蛋白质技术

蛋白浓缩方法基本有： 丙酮沉淀法；免疫沉淀法；三氯醋酸沉淀法；硫酸铵沉淀法；（低温）有机溶剂沉淀法；聚乙二醇沉淀法；超滤法；透析法；离子交换层析和冷冻干燥法…… 1，丙酮沉淀法；三氯醋酸沉淀法 试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白质变性。 2，免疫沉淀法：得有特异性抗体！ 3，硫酸铵沉淀法：利用高浓度盐将蛋白质析出（盐析） 选择硫酸按是因为：盐析有效性，pH范围广，溶解度高，溶液散热少，经济！ 4 ...

蛋白浓缩方法基本有： 丙酮沉淀法；免疫沉淀法；三氯醋酸沉淀法；硫酸铵沉淀法；（低温）有机溶剂沉淀法；聚乙二醇沉淀法；超滤法；透析法；离子交换层析和冷冻干燥法…… 1，丙酮沉淀法；三氯醋酸沉淀法 试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白质变性。 2，免疫沉淀法：得有特异性抗体！ 3，硫酸铵沉淀法：利用高浓度盐将蛋白质析出（盐析） 选择硫酸按是因为：盐析有效性，pH范围广，溶解度高，溶液散热少，经济！ 4 ...

个人经验仅供参考:1.用脱脂奶粉封闭的效果不一定比用BSA差不过我们试过几种奶粉有一些奶粉不太适合.推荐使用的奶粉:雀巢高钙奶粉多力精低脂奶粉.一般国产的奶粉的颗粒比较大不太容易溶解.2.关于三名治:本人以前做时花很多时间在防止短路上现在我做的时候根本没有剪齐最主要的是赶气泡这是关键的关键其实转膜的原理是电流的单向流动现在的好多公司的转膜装置的电极是一个平面所以不用担心短路的.(不信的可以试试!! ...

个人经验仅供参考:1.用脱脂奶粉封闭的效果不一定比用BSA差不过我们试过几种奶粉有一些奶粉不太适合.推荐使用的奶粉:雀巢高钙奶粉多力精低脂奶粉.一般国产的奶粉的颗粒比较大不太容易溶解.2.关于三名治:本人以前做时花很多时间在防止短路上现在我做的时候根本没有剪齐最主要的是赶气泡这是关键的关键其实转膜的原理是电流的单向流动现在的好多公司的转膜装置的电极是一个平面所以不用担心短路的.(不信的可以试试!! ...

大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。（一）水溶液提取法稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂，通常用量是原材料体积的1-5倍，提取时需要均匀的搅拌，以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。一方面，多数蛋白质的溶解度随着温度的升 ...

多肽合成概述：　1963年，R.B.Merrifield［1］创立了将氨基酸的C末端固定在不溶性树脂上，然后在此树脂上依次缩合氨基酸，延长肽链、合成蛋白质的固相合成法，在固相法中，每步反应后只需简单地洗涤树脂，便可达到纯化目的.克服了经典液相合成法中的每一步产物都需纯化的困难，为自动化合成肽奠定了基础.为此，Merrifield获得1984年诺贝尔化学奖.　　今天，固相法得到了很大发展.除了Mer ...

1 分离方法 　　采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、叫泳等。 　　1.1 高效液相色谱（HPLC） 　　HPLC的出现为肽类 ...

纯化相关材料：琼脂糖凝胶介质及柱子选择指南： http://bbs.bioon.net/dispbbs.asp?BoardID=92&ID=56965gst融合蛋白纯化指南：http://bbs.bioon.net/dispbbs.asp?BoardID=92&ID=56974染料亲和纯化：http://bbs.bioon.net/dispbbs.asp?BoardID=92&ID=56972亲和 ...

胶体金标记蛋白A技术（Protein A-gold technique PAg法）　　 PAg复合物制备方法简便，作为第二抗体，无种属特异性，可以免去不同种属动物要制备不同的特异性免疫球蛋白。PAg 复合物与包埋剂和细胞成分都极少发生非特异性的交互作用，蛋白A和金粒间非共价的结合特性既不影响蛋白A的活性，又能保持高度的稳定性，PAg复合物分子最小易于穿透组织。PAg复合物的原液在4℃可保存达一年之 ...

蛋白质浓缩有多种方法，有盐析，超滤，离子交换，有机溶剂沉淀等方法有机溶剂沉淀法在多肽分离中用的特别多，现简要说明如下，希望对各位新虫有所帮助有机溶剂沉淀法：有机溶剂能降低溶液的电解常数，从而增加蛋白质分子上不同电荷的引力，导致溶解度的降低；另外，有机溶剂与水的作用，能破坏蛋白质的水化膜，故蛋白质在一定浓度的有机溶剂中的溶解度差异而分离的方法，称“有机溶剂分段沉淀法”，它常用于蛋白质或酶的提纯。使用 ...

有一次本人用HiPrep™ 26/60 Sephacryl S-200 HR以2ML/MIN的速度做GF纯化.结果一时开小差柱子严重进气.严重到什么程度呢60厘米的柱子上方20CM都空了下面40CM则全都是气泡.本人发现后立刻停泵并经专家建议后采取以下措施:1:将原来与柱子底部相连的增压器拆下连到顶部.2:翻转进液方向由底部向顶部以最大速度输液我记得好象是用了该柱子的最大流速.结果柱子 ...

（六）兴风作浪的乳糖(lactose) 　晚上每天都有人做报告，我觉得让我收获最大的是Bill Studier的报告。本来这个报告是后来才听到的，但是由于Burgess的模块是唯一的涉及大肠杆菌钟表达蛋白的，我把这一段提前来说说。Studier这老哥是Brookhaven National Laboratory的，一生研究T7 噬菌体，也是T7 RNA polymerase induction s ...

（六）兴风作浪的乳糖(lactose) 　晚上每天都有人做报告，我觉得让我收获最大的是Bill Studier的报告。本来这个报告是后来才听到的，但是由于Burgess的模块是唯一的涉及大肠杆菌钟表达蛋白的，我把这一段提前来说说。Studier这老哥是Brookhaven National Laboratory的，一生研究T7 噬菌体，也是T7 RNA polymerase induction s ...

Western转膜步骤 下面的步骤适用于通过Xcell Ⅱ转印系统进行蛋白印记的大部分应用。为达到最佳效果，用户的优化是必要的。 I. 所需材料： • Xcell SureLock™或Xcell Ⅱ™ Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001 EI9001及EI9051） • 电泳后的迷你胶（mini-gel） ...

Western转膜步骤 下面的步骤适用于通过Xcell Ⅱ转印系统进行蛋白印记的大部分应用。为达到最佳效果，用户的优化是必要的。 I. 所需材料： • Xcell SureLock™或Xcell Ⅱ™ Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001 EI9001及EI9051） • 电泳后的迷你胶（mini-gel） ...

蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段，现介绍几种常用的浓缩技术。（一）透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30％－40％浓度的溶液，将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用过后，可放入温箱中烘干或自然干燥 ...

蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段，现介绍几种常用的浓缩技术。（一）透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30％－40％浓度的溶液，将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用过后，可放入温箱中烘干或自然干燥 ...

Joseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne AustraliaDavid W. RussellUniversity of Texas Southwestern Medical Center DallasExcerpted From Molecular Cloning: A Labor ...

Purification of PCR Products in Preparation for CloningJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne AustraliaDavid W. RussellUniversity of Texas Southwestern Medica ...

Preparation of Glutathione-S-Transferase (GST) Fusion ProteinsMargret B. Einarson and Elena N. Pugacheva Foxx Chase Cancer Center Philadelphia PA 19111Jason R. Orlinck Brigham & Women's Hospital Bost ...