蛋白质技术

相关专题 1．引言 细胞功能通常是由生物分子之间的弱相互作用即非共价作用而引起的，如酶与底物、蛋白质与配体、蛋白质与蛋白质及抗原抗体反应。对这些弱相互作用的影响会导致疾病的发生。如ras-GDP(蛋白质-配体)，γ-干扰素（蛋白质-蛋白质同源二聚体），FKBP-rapamycin（蛋白质-抑制剂复合物）。生物学家们对这些作用正进行广泛的研究以 ...

相关专题 1.葡萄糖异构酶（GI）在工业上应用广泛，为提高其热稳定性，朱国萍等人在确定第138位甘氨酸(Gly138)为目标氨基酸后，用双引物法对GI基因进行体外定点诱变，以脯氨酸（Pro138）替代Gly138，含突变体的重组质粒在大肠杆菌中表达，结果突变型GI比野生型的热半衰期长一倍；最适反应温度提高10～12℃；酶比活相同。据分析，Pr ...

相关专题 吴松锋，朱云平，贺福初军事医学科学院放射医学研究所，北京 100850 Key Words： 蛋白质组；蛋白质鉴定；蛋白质数据库；质谱 Abstract大规模蛋白质组表达谱研究的蛋白质鉴定一般采取基于数据库搜索的策略，因此数据库的选择及搜索策略在蛋白质鉴定中非常重要。现有的人类蛋白质数据库远不够完善，而从其他物种的蛋白质数据库中所能 ...

相关专题 一、mtt比色法检测细胞活性（一）原理活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。（二）试剂准备1、 青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2O中 抽滤除菌。2、 L15基础 ...

相关专题 人们合成与生物相关的物质是从尿素开始的，1828年，德国化学家维勒人工合成了存在于生物体的这种有机物。在1960年我国科学家采用化学方法首次成功地合成了具有生物活性的蛋白质——胰岛素。随着内切酶的发现和基因工程技术的发展，人们发现用各种不同的载体在原核、真核系统中进行蛋白表达更为行之有效。而这其中大肠杆菌表达系统发展得最为迅速、成熟 ...

相关专题 通过大肠杆菌表达目的基因大量获得重组蛋白是一个方便快捷的方法。植物中克隆的目的基因被克隆到特异设计的质粒载体上，受噬菌体T7强启动子控制；表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导。当需要表达蛋白时，在细菌培养基中加入IPTG来启动表达。不同载体在邻近克隆位点处具有编码不同的多肽“标签”的序列，在定位、检测或纯化目的蛋白时提供方便。 ...

相关专题 一、原理1、 E . coli 表达系统E . coli 是重要的原核表达体系。在重组基因转化入E . coli 菌株以后，通过温度的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-Page 以检测表达蛋白质。2、 外源基因的诱导表达提高外源基因表达水平的基本手段之一，就是将宿主菌的生长与外源基因的表达分成两个阶段，以减 ...

相关专题 我想表达遇到的第一个瓶颈估计就是为什么我的外源片段插到载体里面，PCR鉴定没问题，双酶切也OK，可是就是不见表达。一般我们是如何判断没有表达呢？大多都是首先进行SDS-PAGE。在跑胶的时候一定要设对照，比较严谨的电泳对照，应该是：Marker，标准品阳性对照（如果有，且打算做Western的话），以及空白载体（诱导）和重组载体（不 ...

相关专题 将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点：易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择。但是，在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修 ...

相关专题 赵军 侯云德 （病毒基因工程国家重点实验室 100052 北京） 本世纪60至70年代对大肠杆菌的研究使之成为自然界中最普遍为人们所认识的生物体。大肠杆菌具有两个显著特征：操作简单和能在廉价的培养基中高密度培养，它的这些特征加上十多年外源基因表达的经验使其在大多数科研应用中成为高效表达异源蛋白最常用的原核表达系统。尽管大肠杆菌 ...

相关专题 影响E.coli 中蛋白表达量的因素除载体启动子结构以外，还有质粒拷贝数、质粒稳定性、mRNA结构、密码子的偏爱性和宿主菌的生长状态等因素 ...

相关专题 一.实验步骤 1. 组织块称重 2. 利用液氮、研钵粉碎组织块 3. 加入RIPA缓冲液（每克组织3 ml RIPA），PMSF（每克组织30μl，10 mg/ml PMSF），利用Polytron进一步匀浆（15000转/分1分钟）维持4℃ 4. 加入PMSF（每克组织30μl，10 mg/ml PMSF），冰上孵育30 ...

相关专题 Author:Dang Vu Hoang Source:Laboratory of Vet.Biochemistry and Molecular Biology Chungbuk National University Republic of Korea Abstract: This protocol was used for ti ...

相关专题 下面的步骤适用于通过XCell Ⅱ转印系统进行蛋白印记的大部分应用。为达到最佳效果，用户的优化是必要的。 I. 所需材料： •Xcell SureLock™或Xcell Ⅱ™ Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001 EI9001及EI9051）•电泳后的迷你胶（mini-gel）（最大的尺寸 ...

相关专题 一、提取抗原蛋白 将提取RNA途中留存的样品，加入150μl100%酒精充分混匀，静置5min(RT)2000×g4℃离心5min吸取上清至新管中加入750μl异丙醇混匀静置10min(RT)12000×g4℃离心10min弃上清加入1ml0.3mol/L盐酸胍/95%酒精重悬沉淀用加样器打散沉淀混旋20~30秒静置20min(RT ...

相关专题 western blot PROTOCOLIn a Western blot proteins that are separated on polyacrylamide gels on the basis of size are transferred to a membrane for detection with antibod ...

相关专题 western blot analysis can detect your protein of interest from a mixture of a great number of proteins. Western blotting can give you information about the size of you ...

相关专题 蛋白浓缩方法基本有： 丙酮沉淀法；免疫沉淀法；三氯醋酸沉淀法；硫酸铵沉淀法；（低温）有机溶剂沉淀法；聚乙二醇沉淀法；超滤法；透析法；离子交换层析和冷冻干燥法…… 1.丙酮沉淀法；三氯醋酸沉淀法 试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白质变性。 2.免疫沉淀法：得有特异性抗体！ 3.硫酸铵沉淀法：利用高浓度盐将蛋白质析出（盐析） 选择硫酸 ...

相关专题 NRC Institute for Biological sciencesTriton X-114 extraction protocol (Hydrophobic protein preparation)Ressuspend Cells in Solution A (dil 1/8) and add 15 µl of mammal ...

相关专题 Protein表达是一个非常复杂的过程，因此很难预测表达的蛋白是否是可溶性的、包涵体形式还是部分降解的。为了预防各种可能的困难条件，在重组蛋白上导入两种Tag可以提供获得高纯度均质蛋白的灵活性。 蛋白含有两种不同亲和纯化Tag的重要原因： 纯化全长的蛋白 获得最高纯化的蛋白 适合变性或生理条件下纯化 优化的操作过程，可以直接从培养基 ...