蛋白质技术

Protocol for Protein Extraction10 % w/v TCA/ acetone/ 0.07 % v/v -MercaptoethanolPlant cells are rich in compounds that interfere with the 2DE separation method such as salts, organic acids, phenolics, pigments, terpenes, among others. A common protocol used in our lab for extraction protei ...

Immunoprecipitation and Immune Complex kinase assay--according to Tamara Hurley1) In the cold room, wash cells with cold "Tris" (the same stuff used for TC).Spin down the cells if you are working with suspension cells in a low speed swinging bucket centrifuge, resuspend in approximately 1 ml Tris ...

GPI蛋白本文提供了有关糖基磷脂酰肌醇（GPI，是许多蛋白以及�病毒蛋白结合于膜上的锚点）的信息。同时，网站还提供了许多相关链接和资源。GPI overviewGPI proteins in chickensGPI proteins in DrosophilaGPI in prion proteins Human GPI proteins: protectin (CD59) and homologous restriction factor (HRF, C8bp, MIP) GPI proteins in ye ...

The human and bovine 14-3-3 eta protein mRNAs are highly conservedEvolutionary conservation of the 14-3-3 proteinExpression and structural analysis of 14-3-3 proteinsCrystal structure of the zeta isoform of the 14-3-3 proteinStructure of a 14-3-3 protein and multiple signalling pa ...

糖类介绍--糖文库糖在体内的高聚物中, 糖是最后一个待发掘的领域. 糖与脂肪和蛋白质并列为三大营养物, 但是蛋白质构成酶和骨骼结构, 脂肪构成细胞膜, 而糖并没有吸引太多的关注. 由于其分子式(CH2O)n使得它看起来像是用碳和水做成的.我们容易注意到它的名字来自"碳的水和(carbohydrate)". 糖的结构被发现之前己经有一些混合碳和水以合成糖的尝试. 葡萄糖, 糖的基本元素之一, 被推测是由光合作用合成然后以糖原或淀粉形式储存. 然而, 最近发现构成细胞 ...

GST融合蛋白纯化方法 1目的片段接入pGEX载体； 2 涂板，挑单克隆，摇菌至OD600≈1.0，加入IPTG（终浓度1 mM）诱导6－8 h； 3 收菌，每升菌液约以50 mL PBS重悬，加入1%Triton X-100（v/v），1％β-巯基乙醇（v/v），PMSF（终浓度1 mM）； 以下步骤均在冰上操作： 4 超声破碎菌体，15000 g，10min离心取上清，在上清中加入适量GST-beads，轻轻晃动令其吸附蛋白1 h； 5 2000 g，3min离心弃上清； 6 加入至少10倍体积PBS，轻摇至b ...

相关专题 应用优势： ■ 肽精确定量 ■ 更低的检测限和定量限 ■ 完全的产物离子覆盖范围，不会发生工作周期损失 ■ 简化方法开发 简介： 近来，基于靶向LC/MS的方法被应用于定量蛋白组学中，以利于实现高准确度的多重相对和绝对定量研究。在研究中，三重四极杆和高分辨率质谱仪均有使用。使用这两种仪器不是完整蛋白质直接定量，而是监测蛋白被酶解后 ...

相关专题 一个由德国、瑞典和美国组成的国际研究组首次在室温条件下，利用LCLSX射线激光器，成功解码一种重要G蛋白偶联受体(GPCR)的3D结构。同时验证了LCLSX射线激光器的可行性。相关文章发表于2013年12月20日的《science》杂志上。 Science：首次利用新技术在天然条件下成功获得g蛋白偶联受体3D结构 GPCR功能 ...

相关专题 一个国际研究团队新研发一种可以检测大量蛋白质的方法，并且证实了其可行性。这种靶向性蛋白质检测方法具有具有系统地、可靠地检测人类蛋白质组的潜力。这项研究是由美国弗雷德哈钦森癌症研究中心蛋白质组学专家Amanda Paulovich博士所带领的。相关文章发表于2013年12月08日的《Nature Methods》杂志上。 Natu ...

除了抗体原因，转膜是怕是western成败的最关键因素。 看到园子里好多好多人在求助转膜时间，园子为何总结出一系列分子量蛋白转膜的时间呢？少说这对于大多数新手来说，是极好的礼物，说大点，借助丁香园的强势人气，此举可以提高我国一线科研人员WB水平也未必。我觉得好的转膜条件，WB的效率提高数倍不成问题。一起来看看站友们转膜条件的原创分享吧。 蛋白来源：RAW264.7 总蛋白 ...

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相关专题 Western Blot内参抗体产品选择专题 检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是western blot。虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活性的生物大分 ...

相关专题 Western Blot技术专题Western Blot内参抗体产品选择专题 内参抗体种类很多，比如β-actin、β-tubunlin、GAPDH、Lamin B等，那么针对自己的实验，我们该如何选择呢?下面简单介绍下选择内参抗体应遵循的原则： 一.样本种属来源： 首先要考虑的就是实验样本来源于什么物种。 1、 ...

1994年，Marc Wilkins在Siena双向凝胶电泳（two-dimensional electrophoresis，2-DE）会议上最早提出了蛋白质组（proteome）概念，并于1995年7月的Electrophoresis杂志上发表。随着高通量、高灵敏度、高分辨率生物质谱技术的出现，蛋白质组学技术取得飞速发展，人们不再满足于对一个细胞或组织的蛋白质进行定性研究，而是着眼于蛋白质量的 ...

1. itraq的原理是什么？ Itraq的检测可以做这样的比喻，蛋白被打成肽段后，被平均的铺在了一个有384个孔的平板上，然后机器会从每个孔中选取浓度在前5名的蛋白进行鉴定和比对，所以，如果假设每个一个样本中有100个蛋白，他们的浓度均为1%，那么得到的结果就是蛋白的得分低，但是鉴定的蛋白数量会很多，可以达到90以上；如果一个样本中有100个蛋白，有3个蛋白的含量分别为30、20、 ...

1. 离子交换剂的选择 离子交换剂的种类很多，离子交换层析要取得较好的效果首先要选择合适的离子交换剂。 首先是对离子交换剂电荷基团的选择，确定是选择阳离子交换剂还是选择阴离子交换剂。这要取决于被分离的物质在其稳定的pH下所带的电荷，如果带正电，则选择阳离子交换剂;如带负电，则选择阴离子交换剂。例如待分离的蛋白等电点为4，稳定的pH范围为6-9，由于这时蛋白带负电，故应选 ...

离子交换层析是最常用的分离纯化手段，下面提供离子交换层析条件摸索的自用protocal: 1. 除盐 将目标蛋白，或含目标蛋白溶液充分除盐，越低越好，只要蛋白仍稳定。同时，pH调节到上柱pH 2. 上柱 只要盐浓度低于上柱最高盐浓度，只管高流速上柱吧，不会漏出。 3. 梯度洗脱 最后使用AKTA，从B：0％ 到B：10 ...

离子交换层析法是以具有离子交换性能的物质作固定相，利用它与流动相中的离子能进行可逆的交换性质来分离离子型化合物的一种方法。 ⒈ 离子交换剂预处理和装柱 对于离子交换纤维素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的颗粒，以保证有较好的均匀度，对于已溶胀好的产品则不必经这一步骤。溶胀的交换剂使用前要用稀酸或稀碱处理，使之成为带H+或OH-的交换剂型。阴离子交换剂常用“碱-酸 ...

作者 张东 刘建华 韩林宇 陈晨 王逸君（陕西理工学院生物科学与工程学院生工091，陕西 汉中 723000）指导教师：冯自立【摘　要】 综述了离子交换树脂在核苷酸、核酸、抗生素等天然产物分离纯化中应用的研究现状展望了离子交换树脂在天然产物提取分离中的应用前景。【关键词】 离子交换树脂 天然产物 分离提纯离子交换树脂自1933年开始合成以来至今已获得了长足发展。目前交换树脂的商品品种已达2000 ...

Introduction Western blotting also called immunoblotting is a widely used and accepted techniqueto detect levels of protein expression in a cell or tissue extract. This technique measures ...