很大,功能各异,这样就给 ...
相关专题 一、 目的掌握Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法,熟悉分光光度计的操作。二、原理Folin-酚试剂法包括两步反应:第一步是在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物;第二步是此络合物将磷钼酸-磷钨酸试剂(Folin 试剂)还原,产生深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物),颜色深浅与蛋白质含量成正比。此法操作简便,灵敏度比双缩脲 ...
相关专题 蛋白质的分离纯化(一)材料 1、选材 2、破碎 3、混合物的分离 (二)粗分级 (三)细分级 (四)结晶蛋白质的分离方法根据蛋白质的溶解度差异分离 —沉淀技术根据蛋白质分子大小的差异分离根据蛋白质的荷电差异分离根据蛋白质与某些物质的吸附差异—吸附分离利用生物分子专一性结合的特性—亲和层 ...
相关专题 David WishartUniversity of AlbertaEdmonton ABdavid.wishart@ualberta.caProteomicsProteomics employs an incredibly diverse range of technologies including:molecular biol ...
相关专题 原 理 蛋白质分子在溶液中由于其末端氨基、末端羧基及侧链的游离基团而成为带电颗粒,并可在电场内移动,其移动方向取决于蛋白质分子所带静电荷。不同蛋白质分子根据其氨基酸组成及所在溶液的pH值,携带的静电荷不尽相同,致使它们在电场中的迁移率各异,从而达到分理的目的。电泳原理示意图在蛋白质组学中对电泳的分类一维电泳(one dimensi ...
相关专题 MaterialsReady Gel Precast GelsBio-Rad Mini-Protean-3 Cell apparatusPrestained protein markers Reagents6x Laemmli reducing sample buffer Distilled H20 (dH20)Running bu ...
相关专题 Conduct SDS-Page according to standard procedures. 1. Cast gel and allow to polymerize 2. Prepare samples to be resolved 3.Load gel 4.Run gel ( Transferring proteins ...
相关专题 Levels of Structure in ProteinPrimary: A description of all covalent bonds. The sequence of AA residuesSecondary: particularly stable arrangements of AA giving rise to ...