OverviewThis protocol is a detail description of the laboratory procedure in performing 2D gel electrophoresis for illustrating the protein profile of the human plasma proteome.Material1.Peripher ...
Sample preparation and solubilization are crucial factors for the overall performance of the 2-D PAGE technique. Protein complexes and aggregates should be completely disrupted in order to avoid appea ...
MaterialsDEPC H2ODEPC 0.1% (v/v)q.s. de-ioinized H2O37ºC x1 hr or r.t. overnightAutoclave.(NaOAc EDTA and ethidium bromide solutions should also be DEPC treated. Tris has a reactive amine and can''t ...
The overall quality of an RNA preparation may be assessed by electrophoresis on a denaturing agarose gel; this will also give some information about RNA yield. A denaturing gel system is suggested bec ...
The overall quality of an RNA preparation may be assessed by electrophoresis on a denaturing agarose gel; this will also give some information about RNA yield. A denaturing gel system is suggested bec ...
Protocol for Bioanalyzer RNA nano chip preparation of material 12 samples per chip quantitative range 25�500 ng/μl quantitation accuracy 20%CV (for ladder as sample) cleaning gel preparation (start 40 ...
如何防止聚丙烯酰胺垂直电泳漏胶现象已成为实验室研究人员比较头疼的问题！1. 固定玻璃板时，先将厚薄玻璃板在桌面对齐后在垂直面上稍微向厚板倾斜20度，使底面薄板略高于厚板。2. 将固定好的玻板固定于放有海绵垫的制胶架上，固定时用手稍用力往下压，此时封闭的灌胶系统准备完毕。3. 除了以上安装技巧外，由于海绵橡胶垫用久后会老化或者损坏，从而导致漏胶的现象时常发生，建议 ...
如何防止聚丙烯酰胺垂直电泳漏胶现象已成为实验室研究人员比较头疼的问题！1. 固定玻璃板时，先将厚薄玻璃板在桌面对齐后在垂直面上稍微向厚板倾斜20度，使底面薄板略高于厚板。2. 将固定好的玻板固定于放有海绵垫的制胶架上，固定时用手稍用力往下压，此时封闭的灌胶系统准备完毕。3. 除了以上安装技巧外，由于海绵橡胶垫用久后会老化或者损坏，从而导致漏胶的现象时常发生，建议 ...
等电聚焦电泳技术 等电聚焦（isoelectricfocusing，IEF）是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。由于其分辨率可达0.01pH单位，因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。⒈IEF的基本原理在IEF的电泳中，具有pH梯度的介质其分布是从阳极到阴极，pH值逐渐增大。如前所述，蛋白质分子具有两性解离及等电点的特征，这样在碱性区 ...
等电聚焦电泳技术 等电聚焦（isoelectricfocusing，IEF）是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。由于其分辨率可达0.01pH单位，因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。⒈IEF的基本原理在IEF的电泳中，具有pH梯度的介质其分布是从阳极到阴极，pH值逐渐增大。如前所述，蛋白质分子具有两性解离及等电点的特征，这样在碱性区 ...
其他电泳技术 ⒈IEF/SDS-PAGE双向电泳法1975年O′Farrall等人根据不同组份之间的等电点差异和分子量差异建立了IEF/SDS-PAGE双向电泳。其中IEF电泳（管柱状）为第一向，SDS-PAGE为第二向（平板）。在进行第一向IEF电泳时，电泳体系中应加入高浓度尿素、适量非离子型去污剂NP-40。蛋白质样品中除含有这两种物质外还应有二硫苏糖醇以促使蛋白质变性和肽链舒展。IEF ...
其他电泳技术 ⒈IEF/SDS-PAGE双向电泳法1975年O′Farrall等人根据不同组份之间的等电点差异和分子量差异建立了IEF/SDS-PAGE双向电泳。其中IEF电泳（管柱状）为第一向，SDS-PAGE为第二向（平板）。在进行第一向IEF电泳时，电泳体系中应加入高浓度尿素、适量非离子型去污剂NP-40。蛋白质样品中除含有这两种物质外还应有二硫苏糖醇以促使蛋白质变性和肽链舒展。IEF ...
简 介 这个方法是应用最早也是最常用的突变筛查方法之一，在过去的十年中经历了很大的改进，并被诊断室所广泛使用，最近有篇关于该问题的综述（Fodde和 Losekoot 1994 年）。原 理 如果 DNA 双链分子全长不断增加温度或用化学变性剂处理，两条链就会开始分开（解链）。首先解链的区域由解链温度较低的碱基组成。 G.C 碱基对比 A.T 碱基对结合得要牢固，因此 G. C 含量高的区 ...
简 介 这个方法是应用最早也是最常用的突变筛查方法之一，在过去的十年中经历了很大的改进，并被诊断室所广泛使用，最近有篇关于该问题的综述（Fodde和 Losekoot 1994 年）。原 理 如果 DNA 双链分子全长不断增加温度或用化学变性剂处理，两条链就会开始分开（解链）。首先解链的区域由解链温度较低的碱基组成。 G.C 碱基对比 A.T 碱基对结合得要牢固，因此 G. C 含量高的区 ...
Sample PreparationFor Protein Concentration Determination of Cell Culture Decant medium from 10cm dish of adherent cells and rinse plate rapidly with phosphate-buffered saline (PBS). Aspirate excess P ...
Put the membrane in PBS or TBS with 7ul/ml B-mercaptoetanol and 2%SDS for 30' at RT in agitation Wash the membrane for 30' in PBS or TBS.Put the membrane in blocking buffer ...
Western Blotting with Biotinylated AntibodiesSAMPLE PREPARATIONFor Protein Concentration Determination of Cell CultureDecant medium from 10cm dish of adherent cells and rinse plate rapidly with phosph ...
Running Protein GelsSolutions10X Running Buffer (0.25 M Tris 1.92 M glycine 1% SDS)121 g Tris577 g glycine40 g SDSddh20 to 4 L (check pH at 1:10 dilution (pH=~8.8)).5X Sample Buffer (0.3125 M Tris pH ...
1. Run samples out on a gel. For bacterially expressed proteins generally 5 uL is plenty (1ml cell culture; cells resuspeded in 50 ul loading buffer). Run the gels (BioRad mini gels) at 195 V for appr ...
1. Run samples out on a gel. For bacterially expressed proteins generally 5 uL is plenty (1ml cell culture; cells resuspeded in 50 ul loading buffer). Run the gels (BioRad mini gels) at 195 V for appr ...
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