蛋白质技术

【实验目的】 熟悉蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理，掌握蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作方法，了解SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用范围。 【实验原理】 蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。当溶液pH值大于蛋白质等电点时，蛋白质带负电荷，在电场中向正极移动；反之则向负极移动，这种带电的颗粒在电场中泳动的现象称为电泳（electrophoresis）。不同的蛋白质由于等电点 ...

【实验目的】 掌握PCR技术的原理，学习PCR技术的基本方法，了解PCR技术的应用范围与意义。 【实验原理】 详见14章第2节。 【实验对象】 特定的DNA序列。 【试剂与器材】 引物(primer)，根据需扩增的DNA设计相应的引物；TagDNA聚合酶； 10×PCR缓冲液(随酶一起购买)；5mmol/L dNTP贮备液(商品化产品)；DNA模板(需扩增的 DNA)；双蒸水；矿物油；PCR反应管；微量移液器；离心机及PCR仪。 【实验方法与步骤】 标准的PCR操作程序是将 ...

【实验目的】 掌握Western Blot技术的基本原理， 学习Western Blot技术的实验方法， 了解Western Blot技术的应用范围。 【实验原理】 Western Blot（蛋白质印迹或免疫印迹）技术，以蛋白质为检测对象，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将样品蛋白质分离，再转移到固相载体（PVDF尼龙膜或NC膜）上；固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变； ...

【实验目的】 掌握RNA印迹技术的基本原理，学习RNA印迹技术的操作方法，了解RNA印迹技术的意义与应用。 【实验原理】 将RNA变性及电泳分离后，转移到固相支持物上，用于与DNA探针杂交以鉴定其中特定RNA分子的大小与含量。基本原理与Southern印迹相同，但RNA变性方法与DNA不同，不能用碱变性，因为碱会导致RNA的水解。 Northern印迹主要用于组织细胞靶基因表达水平的研究以及对同一组织细胞的不同基因间的表达水 ...

【实验目的】 掌握DNA印迹技术的基本原理， 学习DNA印迹技术的操作方法，了解DNA印迹技术的应用范围。 【实验原理】 DNA印迹是1975年由英国Southern创建的。其基本原理是：DNA分子经限制性核酸内切酶酶切后，由琼脂糖凝胶电泳将所得DNA片段按分子质量大小分离，然后将DNA片段变性，并使凝胶中的单链DNA片段转移到尼龙膜、硝酸纤维素膜(NC)或其他固相支持物上，此法中DNA片段由液流携带通过虹吸作用由下向上抽吸， ...

血清中人类软骨寡聚蛋白（COMP）检测及临床意义：背景介绍：COMP最早被认为具有软骨特异性，表达于软骨细胞周围的基质中，但近年研究表明，COMP在所有关节结构中均有表达，包括韧带、半月板、肌腱、滑膜。此外，视网膜和血管平滑肌细胞内也能表达COMP,COMP主要由软骨细胞和滑膜细胞分泌。软骨寡聚基质蛋白是近10余年来新发现的软骨代谢标志物,能反应关节滑膜炎的活动性及骨与软骨破坏的一种较为敏感的血清学标记物。COM ...

体外小麦胚系统+ 脂质体技术亚诺法体外蛋白质表达系统以小麦胚真核翻译机制为基础开发而成。小麦胚将所有翻译所需的成分存储于干燥浓缩的状态，在胚芽开始成长时即进行蛋白质的合成。普通的小麦胚萃取物中包含有RNA N-糖苷酶麦芽凝集素和其它翻译抑制物，例如硫堇、核糖核酸酶、脱氧核糖核酸酶类和蛋白酶等。这类抑制物产生于胚乳中。对小麦胚进行充分的清洗从而去除其中的胚乳污染物，使得萃取物具有高度的稳定性和活性。将具有5' 端甲基化与3' 端 ...

iTRAQ技术iTRAQ技术是由美国应用生物系统公司(Applied Biosystems Incorporation，ABI)2004年开发的同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ)技术，是一种新的、功能强大的可同时对四种样品进行绝对和相对定量研究的方法，这种方法是建立在iTRAQ试剂的基础上。iTRAQ技术原理：iTRAQ试剂为可与 ...

研究信号通路时，特别是对于高通量样本检测，通过传统的WB方法来检测蛋白是一项非常费时费力的工作。为了解决这个问题，科学家开始尝试一种新的方法，希望更加高效，简单，没有任何辐射的来检测这些蛋白，尤其是信号传导研究中的磷酸化蛋白。Cell Based Elisa 提供了这样一种理想的，高效的，直接的检测大量样本的细胞信号通路蛋白的方法。我们通过了解Cell Based Elisa 的实验步骤来解析怎样检测高通量的样本中的蛋白，尤其是信号 ...

琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的标准方法。该技术操作简便快速，可以分辨用其它方法（如密度梯度离心法）所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶EB（德元国际Cat# LY5009）染色,在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置。此外,还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNA条带,用于以后的克隆操作。琼脂糖凝胶分离DNA片度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝 ...

一、材料和方法1．试剂及耗材蛋白抽提试剂（改进型RIPA配方）BCA蛋白定量试剂盒5×还原样品缓冲液10×Tris-Glycine-SDS电泳缓冲液考马斯亮蓝染色液10×TBSTpH8.0湿转缓冲液PVDF膜，0.22um孔径丽春红染色液PMSF蛋白酶抑制剂封闭液ECL发光液山羊抗兔IgG（H+L），HRP兔抗山羊IgG（H+L），HRPβ-actin鼠单抗2．实验仪器Fresco低温冷冻离心机MultiSkan3酶标 ...

在不含动物成分的环境下生产的优质产品√ 使用不含动物成分的专门设备生产√ 现有产品包括细胞因子、生长因子及其他√ 在我们专门的不含动物成分的工厂中制造√ 在生产过程中未暴露于动物来源的成分√ 生物活性与标准实验室条件下生产的蛋白相当√ 内毒素水平低√ 科研或生物生产的绝佳选择√ 可提供更多证明文件R&D Systems的Animal-Free制造工序自2002年以来，我们一直在引进制造工艺，以便在无动物成分或副产物的环境下生产高品质的重组蛋白。在 ...

一、概述 随着人类基因组计划的实施和推进，生命科学研究已进入了后基因组时代。在这个时代，生命科学的主要研究对象是功能基因组学，包括结构基因组研究和蛋白质组研究等。基因组学虽然在基因活性和疾病相关方面提供了有力根据，但基因的表达方式错综复杂，同样的一个基因在不同条件下、不同时期可能起到完全不同的作用。因此，研究生命现象，阐释生命活动的规律，只了解基因组的结构是不够的，还需对生命活动的直接执行者——蛋白质进行更深入的研究 ...

心肌营养蛋白-1，CT-1 (Cardiotrophin-1)，是细胞因子gp 130家族的一员。通过观察ct-1-/-小鼠，在减少卡路里摄入的情况下，其表现出已下特征：成年型肥胖、胰岛素耐性及高胆固醇血症。采用rCT-1进行急性治疗后，ct-1-/-小鼠表现出胰岛素不相关的血糖降低及增加肌肉中AKT phosphorylation。采用rCT-1进行长期治疗，可以显著减少CT-1-/-小鼠的摄食量，增加能量消耗，诱导白色脂肪分解、脂肪酸氧化及线粒体发生等。

相关专题 凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用、DNA定性和定量分析。生物素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。 EMSA分析调控位点应用原理图 如上图所示，DNA-复合物比非结合的探针移动得慢;当检测DNA结合蛋白，可用纯 ...

相关专题 一、探针的标记 1.如下设置探针标记的反应体系： (1)待标记探针(1.75 pmol/微升)：2微升。 (2)T4 Polynucleotide Kinase Buffer(10X)：1微升。 (3)Nuclease-Free Water：5微升。 (4)atp(3 000 Ci/mmol at 10 mCi/ml)：1微升。 (5)T4 Polynucleotide Kinase(5-10 u/微升)：1微升。 (6)总体积10微升。 (7)按照上述反应体系依次加入各种试剂，加入同位素后，Vortex混匀， ...

相关专题 1. 什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验? 凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA复合物或RNA复合物比 ...

相关专题 组别1为阴性对照;组别2中生物素标记的检测基因(LXRE2)与蛋白结合，出现条带迁移;组别3中没有标记的基因(LXRE)竞争性与蛋白结合，LXRE2条带不迁移;组别4中对LXRE进行突变，LXRE2条带重新发生迁移。从实验结果可以明确LXRE2为与调控蛋白特异结合的位点。 标签: 广州赛诚生物 EMSA 转录调控 作者：广州赛诚生物 点击：次

人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL）是Kjeldsen等人于1993年在中性粒细胞的特殊颗粒中首先发现的。以往的研究表明NGAL与炎症、胚胎发育、免疫应答、趋化作用、信号转导以及多种肿瘤的发生与发展等过程密切相关。NGAL在乳腺癌、食管癌、结直肠癌、胃癌、慢性粒细胞性白血病等细胞系中均过表达，并在癌细胞的浸润与不良分化中发挥重 ...

相关专题 缓激肽是一种含有9种氨基酸的生理和药理活性肽，由蛋白质的激肽基团衍生而来。激肽是可以促使血管舒张、血管通透性增强、一氧化氮释放和花生四烯酸流动的效应因子。它是血压、肾功能和心脏功能的重要调节因子，还参与炎症反应。缓激肽可引起血管扩张，从而导致血压降低。 因此，对这种激素肽的变化进行高灵敏度、高选择性和高准确度地定量，并将其作为疾病进展或药物治疗的评估指标，将会极为有利。尽管以往都是通过配体结合试验(LBAs)对 ...